携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒及其构建方法和应用技术

一种携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒，缺失E1区和E3区，在缺失区插入了锌指核酸酶表达元件和供体DNA。构建方法由构建腺病毒骨架载体、构建携带锌指核酸酶表达元件的腺病毒E3区穿梭载体、构建携带供体DNA的腺病毒E1区穿梭载体、构建携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒载体、包装和扩增以及纯化步骤组成，携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒在制备治疗遗传性疾病药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒及其构建方法和应用。
技术介绍
基因组的靶向修饰包括对基因组内源性基因序列的改造或者在基因组的特定位置插入外源性基因片段。这项技术为研究特定基因功能提供了有力工具，此外研究人员可以利用该技术建立特定的动物模型来进行基因功能研究或新药物的研发。传统的基因靶向修饰技术是依赖于自然状态下的同源重组(Homologous recombination, HR),效率非常低，大约为10_6,因而大大限制了该技术的应用。锌指核酸酶(Zinc finger nuclease, ZFN)技术的出现给基因组靶向修饰带来了希望。ZFN技术是近年来发展起来的一项新的技术，通过人工设计的ZFN在基因组DNA的特定位置切割产生双链断裂(DSB)，继而通过细胞内源性的修复机制对断裂部位的基因进行修饰。同自然状态下的同源重组技术相比较，ZFN技术可以使基因组靶向修饰的效率提高了 IO3 IO5倍。ZFN介导的基因定点修饰已经在多种体外培养的细胞中获得成功，包括人的胚胎干细胞(embryonic stem cell, ES)和诱导性多本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒，其特征在于：缺失E1和E3区，在缺失区插入了锌指核酸酶表达元件和供体DNA。

【技术特征摘要】
2012.11.09 CN 201210447965.61.一种携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒，其特征在于:缺失El和E3区，在缺失区插入了锌指核酸酶表达元件和供体DNA。2.根据权利要求1所述的携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒，其特征在于:在缺失的El区插入供体DNA、在缺失的E3区插入锌指核酸酶表达元件，或在缺失的El区插入锌指核酸酶表达元件、在缺失的E3区插入供体DNA。3.根据权利要求1或2所述的携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒，其特征在于:所述的锌指核酸酶表达元件是由真核启动子与其下游的锌指核酸酶基因和转录终止信号组成。4.根据权利要求3所述的携带锌指核酸酶表达元件和供体DNA的腺病毒，其特征在于:所述的真核启动子是Tet-on诱导性启动子，该Tet-on诱导性启动子由以下结构组成:7个重复的四环素反应元件，在该重复序列两端连接有启动子核心元件，包括左侧的miniCMV和右侧的tightminiCMV，在左侧miniCMV的下游连接有rtTA2S_M2转录因子和SV40pA，在右侧tight miniCMV的下游插入一对锌指核酸酶基因，在锌指核酸酶基因的端连接有转录终止信号；所述的两个锌指核酸酶基因间通过自剪切多肽相连；所说的转录终止信号是 SV40pA、TKpA 中的一种； miniCMV的序列如下:GGTACCCGGGTCGAGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTGGAGACGCCATCCACGCTGTTTTGACCTCCATAGAAGACACCGGGACCGATCCAGCCTCCGCGGCCCCGAATTC tight miniCMV的序列如下:GGTCGACTAGGCGTGTACGGTGGGAGGCCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCGAATTCC05.根据权利要求1或2所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏海滨，张伟锋，刘思也，
申请(专利权)人：陕西师范大学，
类型：发明
国别省市：