紫背天葵叶片一步成苗高效离体繁殖方法技术

本发明专利技术涉及一种药食同源濒危植物秋海棠科紫背天葵一步成苗高效离体繁殖方法。本发明专利技术所述的方法包括：培养基准备，采用调整后的培养基，包括配制、分装和灭菌；采用紫背天葵无菌苗叶片为外植体，直接进行无菌接种；将接好种的培养瓶移入培养室，在适宜的条件下培养70~80天，单个外植体诱导成苗数20株以上；不经炼苗，将再生植株开瓶移栽至适宜的条件培养，商品种苗成活率达100％。根据本发明专利技术所述的方法，紫背天葵组织培养成苗再生周期短，有效保持原种特性，显著提高无性繁殖系数，且操作简便，培养程序简单，明显降低育苗成本，可作为秋海棠科紫背天葵优质种苗工厂化生产的有效技术。

Begonia fimbristipula leaves one step seedling, in vitro propagation method

The invention relates to a medicinal and edible plants Begoniaceae Begonia fimbristipula one-step efficient in vitro propagation method. The method of the invention includes: culture medium prepared by medium after adjustment, including preparation, packaging and sterilization; using Semiaquilegia sterile seedlings as explants, direct aseptic inoculation; will connect the culture bottle into the culture room, under the suitable conditions of cultivation for 70~80 days, single the number of seedling explants of more than 20 plants; without acclimatization, the regenerated plant transplanting to open a bottle of suitable culture conditions, the commodity seed survival rate reached 100%. According to the method of the invention, Semiaquilegia tissue culture seedling regeneration cycle is short, effectively maintain the original characteristics, significantly improve the coefficient of asexual reproduction, and the operation is simple, training program is simple, can significantly reduce the cost of breeding, as Begoniaceae Begonia fimbristipula quality effective seedling in factory production.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及珍稀濒危植物快繁育苗的组织培养方法，具体涉及对药食同源植物秋海棠科紫背天葵的叶片组织培养的一步成苗快速繁殖方法。
技术介绍
紫背天葵(Begonia fimbristipulata Hance)为秋海棠科秋海棠属肉质草本植物，中国特有物种，别名丹叶、红天葵、散血子，常见于海拔20(Tl 120 m的沟谷地带、悬崖石缝或疏林下长有苔藓的潮湿岩石上，喜温暖湿凉气候，一般呈簇生或丛生的居群分布，伴生植物有苔藓、小型蕨类、灌木等。紫背天葵在广东的深圳、东莞、肇庆和蕉岭等地均有分布，但以肇庆鼎湖山的紫背天葵最为有名，其模式标本即采自广东鼎湖山。紫背天葵分布虽广，但被限制在特殊的生境中，以云海雾气、烟云缭绕的山谷石壁处生长最佳，种群呈离散性分布，种群数量极易受到环境变化的影响。紫背天葵叶富含花色苷，其味酸涩、性凉，既可入药，亦可作保健饮品，具清热解毒、止渴生津、活血消肿、润燥止咳的功效，全株具有较高的观赏价值和药用保健价值。然而，由于其险峻的适生环境、较低的生物产量，加上长期的破坏性采摘，导致野生资源日益枯竭，现已被《中国的珍稀植物》一书评估为漸危物种的低危等级(LowerRisk, LR)。紫背天葵种子繁殖萌发率极低，通过球茎进行分株繁殖系数较低、难以满足市场的需求。利用组织培养技术是加快紫背天葵大规模繁殖的有效途径。现有文献通常取其无菌苗叶片为外植体，进行胚状体的细胞诱导，或通过愈伤组织的诱导和再分化形成不定芽，或由不定芽、球茎芽或球茎等紫背天葵离体组织或器官分化出丛生芽，然后再转接到生根培养基诱导生根，最后形成完整的植株。再生植株(通常称为瓶苗)仍需要经过炼苗程序后才可移栽，最终形成商品种苗。可见，迄今紫背天葵的快繁技术仍然沿用传统的组织培养方式，要经过初代培养、继代培养、生根培养和炼苗移栽等多个阶段，程序繁琐，费工耗时，存在育苗周期长，种质易产生变异，成本`较高等缺点。因此，有必要研究其简便、高效的一步成苗技术。一步成苗法就是外植体在脱分化后，不需要转移到分化培养基上，而是直接在原培养基上再分化，分化的顺序通常是先根后芽，直至形成健壮的全苗。它具有再生周期短，再生频率高，易操作，培养程序简单，不影响增殖率，保持原种特性和便于大规模生产等良好特征。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种濒危植物紫背天葵一步成苗快速繁殖技术，达到一次外植体诱导即得到大量商品幼苗的效果。它能够显著简化育苗程序、缩短育苗周期、提高无性繁殖系数、降低了变异频率、而且操作简便，是实现紫背天葵优质种苗工厂化生产的有效途径。同时，可为同类植物的增殖与生根一体化繁殖提供技术依据。本专利技术所述的一种，包括以下步骤:(I)培养基准备，包括:配制、分装、灭菌；所述培养基的配制是:每升MS基本培养基中添加6-苄氨基嘌呤即6-BA 0.25 0.5 mg、α -萘乙酸即NAA 0.4 0.8 mg、吲哚丁酸即IBA 0.2mg、卡拉胶7 g、鹿糖3(T40 g,混合后培养基的pH调节至6.0 ;所述培养基的分装是:将配制后的培养基加热至琼脂完全溶解，趁热均匀地分装于干净的培养瓶中；所述培养基的灭菌是:将加入培养基的培养瓶在121°C、105 Kpa下灭菌15分钟，灭菌后冷却备用；(2)外植体处理和接种，包括:采用紫背天葵无菌苗叶片为外植体，直接进行无菌接种，即在无菌条件下，将组织培养无菌苗置于无菌工作台上切取叶片，将叶片接种于准备好的培养基上，无菌密封瓶口 ；(3)培养，包括:将接好种的培养瓶移入培养室进行幼苗的诱导与培养，形成健壮的紫背天葵再生苗丛，用于开瓶移栽；(4)再生植株移栽:不经炼苗，将步骤(3)得到的再生植株直接开瓶移栽至适宜的条件培养。根据本专利技术所述的方法的进一步特征，所述步骤(I)中，所述培养基为:每升MS基本培养基中添加 6-BA 0.25、.5 mg、NM 0.4^0.8 mg、IBA 0.2 mg、卡拉胶 7g、鹿糖 30 40g。根据本专利技术所述的方法的进一步特征，所述步骤(2)中，采用叶径为0.fl.5 cm的紫背天葵无菌苗叶片为外植体，直接进行无菌接种。根据本专利技术所述的方法的进一步特征，所述步骤(3)中，幼苗的培养条件为:温度为25±1 °C，光照强度为8 10 μ mol.m^2.s—1，光照时间为每天10小时，培养时间为7(Γ80天。培养期间勤检查，发现污染苗及时去除。根据本专利技术所述的方法的进一步特征，所述步骤(3)中，所述苗丛开瓶移栽前，以15 μ mol.m_2.s—1光照强度加强光照10天。根据本专利技术所述的方法的进一步特征，所述步骤(4)中，簇生的组织培养苗直接或分散为带有3飞个植株的丛苗形式进行移栽。根据本专利技术所述的方法的进一步特征，所述步骤(4)中，移栽基质采用完全泥炭土，调节基质的pH缓冲范围在4.(Γ4.5之间。根据本专利技术所述的方法的进一步特征，所述步骤(4)中，移栽基质采用泥炭土:珍珠岩为3:1 C V/V)的混合基质，调节基质的pH缓冲范围在4.(Γ4.5之间。根据本专利技术所述的方法的进一步特征，所述步骤(4)中，移栽后的培养条件为:白天温度为25 V，晚上温度为22°C，也就是25°C /22°C (光/暗)；相对湿度为90%，光照强度15-18 μ mol.πΓ2.s'光照时间为每天12小时。根据本专利技术所述的方法的进一步特征，所述步骤(4)中，移栽后的培养液为自来水或者1/4 MS培养液。实验表明，上述移栽符合野生紫背天葵居群丛生的特性，种苗生长较快，35天后幼苗的成活率达到100%，且长势茁壮，因而人工培养的紫背天葵较好保持原种特征。本专利技术具有如下的优点和效果: 1、经实验证明，在本专利技术所述方法中，采用MS+0.25 0.5 mg/L 6-BA+0.4 0.8 mg/LΝΑΑ+0.2 mg/L IBA+30^40 g/L蔗糖+7 g/L卡拉胶作为紫背天葵一步成苗的诱导培养，外植体诱导为丛芽的发生率达到100%，单个外植体平均成苗数25 30株，组织培养苗生长良好，基本保持原种特性，品质地道。2、经实验证明，在本专利技术所述方法中，采用紫背天葵无菌苗叶片作为外植体，外植体的成活率达到100% (污染率 为零)，诱导率为93.7%以上，每个外植体都可以直接诱导并分化出多个不定芽点。3、经实验证明，在本专利技术所述方法中，外植体优选培养条件中，以光照强度10μ mol.m_2.s_S培养时间为7(T80 d，丛苗的生长质量状况最佳，单株叶数3飞片，球茎直径约1.7 3.5 mm,苗丛根系长度为2.(Γ3.8 cm,苗高2.5 3.3 cm。组织培养苗开瓶移栽前，适度加强光照(约15 μ mol.m_2.s—1) 10天左右，苗丛生长更为健壮。4、经实验证明，在本专利技术所述方法中，不经炼苗，簇生的组织培养苗可直接或分散移栽，移栽的成活率达到90%以上，其中，将簇生的组织培养苗分散为带有3飞个球茎的丛芽形式，移栽到[泥炭土:珍珠岩=3:1 (V/m的混合基质中培养，35天后丛苗的成活率达到100%，且长势茁壮。5、与现有的繁殖技术相比，本专利技术所述技术方法极显著简化了紫背天葵育苗程序，缩短育苗周期，提高无性繁殖系数，保持原种特性，培养程序简单，达到一次外植体诱导即获得大量商品幼苗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种紫背天葵叶片一步成苗高效离体繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）培养基准备，包括：配制、分装、灭菌；所述培养基的配制是：每升MS基本培养基中添加6?苄氨基嘌呤即6?BA?0.25~0.5?mg、α?萘乙酸即NAA?0.4~0.8?mg、吲哚丁酸即IBA?0.2?mg、卡拉胶7?g、蔗糖30~40?g，混合后培养基的pH调节至6.0；　所述培养基的分装是：将配制后的培养基加热至琼脂完全溶解，趁热均匀地分装于干净的培养瓶中；　所述培养基的灭菌是：将加入培养基的培养瓶在121℃、105?Kpa下灭菌15?分钟，灭菌后冷却备用；（2）外植体处理和接种，包括：采用紫背天葵无菌苗叶片为外植体，直接进行无菌接种，即在无菌条件下，将组织培养无菌苗置于无菌工作台上切取叶片，将叶片接种于准备好的培养基上，无菌密封瓶口；（3）培养，包括：将接好种的培养瓶移入培养室进行幼苗的诱导与培养，形成健壮的紫背天葵再生苗丛，用于开瓶移栽；（4）再生植株移栽：不经炼苗，将步骤（3）得到的再生植株直接开瓶移栽至适宜的条件培养。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邵玲，梁廉，梁广坚，
申请(专利权)人：肇庆学院，
类型：发明
国别省市：