一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法技术

本发明专利技术提供一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法，步骤包括：1)取绿花重瓣铁线莲幼茎的茎尖，在超净台上用无菌水冲洗、75％酒精浸泡处理20～30秒，再用0.1～0.2％升汞浸泡消毒6～10分钟，无菌水冲洗干净后接种到丛芽诱导培养基中进行初代诱导培养；2)将初代诱导培养得到的丛生芽分成单个小芽，接种到丛芽增殖培养基中进行继代培养；3)当芽苗长至2～3cm时接种到壮苗生根培养基中进行生根培养。本发明专利技术方法可以快速繁殖绿花重瓣铁线莲，不仅可以节约培育种苗成本、提高生产效率，而且不受外界条件的限制，四季皆可进行，节约育苗占地面积，可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。

Tissue culture rapid propagation method of green flower double Clematis

The present invention provides a green flower plena tissue culture propagation method, comprising the following steps: 1) the green flowers double Clematis stems stem apex, in the clean bench, washed with sterile water 75% alcohol soaking treatment for 20 to 30 seconds, and then 0.1 to 0.2% HgCl2 disinfection 6 ~ 10 minutes. Sterile water rinse after inoculation to bud induction medium was induced by primary culture; 2) will get the primary cultured buds into single bud, inoculated into buds proliferation medium for subculture; 3) when the shoots grow to 2 ~ 3cm when inoculated into seedling rooting medium rooting culture. The method of the invention can fast reproduction of green flowers plena, cultivate seedlings can not only save cost and improve production efficiency, but also can not be limited by external conditions, the four seasons can save seedling, covers an area of, in the short term, the formation of a large number of excellent plantlets, for large-scale, industrialized production.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
铁线莲(Clematis florida Thunb)为毛茛科、铁线莲属藤本植物。具有很高的观赏和药用功能，药用以根或全草入药。利尿，理气通便，活血止痛。用于小便不利，腹胀，便闭；外用治关节肿痛，虫蛇咬伤。我国是铁线莲的原产地，有100多个品种，生于低山区的丘陵灌丛中，多为单瓣铁线莲。重瓣铁线莲“ Clematis florida var.plena D.Don ”是铁线莲的一个变种，花朵颜色多样，外圈6片花瓣，内为细碎花瓣组成的“球”，具有极高的观赏价值。重瓣铁线莲是国际花卉园艺上一类重要垂直绿化材料，每年种苗交易量达数百万之多。绿花重瓣铁线莲更加珍贵，是花卉中少有的品种。绿花重瓣铁线莲花色新奇，花瓣为浅绿色有上百枚，整个花朵成绿色秀球，花径可达6厘米以上，三年生以上的植株可节节开花，具有极高的观赏价值和开发前景。绿花重瓣铁线莲不能产生种子，繁殖方式是采用压条、分株或扦插，繁殖速度很慢，限制了珍贵品种绿花重瓣铁线莲生产的发展。采用组织培养的方法可以快速繁殖珍贵品种绿花重瓣铁线莲，提供栽培种苗，具有重要的现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供。包括以下步骤: I)取绿花重瓣铁线莲幼茎的茎尖，在超净台上用无菌水冲洗、75%酒精浸泡处理20 30秒，再用0.1 0.2% 升汞浸泡消毒6 10分钟，无菌水冲洗干净后接种到丛芽诱导培养基中进行初代诱导培养；2)将初代诱导培养得到的丛生芽分成单个小芽，接种到丛芽增殖培养基中进行继代培养；3)当芽苗长至2 3cm时接种到壮苗生根培养基中进行生根培养； 采用的培养基配方如下: ①丛芽诱导培养基:MS+ 6-BA 1.0 2.0 mg/L + NAA 0.02 0.2 mg/L + KT 0.2 0.5 mg/L + 白糖 20 30g/L + 土豆 50g/L + 琼脂 0.3 0.5%, ρΗ5.6 5.8， ②丛芽增殖培养基:MS+ 6-BA 2.0 3.0 mg/L + NAA (λ I (λ 5 mg/L + KT (λ 5 1.0 mg/L + 白糖 20 30g/L + 蛋白胨 lg/L + 琼脂 0.3 0.5%, pH5.6 5.8， ③壮苗生根培养基:1/2MS+ 0.2 0.5mg/L NM + 0.2 0.5mg/L IBA +活性碳0.1%+ 白糖 20g/L + 蛋白胨 lg/L + 琼脂 0.3 0.5%，pH5.6 5.8 ; 培养条件如下: ①初代诱导培养 温度23°C 25°C，空气湿度60% 65%，光照50 100lx, 8h/d ； ②继代培养:温度24 26°C，湿度65% 70%，光照强度800 12001x，光照10h/d； ③生根培养:温度25 27°C，湿度65% 70%，光照强度1500 20001x，光照12h/d。1/2MS指MS培养基配方元素减半，配方元素不包括蔗糖和琼脂。本专利技术的显著优点: 绿花重瓣铁线莲采用幼茎的茎尖诱导产生丛芽成苗，具有生长繁殖速度快，能保持亲本的优良特性，种苗成品率高等优点，该品种快繁方法目前尚末见报道过。具体实施例方式实施例1 ，具体步骤如下: 1、外植体处理和接种 采集绿花重瓣铁线莲外植体茎尖，在超净台上用无菌水冲洗、75%的酒精处理30秒，再用0.1 %升汞浸泡消毒10分钟，无菌水冲洗干净后将茎尖接种于丛芽诱导培养基中。当丛芽产生后，转入丛芽增殖培养基再培养，不断扩大种苗数量。需要大苗时，将2 3 cm长的丛芽切下后转到壮苗生根培养基上培养，即生长成带根的绿花重瓣铁线莲试管苗。2、培养基配方:根据不同生育阶段其培养基最佳配方如下:①丛芽诱导培养基:MS + 6-BA 1.0 2.0 mg/L + NAA 0.02 0.2 mg/L + KT 0.2 0.5 mg/L + 白糖 20 30g/L + 土豆 50g/L + 琼脂 0.3 0.5%, ρΗ5.6 5.8。培养基添加激素量及激素组合6-ΒΑ+ΝΑΑ ；ΚΤ+ΝΑΑ ；6-ΒΑ+ΚΤ+ΝΑΑ ;虽然都能芽诱产生丛芽，但诱导丛芽率差异极显著，不加土豆汁和添加土豆汁诱导丛芽率差异也是极显著。因此试验结果该配方是最佳的组合。`②丛芽增殖培养基:MS+ 6-BA 2.0 3.0 mg/L + NAA 0.1 0.5 mg/L + KT0.5 1.0 mg/L + 白糖 20 30g/L + 蛋白胨 lg/L + 琼脂 0.3 0.5%, pH5.6 5.8。培养基添加激素量及激素组合6-ΒΑ+ΝΑΑ ；KT+NAA ;6_BA+KT+NAA ;丛芽都能增殖，但增殖倍数差异极显著，不加蛋白胨和添加蛋白胨丛芽粗壮差异极显著。因此试验结果该配方是丛芽增殖最佳的组合。③壮苗生根培养基:1/2MS+ 0.2 0.5mg/LNAA + 0.2 0.5mg/LIBA + 活性碳0.1% + 白糖 20g/L + 蛋白胨 lg/L + 琼脂 0.3 0.5%, ρΗ5.6 5.8。培养基添加激素量及激素NAA、IBA ;绿花重瓣铁线莲幼芽都能生根，但生根迟、早和数量差异极显著，不加蛋白胨、活性碳和添加蛋白胨、活性碳苗粗壮差异极显著。因此试验结果该配方是壮苗生根最佳的组合。配制方法按常规操作进行。2、培养条件设定 ①丛芽诱导培养:接种后置光照培养箱内或培养室内的培养架上培养，设定温度23°C 25°C ;空气湿度 60% 65% ;光照 50 100 lx，8h/d。②丛芽增殖培养:接种后置光照培养箱内或培养室内的培养架架上培养，设定温度24 26°C，湿度65% 70%，光照强度800 12001x，光照10h/d。③壮苗培养:接种后置光照培养箱内或培养室内的培养架上培养，设定温度25 27°C，湿度65% 70%，光照强度1500 20001x，光照12h/d。权利要求1.，其特征在于:包括以下步骤: I)取绿花重瓣铁线莲幼茎的茎尖，在超净台上用无菌水冲洗、75%酒精浸泡处理20 30秒，再用0.1 0.2%升汞浸泡消毒6 10分钟，无菌水冲洗干净后接种到丛芽诱导培养基中进行初代诱导培养；2)将初代诱导培养得到的丛生芽分成单个小芽，接种到丛芽增殖培养基中进行继代培养；3)当芽苗长至2 3cm时可以接种到壮苗生根培养基中进行生根培养； 采用的培养基配方如下: ①丛芽诱导培养基:MS+ 6-BA 1.0 2.0 mg/L + NAA 0.02 0.2 mg/L + KT 0.2 0.5 mg/L + 白糖 20 30g/L + 土豆 50g/L + 琼脂 0.3 0.5%, ρΗ5.6 5.8， ②丛芽增殖培养基:MS+ 6-BA 2.0 3.0 mg/L + NAA (λ I (λ 5 mg/L + KT (λ 5 1.0 mg/L + 白糖 20 30g/L + 蛋白胨 lg/L + 琼脂 0.3 0.5%, pH5.6 5.8， ③壮苗生根培养基:1/2MS+ 0.2 0.5mg/L NM + 0.2 0.5mg/L IBA +活性碳0.1%+ 白糖 20g/本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法，其特征在于：包括以下步骤:1)?取绿花重瓣铁线莲幼茎的茎尖，在超净台上用无菌水冲洗、75％酒精浸泡处理20～30秒，再用0.1～0.2％升汞浸泡消毒6～10分钟，无菌水冲洗干净后接种到丛芽诱导培养基中进行初代诱导培养；2)将初代诱导培养得到的丛生芽分成单个小芽,接种到丛芽增殖培养基中进行继代培养；3)当芽苗长至2～3cm时可以接种到壮苗生根培养基中进行生根培养；采用的培养基配方如下：①丛芽诱导培养基：MS?+?6?BA?1.0～2.0?mg/L?+?NAA?0.02～0.2?mg/L?+?KT?0.2～0.5?mg/L?+?白糖20～30g/L?+?土豆50g/L?+?琼脂0.3～0.5%，pH5.6～5.8，②丛芽增殖培养基：MS?+?6?BA?2.0～3.0?mg/L?+?NAA?0.1～0.5?mg/L?+?KT?0.5～1.0?mg/L?+?白糖20～30g/L?+?蛋白胨1g/L?+?琼脂0.3～0.5%，?pH5.6～5.8，③壮苗生根培养基：1/2MS?+?0.2～0.5mg/L?NAA?+?0.2～0.5mg/L?IBA?+?活性碳0.1%?+?白糖20g/L?+?蛋白胨1g/L?+?琼脂0.3～0.5%，?pH5.6～5.8；培养条件如下：①初代诱导培养：温度23℃～25℃，空气湿度60%～65%，光照50～100?lx，8h/d；②继代培养：温度24～26℃，湿度65%～70%，光照强度800～1200lx，光照10h/d；③生根培养：温度25～27℃，湿度65%～70%，光照强度1500～2000lx，光照12h/d。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张绪璋，叶月琴，魏道智，汤绍康，吴团结，陈三辉，吴雨英，吴枝泉，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：