一种南美星油藤快速繁殖的方法技术

本发明专利技术公开了一种南美星油藤快速繁殖的方法。本发明专利技术以南美星油藤当年生未木质化的枝条为外植体，经过外植体表面消毒、外植体培养诱导愈伤组织、愈伤组织诱导芽的分化和伸长、壮苗生根、炼苗移栽等步骤获得再生植株的一种方法，整个过程在可控条件下进行，不受季节限制，大大缩短了繁殖周期，增加了繁殖倍数，为满足对南美星油藤优质种苗的需求、加速南美星油藤良种的推广具有重要的现实意义，也可为以后南美油藤基因改良等研究提供一种高效可行的技术手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞工程组织培养
，具体涉及一种南美星油藤快速繁殖的方法。
技术介绍
南美星油藤(PlukenetiavolubilisL.)又名南美油藤、印加果、印加花生等，印加语称SachaInchi，为大戟科多年生常绿木质藤本油料作物，原产于南美洲安第斯山脉的热带雨林地区。该植物当年种植当年即可开花结实，2～3年即进入丰产期，盛产期长达10年以上。从南美星油藤种子中榨取的油含有较高的不饱和脂肪酸(尤其是亚麻酸和亚油酸)、VA和VE，对调整人体血脂、预防心血管疾病、保养肌肤防衰老等作用明显，广泛用于食品、制药、保健和化妆品等领域，被誉为“植物脑黄金”。此外，南美星油藤还可作为退耕还林地区替代树种，是一种极具开发和推广利用前景的经济油料作物。南美星油藤引入我国的时间较短，目前主要在云南西南部、贵州和海南少部分地区有种植。其种苗繁育主要为种子直接播种、嫁接和扦插繁殖等方式，种子播种虽在短时间内可获得大量幼苗，但因南美星油藤为异花授粉植物，种子播种遗传性状不稳定，难以保留亲本的优良性状；嫁接繁殖操作程序繁琐，技术要求高，不易掌握；扦插繁殖则需要大量枝条，且繁殖率较低，耗时较长，这在很大程度上影响了南美星油藤规模化、产业化的生产和市场化的要求。而植物组织培养技术具有繁殖系数高、繁殖时间短、改良植物品质、不受季节限制等优点，可有效地解决南美星油藤繁殖系数低、繁殖时间长等问题。目前，关于南美星油藤组织培养的研究仅见于以种子播种获得的无菌苗为实验材料，以无菌苗的顶芽为外植体，通过芽的诱导、增殖、生根及移栽等方式达到微繁的目的，繁殖效果不理想。公开号为CN104798684A的中国专利文献公开了一种南美星油藤的组织培养快繁方法，以南美星油藤带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了南美星油藤离体再生植株。该方法虽成功地获得了南美星油藤离体再生植株，但是其不定芽的诱导率不高(92.7％)，也未对外植体进行愈伤组织的诱导及分化等研究。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种南美星油藤育苗的方法。本专利技术提供的南美星油藤育苗的方法包括如下步骤：(1)将南美星油藤的外植体在愈伤组织诱导培养基上进行诱导培养，得到愈伤组织；(2)将所述愈伤组织在愈伤组织诱导分化培养基上进行诱导分化培养，得到不定芽；(3)将所述不定芽在壮苗生根培养基上进行壮苗生根培养，得到南美星油藤幼苗。上述方法中，所述南美星油藤的外植体为南美星油藤枝条；所述南美星油藤枝条为当年生未木质化的南美星油藤枝条；所述愈伤组织诱导培养基中的溶质包括IBA、6-BA和TDZ；所述愈伤组织诱导分化培养基中的溶质包括IBA、CCC和TDZ；所述壮苗生根培养基中的溶质包括IBA和AC；所述愈伤组织诱导培养基中的IBA、6-BA和TDZ的质量比为1：(1-10)：(1-10)；所述愈伤组织诱导分化培养基中的IBA、CCC和TDZ的质量比为1：(1-3)：(1-10)；所述壮苗生根培养基中的IBA和AC的质量比为(0.1-1)：1。上述方法中，所述愈伤组织诱导培养基是将基础培养基、IBA、6-BA、TDZ、蔗糖和凝固剂混匀得到的培养基；所述愈伤组织诱导分化培养基是将基础培养基、IBA、CCC、TDZ、蔗糖和凝固剂混匀得到的培养基；所述壮苗生根培养基是将基础培养基、IBA、AC、蔗糖和凝固剂混匀得到的培养基。上述方法中，所述愈伤组织诱导培养基和所述愈伤组织诱导分化培养基中的基础培养基为MS培养基，其配方如下：NH4NO31.65g/L,H3BO36.2mg/L,CaCl2332.2mg/L,CoCl2﹒6H2O0.025mg/L,CuSO4﹒5H2O0.025mg/L,EDTA二钠二水合物37.26mg/L,FeSO4﹒7H2O27.8mg/L,MgSO4180.7mg/L,MnSO4﹒H2O16.9mg/L,Na2MoO4﹒2H2O0.25mg/L,KI0.83mg/L,KNO31.9g/L,KH2PO4170mg/L,ZnSO4﹒7H2O8.6mg/L。所述壮苗生根培养基中的基础培养基可以是上述MS培养基，也可以是MSvit培养基，所述MSvit培养基的配方如下：NH4NO31.65g/L,H3BO36.2mg/L,CaCl2332.2mg/L,CoCl2﹒6H2O0.025mg/L,CuSO4﹒5H2O0.025mg/L,EDTA二钠二水合物37.26mg/L,FeSO4﹒7H2O27.8mg/L,甘氨酸2mg/L,MgSO4180.7mg/L,MnSO4﹒H2O16.9mg/L,Na2MoO4﹒2H2O0.25mg/L,肌醇100mg/L,尼克酸0.5mg/L,KI0.83mg/L,KNO31.9g/L,KH2PO4170mg/L,盐酸吡哆醇0.5mg/L,盐酸硫胺素0.1mg/L,ZnSO4﹒7H2O8.6mg/L。上述方法中，所述IBA在所述愈伤组织诱导培养基中的浓度为0-1.0mg/L；所述6-BA在所述愈伤组织诱导培养基中的浓度为0-1.0mg/L；所述TDZ在所述愈伤组织诱导培养基中的浓度为0.5-2.0mg/L；所述IBA在所述愈伤组织诱导分化培养基中的浓度为0-2.0mg/L；所述CCC在所述愈伤组织诱导分化培养基中的浓度为0-1.0mg/L；所述TDZ在所述愈伤组织诱导分化培养基中的浓度为0-1.0mg/L；所述IBA在所述壮苗生根培养基中的浓度为0-2.0mg/L；所述AC在所述壮苗生根培养基中的浓度为0-1.0mg/L。上述方法中，所述凝固剂为琼脂；所述IBA在所述愈伤组织诱导培养基中的浓度为0.5mg/L；所述6-BA在所述愈伤组织诱导培养基中的浓度为1.0mg/L；所述TDZ在所述愈伤组织诱导培养基中的浓度为0.5mg/L；所述IBA在所述愈伤组织诱导分化培养基中的浓度为0.1mg/L；所述CCC在所述愈伤组织诱导分化培养基中的浓度为0.1mg/L；所述TDZ在所述愈伤组织诱导分化培养基中的浓度为0.1mg/L；所述蔗糖在所述愈伤组织诱导培养基和所述愈伤组织诱导分化培养基中的浓度均为30g/L；所述琼脂在所述愈伤组织诱导培养基、所述愈伤组织诱导分化培养基和所述壮苗生根培养基中的浓度均为8g/L；所述IBA在所述壮苗生根培养基中的浓度为0.1mg/L；所述AC在所述壮苗生根培养基中的浓度为1g/L；所述蔗糖在所述壮苗生根培养基中的浓度为40g/L。上述方法中，所述培养基的pH均为5.8-6.0。上述方法中，所述培养的条件均为：温度23-27℃，相对湿度55-60％，光照强度40μmolm-2·s-1，光照时间12h/d。上述方法中，所述在愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导培养前还包括消毒的步骤；所述壮苗生根培养后还包括炼苗移栽的步骤。本专利技术的另一个目的是提供上述愈伤组织诱导培养基或上述愈伤组织诱导分化培养基或上述壮苗生根培养基。本专利技术还有一个目的是提供一种用于南美星油藤育苗的试剂盒。本专利技术提供的用于南美星油藤育苗的试剂盒包括上述愈伤组织诱导培养基和/或上述愈伤组织诱导分化培养基和/或上述壮苗生根培养基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种南美星油藤育苗的方法，包括如下步骤：(1)将南美星油藤的外植体在愈伤组织诱导培养基上进行诱导培养，得到愈伤组织；(2)将所述愈伤组织在愈伤组织诱导分化培养基上进行诱导分化培养，得到不定芽；(3)将所述不定芽在壮苗生根培养基上进行壮苗生根培养，得到南美星油藤幼苗。

【技术特征摘要】
1.一种南美星油藤育苗的方法，包括如下步骤：(1)将南美星油藤的外植体在愈伤组织诱导培养基上进行诱导培养，得到愈伤组织；(2)将所述愈伤组织在愈伤组织诱导分化培养基上进行诱导分化培养，得到不定芽；(3)将所述不定芽在壮苗生根培养基上进行壮苗生根培养，得到南美星油藤幼苗。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述南美星油藤的外植体为南美星油藤枝条；所述南美星油藤枝条为当年生未木质化的南美星油藤枝条；所述愈伤组织诱导培养基中的溶质包括IBA、6-BA和TDZ；所述愈伤组织诱导分化培养基中的溶质包括IBA、CCC和TDZ；所述壮苗生根培养基中的溶质包括IBA和AC；所述愈伤组织诱导培养基中的IBA、6-BA和TDZ的质量比为1：(1-10)：(1-10)；所述愈伤组织诱导分化培养基中的IBA、CCC和TDZ的质量比为1：(1-3)：(1-10)；所述壮苗生根培养基中的IBA和AC的质量比为(0.1-1)：1。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述愈伤组织诱导培养基是将基础培养基、IBA、6-BA、TDZ、蔗糖和凝固剂混匀得到的培养基；所述愈伤组织诱导分化培养基是将基础培养基、IBA、CCC、TDZ、蔗糖和凝固剂混匀得到的培养基；所述壮苗生根培养基是将基础培养基、IBA、AC、蔗糖和凝固剂混匀得到的培养基。4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述IBA在所述愈伤组织诱导培养基中的浓度为0-1.0mg/L；所述6-BA在所述愈伤组织诱导培养基中的浓度为0-1.0mg/L；所述TDZ在所述愈伤组织诱导培养基中的浓度为0.5-2.0mg/L；所述IBA在所述愈伤组织诱导分化培养基中的浓度为0-2.0mg/L；所述CCC在所述愈伤组织诱导分化培养基中的浓度为0-1.0mg/L；所述TDZ在所述愈伤组织诱导分化培养基中的浓度为0-1.0mg/L；所述IBA在所述壮苗生根培养基中的浓度为0-2.0mg/L；所述AC在所述壮苗生根培养基中的浓度为0-1.0mg/L。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述凝固剂为琼脂；所述IBA...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋希强，于旭东，王榜琴，马香，李霖明，余文刚，钟云芳，杨泽秀，张哲，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：海南;46