包含PGA的新的EMD制剂制造技术

釉基质衍生物(EMD)蛋白和釉基质蛋白因其促进软组织和硬组织再生并降低炎症和感染而广泛用于临床牙科。本发明专利技术涉及意料不到的发现，即包含纯化的釉基质衍生物(EMD)蛋白和/或釉基质蛋白和已灭菌丙二醇藻酸酯(PGA)的药物、牙科和/或美容制剂随时间推移更稳定，尤其pH随时间推移更稳定，其中所述已灭菌PGA获自重量平均分子量(MW0)介于250-500kDa的未灭菌PGA。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含PGA的新的EMD制剂专利技术的
本专利技术涉及包含纯化的釉基质蛋白和/或釉基质衍生物(EMD)蛋白的药物、牙科和/或美容制剂。具体地讲，本专利技术涉及稳定制剂，所述制剂包含釉基质蛋白和/或釉基质衍生物(EMD)蛋白和重量平均分子量为至少130kDa的已灭菌丙二醇藻酸酯(PGA)。
技术介绍
存在于釉基质中的釉基质蛋白，作为釉质的前体最为人所熟知。在牙骨质形成之前，釉基质蛋白在发育中的牙根顶端的齿根表面上沉积。有证据显示，沉积的釉基质是牙骨质形成的引发因素。此外，牙骨质的形成在本质上与牙周韧带和牙槽骨的发育有关。釉基质蛋白因此可通过模拟牙的天然附着发育而促进牙周再生(GestreliusS,LyngstadaasSP,HammarströmL.Emdogain-periodontalregenerationbasedonbiomimicry(Emdogain——基于仿生学的牙周再生).ClinOralInvest4:120-125(2000))。分离的釉基质蛋白不仅能够诱导在釉基质附近发育的组织中天然存在的一个因子，而且能够诱导精心安排的因子级联。它们模拟发育组织的天然环境，因此模拟组织再生、细胞分化和/或成熟的天然刺激。来自猪釉基质蛋白质的纯化的酸提取物形式的釉基质衍生物(EMD)，以前曾成功用于恢复患有严重牙附着丧失的患者的功能性牙周韧带、牙骨质和牙槽骨(Hammarström等，1997，JournalofClinicalPeriodontology24，658-668)。已经表明釉基质衍生物(EMD)制剂促进牙周再生(Hammarström等，1997，JournalofClinicalPeriodontology24，669-677)。在该研究中使用不同的制剂，目的是为了弄清楚结果是否会因所用的制剂而不同。该研究表明，当将EMD溶于PGA时，得到最令人满意的结果。例如，US5098891首次描述了用于通过在含有来源于牙釉质前体(所谓的釉基质)的蛋白质部分作为活性组分的至少一个部分上再生出矿化组织，而用于诱导矿化组织部分之间的结合的组合物。此外，在对培养的牙周韧带细胞(PDL)的研究中，表明了当EMD存在于培养物中时，这些细胞的附着率、生长和代谢显著增加。此外，暴露于EMD的细胞显示当与对照相比时，胞内cAMP信号转导和生长因子的自分泌产生增加。另一方面，虽然当EMD存在时，cAMP信号转导和生长因子分泌增加，但是上皮细胞的增殖和生长两者被抑制(Lyngstadaas等,2001,JournalofClinicalPeriodontology28,181-188)。以前在专利文献中描述了釉基质蛋白和釉基质衍生物(EMD)蛋白能够诱导硬组织形成(即釉质形成，美国专利号4,672,032(Slavkin))；支持硬组织间的结合(EP-B-0337967和EP-B-0263086)；促进开放性创伤(例如皮肤和粘膜的开放性创伤)愈合；对感染和炎性疾病的治疗具有有益作用(EP-B-1059934和EP-B-1153610)；诱导牙质再生(WO01/97834)；促进移植物的接纳(take)(WO00/53197)；在肿瘤治疗中诱导细胞凋亡(WO00/53196)；调节对全身感染或炎症的免疫应答中的失衡(WO03/024479)，并且有助于填充手术(procedure)和/或创伤(例如细胞减少性手术)后的创伤腔和/或组织缺陷(WO02/080994)。EMD由多种蛋白质组成，例如珐琅蛋白、釉蛋白(enamelin)、tuft蛋白、蛋白酶和白蛋白。珐琅蛋白，一种EMD的主要组分，至少高达60%-90%，例如70-90%，是通过可变剪接和受控分泌后加工而可来源于单个基因的疏水蛋白质的家族。它们在整个脊椎动物进化中是高度保守的，在所有已研究的高等脊椎动物(80%)中显示高的序列同源性整体水平。实际上，猪和人珐琅蛋白基因转录物的序列仅在4%的碱基中不同。因此，釉基质蛋白和/或EMD蛋白虽然来源于猪，但当在人体中遇到时仍被视为是“自身”的，可在不引发变态反应或其它不良反应的情况下促进人的牙再生。釉基质衍生物蛋白(EMD)是最有名的釉质的前体。其用PGA增稠的水溶液以商品名Straumann®Emdogain市售。在Straumann®EmdogainPlus中还可找到用PGA增稠的釉基质衍生物蛋白(EMD)水溶液。为了将EMD保持在水溶液中，该溶液应具有充分低于蛋白质等电点(IEP)的pH，对于EMD，IEP为pH6.5，因此，更优选的是溶液的pH<5.0。为了易以应用，该溶液用PGA增稠。在化学上，PGA是海藻酸的酯，海藻酸来源于海藻(海草)。一些羧基被丙二醇酯化，一些被合适的碱中和，而一些保持游离。PGA本身是酸性的，在将PGA溶于EMD溶液后pH下降。在酸性条件下，由于PGA降解所致pH继续下降。混合物的耐久性取决于EMD能够沉淀在牙齿表面上的pH值。认为沉淀发生在生理条件下，即接近IEP的pH下。牙根环境和EMD-PGA混合物两者的pH和缓冲能力影响EMD蛋白的沉淀行为，用PGA配制的EMD溶液的接近IEP的pH和较低的缓冲能力有利于沉淀。D.J.McHugh在HYPERLINKhttp://www.fao.org/docrep/x5822e/x5822e04.htm中描述了藻酸酯的聚合度(DP)是分子的平均分子量的衡量，并且是每平均链中糖醛酸单元的数目。DP和分子量与藻酸酯溶液的粘度直接有关；贮存时粘度的损失是藻酸酯解聚程度的衡量。PGA以不同等级产生，等级通常描述为低、中和高粘度藻酸酯(是指2%水溶液中的粘度)。PGA藻酸酯的分子量越高，其溶液的粘度越大。生产商可通过改变提取条件的严格性来控制分子量(聚合度，DP)，他们提供范围为10-1000mPa.s(1%溶液)，DP范围为100-1000单位的产品。粘度200-400mPa.s(“中等粘度”)的PGA，可能得到最广泛的应用。已知比起具有低DP的PGA，具有高DP的PGA较不稳定。将低粘度PGA(至多约50mPa.s)贮存在10-20℃下，3年无可观察得到的变化。中等粘度藻酸钠(至多约400mPa.s)显示在25℃下1年后损失10%，在33℃下在一年后损失45%，较高粘度藻酸酯甚至更不稳定。丙二醇藻酸酯显示在25℃下在一年后粘度损失约40%，并且还变得较不稳定。藻酸铵一般比上述任一种都较不稳定。海藻酸是所述产品中最不稳定的，且在环境温度下在几个月内，任何长链材料都降解成较短的链。然而，包含短链材料的藻酸酯是稳定的，且DP为约40单位糖醛酸/链的海藻酸在20℃温度下一年内将显示极少的变化。然而，海藻酸的主要用途，作为药物片剂中的崩解剂，取决于当浸湿时其膨胀的能力，并且这不受DP变化的影响。市售藻酸酯应保存在阴凉处，即在25℃或更低的温度下，因为高温可引起显著解聚，影响商业上的有益性质，例如粘度和胶凝强度。所述藻酸酯通常含有10-13%水分，解聚速率随水分比例增加而增加，因此贮存区应是干燥的。如上所述，预先将EMD蛋白在具有PGA的水溶液中配制，其中PGA的降解提供酸性产品，其进而随时间推移而降低pH。在高温下，降解加快。为了避免产品酸化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.10.15 SE 1051082-41.包含釉基质蛋白和/或釉基质衍生物蛋白的药物、牙科和/或美容制剂，其中所述制剂包含范围为3重量/体积%(w/v%)-6重量/体积%(w/v%)的已灭菌丙二醇藻酸酯，且其中所述已灭菌丙二醇藻酸酯的重量平均分子量(MW)范围为130kDa-250kDa。2.权利要求1的药物、牙科和/或美容制剂，其包含范围为3重量/体积%(w/v%)至6w/v%且重量平均分子量等于135kDa的已灭菌丙二醇藻酸酯。3.权利要求1的药物、牙科和/或美容制剂，其中所述已灭菌丙二醇藻酸酯的重量平均分子量(MW)等于185kDa。4.权利要求1的药物、牙科和/或美容制剂，其中所述已灭菌丙二醇藻酸酯获自对起始重量平均分子量(MW0)为250-500kDa的未灭菌丙二醇藻酸酯进行电子束灭菌。5.权利要求4的药物、牙科和/或美容制剂，其中所用电子束灭菌剂量选自25-30kGy范围内的剂量。6.权利要求1的药物、牙科和/或美容制剂，其中所述釉基质蛋白和/或釉基质衍生物蛋白包含至少60%具有介于18与25kDa之间平均分子量的珐琅蛋白。7.权利要求6的药物、牙科和/或美容制剂，其中所述釉基质蛋白和/或釉基质衍生物蛋白包含60-70%具有介于18与25kDa之间平均分子量的珐琅蛋白。8.权利要求1的药物、牙科和/或美容制剂，其中所述制剂在至少18个月时间内的pH大于3.5。9.权利要求8的药物、牙科和/或美容制剂，其中所述制剂在24个月时间内的pH大于3.5。10.权利要求8的药物、牙科和/或美容制剂，其中所述制剂在2-8℃的温度范围内的pH大于3.5。11.权利要求1的药物、牙科和/或美容制剂，其中所述制剂还包含一种或多种药学可接受的赋形剂、药学上可接受的载体或其组合。12.权利要求1的药物、牙科和/或美容制剂，其中以釉基质蛋白和/或釉基质衍生物蛋白和已灭菌丙二醇藻酸酯而不包括其它赋形剂的总的组合重量计，所述釉基质蛋白和/或釉基质衍生物蛋白的量的范围为94%-97%重量/体积。13.权利要求1的药物、牙科和/或美容制剂，其还包含一种或多种非釉基质蛋白和/或釉基质衍生物蛋白活性剂。14.权利要求1的药物、牙科和/或美容制剂，其包含至少两种表面稳定剂。15.权利要求14的药物、牙科和/或美容制剂，其中所述表面稳定剂选自离子型表面稳定剂。16.权利要求15的药物、牙科和/或美容制剂，其中所述离子型表面稳定剂为阴离子表面稳定剂、阳离子表面稳定剂或两性离子表面稳定剂。17.药物组合物，其包含前述权...

【专利技术属性】
技术研发人员：L加拉姆切吉，A维塔尔，
申请(专利权)人：斯特劳曼控股公司，
类型：
国别省市：