一种具有高转化率的反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶改造基因及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种具有高转化率的反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶改造基因及其应用。通过优化指孢囊菌（Dactylosporangiumsp.RH1）中反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶（GenBankID:D78338.1）的核苷酸序列，构建优化基因的表达载体，通过原核表达，收集菌体作为转化反应的酶源，实验结果表明，以L-脯氨酸为底物，生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的转化率高达91%。本发明专利技术可用于生物法生产反式-4-羟基-L-羟脯氨酸，具有较好的工业应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种具有高转化率的反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶改造基因及其应用，属于基因工程和酶工程领域。
技术介绍
反式-4-轻基-L-脯氨酸(L-轻脯氨酸，trans-4-hydroxy-L-proline,Hyp)不属于20种常见的氨基酸，是羟化酶对脯氨酸羟基化修饰的结果，主要存在于胶原蛋白中，其作用是加强了结缔组织的弹性和韧性。胶原蛋白含量最丰富的材料为骨胶和明胶。骨胶、明胶中羟脯氨酸含量为10-10.5%，脯氨酸含量为12-13%。近些年来，Hyp的研究和开发已经引起医药、生化、食品及美容业等方面的广泛关注。在医药领域，Hyp具有多种生理功能与独特的生物活性，既可作为各种软组织疾病的药物，如结缔组织受损、风湿性关节炎等，又可加快伤口愈合，以及治疗各种皮肤疾病；作为氨基酸注射液的重要组分，它对急慢性肝病所导致的低蛋白血症有一定的疗效；Hyp参与脂肪的乳化及红细胞血红素和球蛋白的形成，具有调节脂肪乳化等作用；它还是多种药物，如第三代抗生素、抗肿瘤、抗高血压及新型胃药等的合成原料。它具有减肥作用，可望成为比较理想的减肥药物。在化妆品添加剂领域，由于其具有抗氧化、抗辐射的作用，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有高转化率的反式?4?羟基?L?脯氨酸羟化酶改造基因序列，其特征在于核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种具有高转化率的反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶改造基因序列，其特征在于核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。2.含有权利要求1记载的反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶改造基因的工程菌的构建方法，其特征在于:将所述改造基因构建于表达载体中，并转化到大肠杆菌中；所述表达载体为 pET-28a 或 pET-M-3C，所述大肠杆菌为 E.coli BL21 (DE3)或 BL...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玮，鞠建松，薛张伟，张金秀，王立安，张琳琳，李天云，张庆，陈娇娇，
申请(专利权)人：河北博伦特药业有限公司，河北师范大学，
类型：发明
国别省市：