一种利用SSR分子标记对五节芒与荻杂交种进行快速鉴定的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用SSR分子标记对草本能源植物五节芒与荻的种间远缘杂交种进行快速鉴定的方法。选取植株的幼嫩叶片，蒸馏水清洗后采用常规CTAB法提取基因组DNA，基于PCR的SSR分子标记分析各个地区五节芒和荻分别具有的特异性条带，筛选出1对合适的SSR标记，该标记在五节芒中产生一个特异性条带（100bp左右），同时在荻中产生另一个特异性条带（123bp左右），而在两者的杂交后代中则表现为共显性，因此该SSR标记可用于五节芒与荻杂交后代的分子鉴定。利用本发明专利技术的方法可以快速准确地鉴定五节芒和荻的杂交种的真实性。本发明专利技术为五节芒与荻的杂交提供了一种操作简单、快速准确、重复性好、不受环境因素影响的鉴定方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物杂交种鉴定
，具体涉及一种芒属植物杂交种分子鉴定方法。
技术介绍
芒属植物(Miscanthus)为禾本科、多年生高大草本C4植物,作为最具发展潜力的能源植物日益受到关注。中国是芒属植物的起源与分布中心，具有丰富的野生资源、生态类型多。芒属植物适应性广、抗逆性强、产量高、净能产出高、生物质品质好、转化利用途径广、生态价值好等特点，适合在边际土地上种植利用，是一种兼具生态效益与经济效益的草本能源植物。芒属植物中的荻(Miscanthus Sacchariflorus)在我国东北、西北、华北及华东均有分布，抗逆性强，自然衰老，在耐盐碱方面表现显著，可作为改良盐碱的先锋植物，但生物质产量较低。五节芒(Miscanthus Floridulus)分布于长江中下游及以南区域,具有植株高大，生物质产量高，其茎及叶可为造纸原料，叶幼嫩时可做饲料，但抗旱、耐寒能力较弱，且不能自然衰老等特点。作为能源植物必须具备高生物质产量、高环境适应能力、低生产成本和产品的低含水量等特性，因此荻和五节芒单独作为能源植物的利用价值不大。开展五节芒和荻作的人工杂交研究，是利用荻和五节芒的各自优本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用SSR分子标记对五节芒与荻杂交种进行快速鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）基因组DNA的提取待测的五节芒与荻杂交种植株提取DNA；2）SSR?PCR反应加入HAU?170号引物进行SSR?PCR，引物序列如下：正向引物序列:5“?TGCATGGTTGCTTCAGCAGT?3“,反向引物序列:5“?ACAGAA?ACCAATGCATGTGATGAG?3“；3）非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳PCR反应产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；4）银染和条带分析。

【技术特征摘要】
1.一种利用SSR分子标记对五节芒与荻杂交种进行快速鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)基因组DNA的提取 待测的五节芒与荻杂交种植株提取DNA ； 2)SSR-PCR 反应 加入HAU-170号引物进行SSR-PCR，引物序列如下: 正向引物序列:5’ -TGCATGGITGCTTCAGCAGT-3’， 反向引物序列:5’-ACAGAA ACCAATGCATGTGATGAG-3’ ； 3)非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 PCR反应产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳； 4)银染和条带分析。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于， 步骤I)的具体过程为: 待测的五节芒与荻杂交种植株长到4-5叶时，采用CTAB法提取叶片DNA，所提取的DNA溶解于pH8.0的TE溶液中，4°C保存备用。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于， 步骤2)的SSR-PCR反应体系为: PCR 反应体积为 15ii L，其中包括=IOXBufferL 5u L,25mmol I71 的 MgCl2L 5 u L,IOmmol L-1 的 dNTPs0.3u L,5U u L-1 的 Taq 聚合酶 0.1 y L, 20_25ng.u L-1 的 DNA 模板2uL,2umol L-1的引物1....

【专利技术属性】
技术研发人员：易自力，朱玉叶，艾辛，蒋建雄，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：