本发明专利技术涉及医学生物检测技术领域。本发明专利技术提供的一种辅助上皮性卵巢癌（EOC）早期诊断的HOST2检测试剂盒，是由反转录系统、引物系统和扩增系统组成，其中的HOST2特异性的qRT-PCR的上游引物如SEQ?ID?NO:2所示，下游引物如SEQ?ID?NO:3所示。本发明专利技术的试剂盒利用实时定量PCR方法，通过检测血浆或血清中HOST2含量以早期辅助诊断EOC，具有创伤性小、操作性强等特点。本发明专利技术还进一步地提供了上述辅助早期诊断EOC的HOST2检测试剂盒的检测方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学生物检测
，具体涉及一种辅助上皮性卵巢癌早期诊断的H0ST2试剂盒，及其在辅助上皮性卵巢癌的早期诊断中的应用和检测方法。
技术介绍
上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer, EOC)是最常见的卵巢癌，约占80-90%，是目前死亡率最高的妇科恶性肿瘤，高达70%。由于卵巢位于盆底深部，这给卵巢癌的早期诊断造成诸多困难，在临床诊断时，70%的卵巢癌已是晚期(Luesley, D.，LawtonF., Blackledge G., Hi I ton C.，Kelly K., Rollason T., Wade-Evans Τ., JordanJ., Fielding J., Latief Τ..Failure of second-look laparotomyto influence survivalin epithelial ovarian cancer.Lancet.1988，2 (8611): 599-603.)。因此，EOC 的诊断是妇科肿瘤学家面临的最严峻挑战之一。虽然CA125是目前被认为对上皮性卵巢癌较为敏感的肿瘤标 id (Nagele, F.，Petruj E.，Medlj Μ.，Kainzj C.，Graf, A.Η.，Seveldaj P..Preoperative CA125: an independent prognosticfactor in patients with stage Iepithelial ovarian cancer.0bstet Gynecol.1995，86 (2): 259-264.)，但迄今为止，并没有特异性强能够辅助诊断EOC的生物学指标。因此，目前诊断EOC方面的突破主要针对多肿瘤标记联合检测，以提高EOC的检出率及其敏感性和特异性(Husseinzadeh N..Status oftumor markers inepithelial ovarian cancer has there been any progress A review.Gynecol Oncol.2011，120(1):152-157.)。长链非编码RNA (Long noncoding RNA，LncRNA)是一类长度大于200个碱基的功能性RNA分子，占人类基因组4-9%。LncRNA缺乏编码蛋白的能力，但能够在多种层面上调控其他基因的表达，参与细胞内诸多生物过程。由于自身分子长度，LncRNA具有一定的调控特色:既可以通过核酸序列一级结构与其他基因结合，又可以通过复杂的高级空间结构与蛋白因子相互作用；另外它们整体保守性较差，有利于维持自身功能的长期存在。目前许多研究表明，LncRNA广泛参与机体多种生理病理过程，其特异性表达和/或表达变化与恶性肿瘤的发生发展密切相关(Lee，J.T..Epigenetic regulation by long noncodingRNAs.Science.2012.338(6113):1435-1439.)DLncRNA特异性表达可作为肿瘤的生物标志物，对于LncRNA能否作为临床检测指标，已有诸多集中于癌症诊断、预后方面的研究报道，如前列腺癌中高表达的LncRNADD3，可辅助 PSA 用于早期诊断(Kusuda，Y.，Miyake, H.，Kurahashij Τ.，and Fujisawa, M.Assessment of optimal target genes for detectingmicrometastases in pelvic lymphnodes in patients with prostate cancer undergoingradical prostatectomy byreal-time reverse transcri ptase-polymerase chain reaction.Urol Oncol.2011.18.[Epub ahead of print]);肝细胞性肝癌中的LncRNA MVIH，可作为治疗的潜在靶点，并且其表达下调可以在一定程度上预测复发率(Yuan，S.X., Yang, F.，Yang，Y.，Tao，Q.F.，Zhang, J.，Huang, G.，Wang, R.Y.，Yang, S.，Huoj X.S.，Zhang, L.，Wang F.，SunS.Η., Zhou ff.P..Longnoncoding RNA associated with microvascular invasion inhepatocellularcarcinoma promotes angiogenesis and serves as a predictorfor hepatoceIlularcarcinoma patients' poor recurrence-free survival afterhepatectomy.Hepatology.2012.56 (6): 2231-2241.)。目前已知的是，短链非编码 RNA,如microRNA,在血浆、血清等体液中的表达非常稳定。这一结论为LncRNA应用于体液检测领域奠定基础。2003年，Rangel等人利用RACE技术，即进行cDNA末端快速克隆的方法，在EOC组织中发现一个特异性转录本H0ST2，长度约3000个碱基，没有开放式可读框，不能编码蛋白质，属于 LncRNA (Rangel L.B., Sherman-BaustC.A., Wernyj R.P., Schwartz D.R., ChoK.R., Morin P.J..Characterization of novel human ovarian cancer-specifictranscripts (HOSTs) identified by serialanalysis of gene expression.0ncogene.2003，22(46):7225-7232.)。文献并未就该特异性转录本H0ST2展开深入研究，至今也没有其他相关报道。目前，尚无其他检测H0ST2的方法问世，尚无H0ST2作为EOC生物学标记物的文献。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种辅助上皮性卵巢癌早期诊断的H0ST2试剂盒，本专利技术的另一目的是提供该H0ST2试剂盒在辅助上皮性卵巢癌的早期诊断中的应用，以及相应的检测方法。本专利技术人首先采集了 50例EOC患者的新鲜血液作为实验组，对照组选择35例良性卵巢上皮性肿瘤患者的新鲜血液，将所有样品分为两部分，一部分抗凝处理后取血浆，另一部分促凝处理后取血清。分别检测两组血浆及血清中H0ST2的表达情况，结果发现血浆和血清的数据差异无统计学意义，对照组血浆或血清中H0ST2的含量极其微弱，个别样品甚至无法检测出，但是实验组H0ST2的含量远远高于对照组13倍左右。这个结果说明H0ST2的含量变化可作为早期辅助诊断EOC的重要方法之一。本专利技术人认为以聚合酶链式反应(qRT-PCR)为基础技术，通过检测患者血浆或血清中H0ST2的表达来实现早期辅助诊断EOC是完全可行的。本专利技术提供的一种辅助上皮性卵巢癌早本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种辅助上皮性卵巢癌早期诊断的HOST2检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒是由反转录系统、引物系统和扩增系统组成，其中的反转录系统由反转录酶、反转录体系缓冲液和RNA酶抑制剂组成；扩增系统由SYBR?Premix?ExTaqTM试剂组成；引物系统由总RNA反转录随机引物和HOST2特异性的qRT?PCR的上、下游引物组成；HOST2特异性的qRT?PCR的上游引物如SEQ?ID?NO:2所示，HOST2特异性的qRT?PCR的下游引物如SEQ?ID?NO:3所示。
【技术特征摘要】
1.一种辅助上皮性卵巢癌早期诊断的H0ST2检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒是由反转录系统、引物系统和扩增系统组成，其中的反转录系统由反转录酶、反转录体系缓冲液和RNA酶抑制剂组成；扩增系统由SYBR Premix ExTaqTM试剂组成；引物系统由总RNA反转录随机引物和H0ST2特异性的qRT-PCR的上、下游引物组成； H0ST2特异性的qRT-PCR的上游引物如SEQ ID NO:2所示， H0ST2特异性的qRT-PCR的下游引物如SEQ ID NO:3所示。2.根据权利要求1所述的一种辅助上皮性卵巢癌早期诊断的H0ST2检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒的具体组成如下: A)总RNA反转录引物，I管，浓度:10μΜ，100μI/管； B)qRT PCR上游引物，I管，浓...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘善荣，惠宁，高原，刘淑鹏，余喜亚，胡晶晶，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：
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