一种棘孢木霉菌株制造技术

一种棘孢木霉菌株（Trichodermaasperellum），保藏号为CGMCCNo.5201。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物
，尤其涉及一种具对葡萄灰霉病有高拮抗木霉菌株。技术背景葡萄灰霉病主要危害花序、幼果和将要成熟的果实，也可侵染果梗、新梢与幼嫩叶片。葡萄灰霉病是由半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、葡萄孢属AoiiTii1S cinerea pers. ex Fr.侵染引起的。该病原菌是一种寄主非常广泛的兼性寄生真菌，它可寄生多种水果、蔬菜与花卉，因此该病菌的侵染原十分广泛。对于该病，常规手段是采用喷洒灭虫剂来防治葡萄灰霉病。在中国专利 CN101543217中披露了将含有嘧菌环胺和戊唑醇的杀菌组合物用来防治葡萄灰霉病，中国专利CN101731245提供了一种含有嘧菌环胺和戊唑醇的杀菌组合物用于防治该病，中国专利CN101779638提供一种含有嘧霉胺和乙烯菌核利的杀菌剂用于治疗该病。此外，中国专利CN1730455和CN1730456也分别披露了利用合成的间苯三酚乙酰基衍生物用于治疗葡萄灰霉病。在治疗葡萄灰霉病农药使用过程中常存在用量大的问题，用量少了达不到防治灰霉病的效果，长期大用量使用农药会对葡萄生长环境产生破坏影响。虽然在短时间内可以取得很好的防止葡萄灰霉病的效果，但长久来看将农药作为防治灰霉病方法将会被淘汰。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决目前防治葡萄灰霉病的化学农药量多且农药对环境会产生影响，提供一种产孢量多、高效防治葡萄灰霉病的木霉菌株。本专利技术提供的木霉菌株属于棘孢木霉(Trichoderma asperellum)菌株,具有防治葡萄灰霉病的特性。该菌株于2011年8月31日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏号为CGMCC No. 5201。保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号。棘孢木霉菌株具有以下性质 本专利技术棘孢木霉菌株的分生孢子阶段为半知菌门，丝孢纲，丝孢目，丛梗孢科，木霉属，其有性态是属于子囊菌门子囊菌纲。菌株培养特性本专利技术棘孢木霉菌株在PDA培养基上最适合的生长温度为30°C，在30°C下生长48小时形成菌落的半径约为47mm。菌株不产生扩散性色素，无明显气味，菌落反面为奶油色。本专利技术的棘孢木霉菌株的液体培养法为，在培养瓶中加入培养液并接种孢子悬浮液，在30°C环境下振荡培养，4天后便可收获大量的孢子。在孢子中添加等体积比的硅藻土抽滤并干燥可长久保存。本专利技术棘孢木霉菌落形态培养条件为在15 35°C下黑暗环境下培养7小时。在PDA 培养基中，棘孢木霉菌最适合生长温度为30°C。在25°C下，菌丝生长速度最快。在PDB培养基内，在30°C的温度下，棘孢木霉菌的分生孢子产量最大。菌株微观形态特性参照图广图3，本专利技术棘孢木霉菌株的分生孢子簇呈棉絮状，有可见的单个的分生孢子梗分枝，至顶端可育。在分生孢子簇内，分生孢子梗上的瓶梗呈现对称分布，顶端有两个或多个瓶梗，瓶梗宽度为2. 8^5. 4 μ m,主轴顶端下面生出的初次分枝常对生，与主轴夹角近 90°。随着离顶端距离的增加，初次分枝的长度也增加；二次分枝能够产生第三次分枝。瓶梗典型地产生于初次、二次、三次分枝的顶端，较少直接产生于初次和二次分枝中部，2 3个瓶梗呈旋涡状排列。瓶梗直、安瓿形，仅在中部稍微加粗，其长度为7. fll.3ym，中部宽度为3· (Γ5. 5 μ m,基部宽度为2· (Γ3. 5 μ m,基部稍微有缢缩。分生孢子球形或亚球形或卵圆形，大小为 3. 7^6. 0X3. 0 5· Ομπι。系统发育学鉴定通过PCR (Polymerase Chain Reaction,多聚酶链式反应)对本专利技术棘孢木霉菌株进行系统发育学的鉴定，确定棘孢木霉菌株的进化关系。将引物ITS4和ITS5扩增到ITS1-5. 8S-1TS2区序列，从而得到1158bp的序列段， 通过NCBI Gen Bank建立的DNA序列数据库中数据进行比对，1158bp的序列段与棘孢木霉的相似度达到100%。1158bp 的 ITS 序列如下 GGAAGTAAAAGTCGTA ACAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGAACCAACCAAACTCTTTCTG81TAGTCCCCTCGCGGACGTATTTCTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAATTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTTGGGGATCGGGACCCCTCACACGGGTGCCGGCCCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACTTTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGA。提供采用引物Ef728和Tefl a R扩增Tefl a序列到1090bp的序列段，通过NCBI Gen Bank建立的DNA序列数据库中数据进行比对，1090bp的Tefl a序列与棘孢木霉的相似度达到100%。1090bp 的 Tefl a 序列如下TTCATCATTTTTGGCACAGTCATATGCCCGACAATTCTGCTCTCA GTTTTTGTCTTTTTTTTCCAGCGTCACCCCGCTTTGCCAGTCTACCTACCCCTCCTTTGGCACAGCAAAAATTTTCT GGCTGCCCTTGTTTGGCTTTTAGTGGGGTGTCAAATTTTTTGGCAGCAACCCCGCTATCGCCACTGCACCTCTTCCA TCACCCACCACATGCTATTTGCTCAATCGCGTCGTCTTTTTTTGTTCATTATGCTGATCATGCTTCAATCAATAGGA AGCCGCCGAACTCGGCAAGGGTTCCTTCAAGTATGCGTGGGTTCTTGACAAGCTCAAGGCCGAGCGTGAGCGTGGTA TCACCATCGACATTGCCCTCTGGAAGTTCGAGACTCCCAAGTACTATGTCACCGTCATTGGTATGTTTTGGACTCTT CTCTCTAGCTATCGACATTCCAAGTCCGCCATTCTAACATGCTCTTCCCACAGACGCTCCCGGTCACCGTGATTTCA TCAAGAACATGATCACTGGTACCTCCCAGGCTGACTGCGCTATCCTGATTATCGCTGCCGGTACTGGTGAGTTCGAG GCTGGTATCTCCAAGGATGGCCAGACCCGTG本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种棘孢木霉菌株（Trichoderma?asperellum），该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC?No.5201。

【技术特征摘要】
1.一种棘孢木霉菌株 aspereJJw ),该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张钰，王承芳，旷文丰，干华磊，陈娟，毛伟力，
申请(专利权)人：上海万力华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：