本发明专利技术公开了一种制备脑钠肽的方法，该方法包括：改造全基因合成人源化脑钠肽编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；将改造后的脑钠肽编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；所得菌体破菌，离心分离，过Ni-NTA柱纯化；本发明专利技术制备脑钠肽操作非常简单，制备成本低，成品产率高，纯度高而且具有高生物活性，作为抗原物质可进行动物免疫，筛选相关抗体，同时为尽快建立国内临床化学诊断急需的校准品制备平台，研制诊断试剂标准物质和参考品奠定基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程和蛋白表达领域，涉及一种用生物工程技术高效制备脑钠肽的方法，产物可作为抗原物质进行动物免疫，筛选相关抗体，同时为临床化学诊断所需校准品、标准物质和参考品的制备开发奠定基础。
技术介绍
脑钠妝(BrainNatriuretic Peptide, BNP)又称 B 型利钠妝(B-typeNatriureticPeptide)、脑利钠肽,是继心钠肽(ANP)后利钠肽系统的又一成员，它主要来 源于心室，心室负荷和室壁张力的改变是刺激BNP分泌的主要条件。BNP的清除有两条途径一是由利尿钠肽家族的C型受体介导，内吞入胞内后由溶酶体降解；二是经中性内肽酶(NEP)降解。BNP的心血管作用BNP同ANP均是肾素血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的天然拮抗剂，亦抵制后叶加压素及交感神经的保钠保水、升高血压作用。BNP同ANP —起参与了血压、血容量以及水盐平衡的调节，提高肾小球滤过率，利钠利尿，扩张血管，降低体循环血管阻力及血浆容量，这些均起到维护心功能作用。BNP又不同于ANP，ANP主要在心房合成，在心房负荷过重或扩张时分泌增加，血浆浓度升高，主要反映肺血管压力的变化，而BNP主要在心室合成，在心室负荷过重或扩张时增加，因此反映心室功能改变更敏感、更具特异性。BNP对心功能的诊断价值心衰是多种疾病的终末阶段，心衰可分急性心衰(AHF)和慢性心衰(CHF)，CHF根据纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级分成1、I1、II1、IV级。I级心功能实际上无临床心衰症状，可称为左室功能不良(LVD)。基于BNP与心功能的密切关系，许多研究人员做了大量的工作以探讨它的临床应用。在CHF的病理生理改变及诊断中，BNP的重要性得到肯定。Mukoyama等报道CHF患者血浆BNP浓度较正常升高，且与心衰严重程度呈正比，目前关于BNP的临床研究主要集中在左室功能障碍(LVD)方面，这里的左室功能指收缩功能。无论正常人还是LVD患者，BNP均主要由左室心肌细胞合成分泌，进入小静脉回流至室间隔静脉通过冠状窦进入循环，其分泌主要由左室壁张力进行调节，LVD的严重程度与其分泌正相关，外周血BNP水平可反映心室分泌率及LVD程度。目前中、重度LVD依据临床检查较容易诊断，而轻度LVD (NYHA分级I级)却很难做到，但对LVD的确诊很重要，尤其对哪些心肌梗死后恢复正常的患者，静息状态下或运动后3分钟测量血浆BNP、ANP等肽类激素及cGMP浓度均高于正常对照组，但只有BNP具有显著统计学意义，且通过ROC曲线分析，发现BNP对正常与LVD的鉴别能力明显优于ANP及cGMP等，是利钠肽系统对LVD的最佳标记物。越来越多的文献支持在心肌梗死(MI)后测定BNP。这不仅可识别有无左心收缩功能不全，而且在判断左室重构和死亡危险方面可能优于心超声诊断。在临床实际工作中，BNP还有助于将心衰引起的气喘和其它原因引起的气喘区分开。正常BNP几乎可以排除左心功能不全引起的气喘。BNP对心脏病预后的评估作用传统上对心衰患者的长期监控是非常不完善的。如果有一个价廉的生化标志物来监控心衰，那将是非常有利的。BNP是否是这样的一个标志物？如果有床边的BNP试验，则有可能像糖尿病患者一样监控心衰患者。这方面BNP有很大潜力。Tsutamoto等对85名患有CHF的患者(EF < 45% )随访两年，比较BNP与ANP、cGMP等在CHF的预后评估方面的作用，发现血浆BNP在估计慢性CHF患者的病死率上优于ANP及cGMP，而且所提供的预后信息不依赖于其他如PCWP和LVEF等血流动力学指标。在老年人群中，升高的血浆BNP浓度与整个人群的病死率明显相关，无论是否患有明确的心血管疾病，均可通过测量血浆BNP对死亡率进行预测。血浆BNP水平与AMI后LVD程度呈正相关，且研究证明，BNP的分泌增加主要集中在梗死与非梗死区域交界的边缘地带，此处室壁机械张力最大，因此BNP可准确反映梗死局部室壁张力的变化，而张力又受到梗死面积、左室形态改变、心肌机械应力等因素影响，因此对心肌梗死后病人测量血浆BNP可以同时预测梗死区大小、左室功能。几篇报告都提出对于预测心肌梗死后左室重构的进程来说，血浆BNP测定是一种简便、准确、有用的生化指标，由于左室重构在临床表现及超声心动图不易发现，BNP的测定对于心肌梗死后危险度分级该是价优质好的筛选方法。BNP与血流动力学改变之间的关系已得到广泛的认同，BNP血浆浓度与心功能状态密切相关，正常BNP浓度可以在很在程度上否定存在心功能受损。大量的研究已经表明，BNP同可以用于诊断多种疾病引起的的LVD。但是，由于不同实验室条件不同，采取的测定方法和研究方法不尽相同，所得到的正常值均有差别，还需研究完善。而且要注意BNP不是特异性的诊断工具，因为升高的血浆BNP浓度并不一定由心衰引起，某些心肺疾病、肾衰、肝硬化等也可使血浆BNP浓度升高，应结合临床资料进行鉴别。尽管受到一定限制，但BNP对于心功能的诊断、预后判断及指导治疗已展示了良好前景。尤其是在筛选LVD以及心肌梗死后危险度评价方面显示出明显优越性。总之，随研究深入，血浆BNP浓度测定很有可能作为评估心功能的一项重要补充，成为一项简便易行的常规检查。我国幅员辽阔，人口众多，临床诊断试剂市场巨大，前景广阔。就国内的现状来说，我国的诊断试剂行业仍处于成长初期，即产品研发与生产的投入初期，成长期还没有真正到来，而我国诊断试剂市场规模约为全球市场的1/14，有较大的成长空间。研制价廉物美的诊断试剂产品无疑是非常必要且具重要意义的。目前国外的产品通常是把试剂、参考品(校准品、质控品)、仪器作为一个系统(封闭系统)推入市场，在检测重复性、准确性上有很大的优势，并且具有市场垄断性。国内主要的诊断试剂生产厂家几乎都没有生产相应质控品的经验和实力，市场上认可的国产产品寥寥无几。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种操作简单、制备成本低廉，成功率高的制备脑钠肽的方法。1.为实现上述目的，本专利技术一种制备脑钠肽的方法，该方法包括I)改造全基因合成人源化脑钠肽编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；2)将步骤I)中改造后的脑钠肽编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；3)将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；4)所得菌体破菌，离心分离，过N1-NTA柱纯化； 其中，步骤I)中改造后的全基因合成人源化脑钠肽编码基因序列为I ATGGACCCGC AGACCGCTCC GTCTCGTGCT CTGCTGCTGC TGCTGTTCCT GCACCTGGCT61 TTCCTGGGTG GTCGTTCTCA CCCGCTGGGT TCTCCGGGTT CTGCTTCTGA CCTGGAAACC121 TCTGGTCTGC AGGAACAGCG TAACCACCTG CAGGGTAAAC TGTCTGAACT GCAGGTTGAA181 CAGACCTCTC TGGAACCGCT GCAGGAATCT CCGCGTCCGA CCGGTGTTTG GAAATCTCGT241 GAAGTTGCTA CCGAAGGTAT CCGTGGTCAC CGTAAAATG本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备脑钠肽的方法，其特征在于，该方法包括：1)改造全基因合成人源化脑钠肽编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；2)将步骤1)中改造后的脑钠肽编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；3)将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；4)所得菌体破菌，离心分离，过Ni?NTA柱纯化；其中，步骤1)中改造后的全基因合成人源化脑钠肽编码基因序列为：1???ATGGACCCGC?AGACCGCTCC?GTCTCGTGCT?CTGCTGCTGC?TGCTGTTCCT?GCACCTGGCT61??TTCCTGGGTG?GTCGTTCTCA?CCCGCTGGGT?TCTCCGGGTT?CTGCTTCTGA?CCTGGAAACC121?TCTGGTCTGC?AGGAACAGCG?TAACCACCTG?CAGGGTAAAC?TGTCTGAACT?GCAGGTTGAA181?CAGACCTCTC?TGGAACCGCT?GCAGGAATCT?CCGCGTCCGA?CCGGTGTTTG?GAAATCTCGT241?GAAGTTGCTA?CCGAAGGTAT?CCGTGGTCAC?CGTAAAATGG?TTCTGTACAC?CCTGCGTGCT301?CCGCGTTCTC?CGAAAATGGT?TCAGGGTTCT?GGTTGCTTCG?GTCGTAAAAT?GGACCGTATC361?TCTTCTTCTT?CTGGTCTGGG?TTGCAAAGTT?CTGCGTCGTC?ACTAG...
【技术特征摘要】
1.一种制备脑钠肽的方法，其特征在于，该方法包括 1)改造全基因合成人源化脑钠肽编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子； 2)将步骤I)中改造后的脑钠肽编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达； 3)将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导； 4)所得菌体破菌，离心分离，过N1-NTA柱纯化； 其中，步骤I)中改造后的全基因合成人源化脑钠肽编码基因序列为I ATGGACCCGC AGACCGCTCC GTCTCGTGCT CTGCTGCTGC TGCTGTTCCT GCACCTGGCT61 TTCCTGGGTG GTCGTTCTCA CCCGCTGGGT TCTCCGGGTT CTGCTTCTGA CCTGGAAACC121 TCTGGTCTGC AGGAACAGCG TAACCACCTG CAGGGTAAAC TGTCTGAACT GCAGGTTGAA181 CAGACCTCTC TGGAACCGCT GCAGGAATCT CCGCGTCCGA CCGGTGTTTG GAAATCTCGT241 GAAGTTGCTA CCGAAGGTAT CCGTGGTCAC CGTAAAATGG TTCTGTACAC CCTGCGTGCT301 CCGCGTTCTC CGAAAAT...
【专利技术属性】
技术研发人员：张培影，
申请(专利权)人：张培影，
类型：发明
国别省市：
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