一种3’-cDNA展示方法技术

本发明专利技术公开了一种3’-cDNA展示方法，步骤为：(1)以总RNA(或者mRNA)为模板，以设计合成的Oligo?(dT)18V引物通过反转录合成cDNA双链；(2)将步骤(1)得到产物通过TaqⅠ内切酶进行酶切；(3)将步骤(2)产物与设计合成的“Y”形接头用T4连接酶连接；(4)以Oligo?(dT)18V及TaqⅠ“Y”形接头序列设计引物进行PCR扩增。(5)变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。本发明专利技术应用“Y”形接头与酶切片段连接，抑制非PolyA末端的cDNA扩增，让具有“Y”形接头及PolyA末端的cDNA得到指数扩增，排除了非PolyA末端cDNA的干扰，从而只扩增cDNA?3’末端序列，具有经济性好、效率高、可靠性强、冗余度低及假阳性低等优点，能够同时研究多个样本多个时期的生物体mRNA时空特异表达情况，是发掘基因的功能、探索生物发育机制等的有力工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域，尤其涉及一种3’ -CDNA展示方法。
技术介绍
对不同生物不同发育阶段的基因表达状况进行遗传分析，可以为研究生命活动过程提供十分重要的信息，研究基因在特定时期转录水平上的差异表达及表达丰度等情况。目前已有多种可在转录水平对差异表达基因筛选分析的方法，如DDRT-PCR、cDNA-AFLP和SSH等。但冗余度、假阳性高等问题依然制约着这些技术的广泛应用。mRNA 差异显不聚合酶链式反应技术(differential display of mRNA reversetranscription polymerase chain reaction, DDRT PCR),是由 Liang 等首先建立的。此技术是以PCR技术和聚丙烯凝胶电泳技术为基础，结合银染或放射性自显影等显色技术，能快速有效地鉴定并克隆两个或多个平行材料之间的差异表达基因，在植物研究方面已经取得了很多成果。现有技术一的缺点是假阳性高，效率较低。cDNA-AFLP是Bachem等在一种应用于基因组DNA的选择性扩增限制性片段即(Amplified Fragment Length Polymorp本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种3’?cDNA展示方法，其特征在于，该方法的主要步骤包括：(1)以总RNA?或者mRNA?为模板，以设计合成的Oligo?(dT)18V引物通过反转录合成cDNA双链；(2)将步骤(1)得到产物通过TaqⅠ内切酶进行酶切；(3)将步骤(2)产物与设计合成的“Y”形接头用T4连接酶连接；(4)以Oligo?(dT)18V及TaqⅠ“Y”形接头序列设计引物进行PCR扩增；(5)变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：贾定洪，郑林用，彭卫红，甘炳成，黄忠乾，谭伟，王波，谢丽源，
申请(专利权)人：四川省农业科学院土壤肥料研究所，
类型：发明
国别省市：