胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条制造技术

本实用新型专利技术公开了一种胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条，属于临床医学检验领域。该试纸条包括样品垫（2）、与所述样品垫（2）一端紧密相连的含有胶体金颗粒标记物的结合垫（3）、与所述结合垫（3）另一端紧密相连的硝酸纤维素膜（4）、以及与所述硝酸纤维素膜（4）的另一端紧密相连的吸水纸（5），所述样品垫（2）、结合垫（3）、硝酸纤维素膜（4）和吸水纸（5）均设置于底衬（1）上，所述胶体金颗粒标记物的结合垫（3）是胶体金颗粒标记胱抑素C抗体的结合垫（3），所述硝酸纤维素膜（4）上包被有另一抗人胱抑素C抗体的检测线（6）和包被有羊抗兔IgG控制线（7）。本实用新型专利技术试纸条具有操作简便、检测快速、灵敏度高等优点。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条
本技术属于临床医学检验领域，具体涉及一种胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条。
技术介绍
胱抑素C(Cystatin C)是半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族中的一员，是一种非糖基化的碱性蛋白，相对分子质量为13. 3%Da，等电点为8. 0-9. 5，由122个氨基酸组成。胱抑素 C基因无组织学特异性，广泛地存在各种体液中，如脑脊液、血液、唾液、精液等，机体胱抑素 C产生率相当恒定。而胱抑素C是一种低分子量蛋白质，可经肾小球自由过滤，肾脏是清除循环中胱抑素C的唯一器官，所以血清胱抑素C浓度主要由肾小球过滤率(glomerular filtration rate, GFR)决定，由此可见胱抑素C是一种理想的反映GFR变化的内源性标志物。胱抑素C在临床上被视为监测肾功能的一项高灵敏度、高特异性的指标。血清胱抑素C被认为是比肌酐、尿素氮等更理想、更灵敏的测定肾小球过滤率内源性指标；尿胱抑素C水平可以反映肾小球功能；另外胱抑素C在肾衰竭、肾移植、糖尿病肾病、高血压肾病等继发性肾病的早期检测机预后监测也有应用。胱抑素C最早采用单向免疫扩散法(RID)及酶免疫测定法(EIA)对胱抑素C含量进行测定，但这两种方法不仅费时，而且灵敏度也较差。较简单且更灵敏的放射、荧光及各种酶免疫测定(RIA、FIA及EIA)的方法能改善胱抑素C的可靠性，但测定时间较长，无法常规应用，更无法用于急诊测定。均相溶胶颗粒型免疫测定方法虽然有利于生化仪清洗，但是操作繁琐如需要两种试剂反应，测定时间较长，灵敏度不高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种操作简便、灵敏度高、能够快速检测的胱抑素C胶体金检测试纸条。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案一种胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条，包括样品垫、与所述样品垫一端紧密相连的含有胶体金颗粒标记物的结合垫、与所述结合垫另一端紧密相连的硝酸纤维素膜、 以及与所述硝酸纤维素膜的另一端紧密相连的吸水纸，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸均设置于底衬上，所述胶体金颗粒标记物为微信号放大系统，所述微信号放大系统为胶体金颗粒-亲和素-生物素抗人胱抑素C抗体复合物，所述硝酸纤维素膜上包被有另一抗人胱抑素C抗体的检测线和包被有羊抗兔IgG的控制线。所述胶体金颗粒粒径大小为35_60nm。所述胶体金颗粒-亲和素-生物素-抗人胱抑素C抗体复合物用量为6-10 μ g/2cm ο所述胶体金颗粒标记抗人胱抑素C抗体与硝酸纤维素膜上包被的另一抗人胱抑素C抗体为配对的单抗或配对单抗-多抗。所述结合垫材质为玻璃纤维素膜或聚酯膜。一种胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条的制备方法包括如下步骤(I)制备微信号放大系统a.将待标记亲和素预先在O. 01mol/L pH7. O的NaCl溶液中4°C透析过夜，然后 4°C高速离心30min，以O. lmol/L K2CO3调节胶体金溶液的pH至7. 5-8. 5，标记亲和素，形成胶体金标记亲和素；b.按常规方法制备生物素化抗人胱抑素C抗体；c.将步骤a得到的胶体金标记亲和素与步骤b得到生物素化抗人胱抑素C抗体连接，得到胶体金-亲和素-生物素-抗人胱抑素C抗体复合物，经过洗涤处理后，即得微信号放大系统；(2)将步骤⑴的胶体金-亲和素-生物素-抗人胱抑素C抗体复合物按用量为 6-10 μ g/cm2喷涂在结合垫上,干燥12小时以上,备用；(3)用包被缓冲液稀释另一种抗人胱抑素C抗体和羊抗兔IgG，将稀释后的两种抗体细致均匀地喷于硝酸纤维素膜上，两种抗体渗入硝酸纤维素膜后分别形成检测线和控制线.(4)在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸得到试纸板，按照要求切割成适当宽度的试纸条。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果(I)本专利技术在现有检测试纸条的基础上，采用了生物素-亲和素微信号放大系统， 在检测样品中胱抑素C过程中，扩大了胱抑素C的信号，增加检测灵敏度，避免因信号太弱而出现假阴或漏检；(2)本专利技术的试纸条具有操作简便(一步操作即可完成)和快速(检测时间5-8min) 等优点；(3)本专利技术的试纸条还可以与配套仪器结合实现定量检测。附图说明图I为本技术胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条结构示意图；其中，图I :1、底衬；2、样品垫；3、结合垫；4、硝酸纤维素膜；5、吸水纸；6、检测线； 7、控制线。具体实施方式以下结合附图和具体实施方式对本技术作进一步详细的说明。实施例I本专利技术胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条如图I所示，一种胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条，包括样品垫2、与所述样品垫2 —端紧密相连的含有胶体金颗粒标记物的结合垫3、与所述结合垫3另一端紧密相连的硝酸纤维素膜4、以及与所述硝酸纤维素膜4的另一端紧密相连的吸水纸5，所述样品垫2、 结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸5均设置于底衬I上，所述胶体金颗粒标记物为微信号放大系统，所述微信号放大系统为胶体金颗粒-亲和素-生物素抗人胱抑素C抗体复合物，所述硝酸纤维素膜4上包被有另一抗人胱抑素C抗体的检测线6和包被有羊抗兔IgG控制线7。本专利技术的试纸条，所述胶体金颗粒粒径大小为35-60nm ;胶体金颗粒-亲和素-生物素-抗人胱抑素C抗体复合物用量为6-10 μ g/cm2 ;胶体金颗粒标记抗人胱抑素C抗体与硝酸纤维素膜4上包被的另一抗人胱抑素C抗体为配对的单抗或配对单抗-多抗；结合垫材质为玻璃纤维素膜或聚酯膜。实施例2本专利技术试纸制备方法I.胶体金溶液制备a.配制O. 01%的氯金酸(HAuCl4)水溶液，将IL该溶液加热至沸。b.搅动下准确加入Iml lmol/L K2CO3溶液，I分钟后准确加入1%柠檬酸三钠 (Na3C6H5O7^H2O)水溶液 10ml。c.继续加热煮沸16分钟，观察到淡黄色的氯金酸水溶液在柠檬酸钠加入后很快变成灰色，继而变成黑色，随后逐渐变成深红色并稳定。d.冷却至室温后用蒸馏水恢复至原体积即1L;制成胶体金溶液，其中胶体金颗粒的粒径约为60nm。2.制备微信号放大系统a.制备胶体金标记亲和素将待标记亲和素预先在0.01 mol/L pH7. O的NaCl 溶液中4°C透析过夜，以除去多余的盐离子，然后4°C 10 000离心30min，除去聚合物；以O.lmol/L K2CO3调节胶体金溶液的pH至7. 5-8. 5，标记亲和素以形成胶体金标记亲和素；b.制备生物素化抗人IgG抗体先用6-氨基己糖与生物素连接制得长臂生物素， 再使其与抗人胱抑素C单克隆抗体——Cys Cl (购自上海叶民生物技术有限公司)结合，然后在碳二亚胺作用下将其与N-羟基丁二酰胺进行缩合，生成长臂生物素N-羟基丁二酰胺酯，即为生物素化Cys Cl，通过透析出去游离生物素；c.完成微信号放大系统将步骤a得到的胶体金标记亲和素和步骤b得到生物素化Cys Cl直接混合，连接得到胶体金-亲和素-生物素-Cys Cl复合物，经洗涤、离心处理后，即得微信号放大系统。3.将步骤2的胶体金-亲和素-生物素-Cys Cl复合物按用量为6-10 μ g/cm2 喷涂在玻璃纤维素膜3上，并在温度20-40°C，湿度10%-30%条件下烘干处理12小时以上， 备用;4.用包被缓冲液(主要成本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条，其特征在于包括样品垫（2）、与所述样品垫（2）一端紧密相连的含有胶体金颗粒标记物的结合垫（3）、与所述结合垫（3）另一端紧密相连的硝酸纤维素膜（4）、以及与所述硝酸纤维素膜（4）的另一端紧密相连的吸水纸（5），所述样品垫（2）、结合垫（3）、硝酸纤维素膜（4）和吸水纸（5）均设置于底衬（1）上，所述胶体金颗粒标记物的结合垫（3）是胶体金颗粒标记胱抑素C抗体的结合垫（3），所述硝酸纤维素膜（4）上包被有另一抗人胱抑素C抗体的检测线（6）和包被有羊抗兔IgG控制线（7）。

【技术特征摘要】
1.一种胱抑素C胶体金免疫层析检测试纸条，其特征在于包括样品垫(2)、与所述样品垫(2)—端紧密相连的含有胶体金颗粒标记物的结合垫(3)、与所述结合垫(3)另一端紧密相连的硝酸纤维素膜(4)、以及与所述硝酸纤维素膜(4)的另一端紧密相连的吸水纸(5)，所述样品垫(2)、结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水纸(5)均设置于底衬(I)上，所述胶体金颗粒标记物的结合垫(3)是胶体金...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏恩本，王勇，黄力，陈伟，周超，
申请(专利权)人：南京基蛋生物科技有限公司，
类型：实用新型
国别省市：