一种检验病原菌群体猝灭基因原核表达产物抗病能力的简易方法技术

本发明专利技术涉及一种检验病原菌群体猝灭基因原核表达产物抗病效果的简易方法，属于基因功能鉴定技术领域，包括原核表达重组蛋白液的制备、青枯菌液的制备、灌根接种、对照试验等步骤：含病原菌群体猝灭基因的阳性重组菌经过接种、培育、破碎、离心等过程处理后得到原核表达重组蛋白上清液；将青枯菌分离出白色致病菌落，培养后稀释成含菌量108cfu·mL-1的菌悬液；取上述原核表达重组蛋白液青枯菌液混合后，进行灌根接种；以只接种等量青枯菌的桉树苗做对照，混合接种青枯菌与AIIA蛋白的植株形态正常、枝叶挺拔，无明显的感病症状，说明病原菌群体猝灭基因原核表达产物有效降低青枯菌的致病力，延缓植株病症的发生；该检验方法简便，结果准确，实用性强，容易实施。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基因原核表达产物抗病效果的检验方法，具体涉及一种检验病原菌群体猝灭基因原核表达产物抗病效果的简易方法，属于基因功能鉴定

技术介绍
一般认为单细胞生物的细菌不存在信息交流的现象，多细胞生物间才有信息交 流。Nealson等在1970年首次报道了一种海洋费氏弧菌(Vibrio fischeri)菌体密度与生物发光呈正相关，该种菌的发光行为受细菌本身的群体感应调节系统所控制。1994年，Fuqua首先提出群体感应(quorum sensing,QS)的概念,其定义是指随着细菌个体密度的增大，细菌产生并向环境中释放一种特殊的类似信号分子的物质，当这种信号分子积累到一定量时，调控细菌产生统一的群体行为，如病菌基因的表达等，这种通过细菌信号分子调控自身群体行为的现象就称为细菌的群体感应。越来越多的研究发现，大多数细菌利用群体感应系统调控体内特定的功能。到目前为止的研究都表明，革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌都是通过信号分子调控群体某一特定功能的发挥，存在群体感应调控系统。研究发现充当细菌信号分子的物质是一种有机化学分子，他是由细菌自身产生并能通过一定的途径进入到环境中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检验病原菌群体猝灭基因原核表达产物抗病能力的简易方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）原核表达重组蛋白液的制备：取50?μL含病原菌群体猝灭基因的阳性重组菌接种至到5?mL含100?μg·mL?1?Amp的LB培养液中，160?rpm转速摇菌12?h；然后再取5?μL菌液接种到含100?μg·mL?1?Amp?5?mL?LB培养液中，200rpm转速摇至菌液OD600为0.6~1.0时，加入终浓度为0.4?mmol·L?1的IPTG，诱导培养9?h，室温下8,000?rpm离心5?min；将离心管中沉淀菌体重悬于预冷的PBS溶液中，用超声破碎法破碎菌体4?min，12,000?rpm离心1...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳乐军，黄真池，曾富华，李莉梅，李恒，
申请(专利权)人：湛江师范学院，
类型：发明
国别省市：