本发明专利技术提供一种粒状淡紫拟青霉生物杀线虫剂的制备方法，其包括如下步骤：准备菌株、制备菌种、第一次发酵、第二次发酵和造粒，所述方法中采用的培养基的组成为蔗糖、酵母、MgSO4、KCl、ZnSO4·7H2O和蒸馏水。通过对淡紫拟青霉生物杀线虫剂制备方法中各种工艺条件的选择，提供一种可大规模生产淡紫拟青霉生物杀线虫剂的方法，获得的淡紫拟青霉生物杀线虫剂的袍子产量高、生产成本低。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种生物杀线虫剂的制备方法，特别是淡紫拟青霉生物杀线虫剂的制备方法，属于淡紫拟青霉生物杀线虫剂制备领域。
技术介绍
在引起植物侵染性病害的四大病原中，植物寄生线虫的危害超过细菌和病毒，仅次于真菌病害。植物寄生线虫每年造成世界农业生产的损失约1000亿美元，其中根结线虫(Meloidogyne spp.)是危害最大的一类植物寄生线虫，每年仅对世界上重要的经济作 物造成的经济损失就高达数百亿美元。在根结线虫属(Meloidogyne)内，以南方根结线虫(M. incognita)、花生根结线虫(M. arenaria)、爪睡根结线虫(M. javanica)和北方根结线虫(M. hapla)四个种的根结线虫病害发生最为普遍，对大多数的粮食作物、油料作物、纤维作物、烟草、茶叶、果树、蔬菜、药材和花卉等均可造成严重损失。在控制该类病害的方法中，由于根结线虫通常存活于土壤中和植物根内，所以一般化学农药难以控制其危害，剧毒农药又对农产品生产的安全性构成严重威胁，而化学杀线虫剂只能在短期内控制线虫数量，同时还存在成本高、持效短和抗药性等问题。此外，一些传统的防治方法，如轮作、种植抗病品种等虽可起到一定的防治作用，但在实际生产中能够轮作的作物并不多，对根结线虫具有抗性的作物品种十分有限。因此，传统控制方法并不能解决该类病害。杀线虫生物农药由于其安全和高效而逐渐引起关注，具有非常广阔的应用价值和市场前景。其中，淡紫拟青霉(P. Iilacinus)是目前防治植物寄生线虫的最有前途的天敌真菌之一，具有广泛的研究和开发价值。淡紫拟青霉属真菌门半知菌纲丛梗孢目，可寄生许多植物病原线虫的卵及雌虫，包括危害最为严重的根结线虫(Meloidogyne spp.)和胞囊线虫(Heterodera spp.),国际马铃薯中心昆虫系Jatala博士 1979年首次报道,淡紫拟青霉对南方根结线虫的卵寄生率高达60%-70%。淡紫拟青霉菌株可在作物根际定殖，抵抗根际有害线虫侵染，对作物根际土壤微生物菌群产生一定影响，利于植物生长发育。虽然淡紫拟青霉的培养方法已经有较多研究，如中国专利CN101845398A中公开了一种淡紫拟青霉的培养方法，中国专利CN102286421A中公开了一种淡紫拟青霉的液体发酵培养方法，中国专利CN101671210A中公开了一种淡紫拟青霉生物肥药的制备方法，CN101165016A中公开了一种防治线虫危害的生物有机肥制备方法，CN1756482A中公开了一种粒状杀线虫剂的制造方法。但这些方法限于少量生产制备，规模化生产则受到限制。
技术实现思路
本专利技术为克服现有技术的不足，通过对淡紫拟青霉生物杀线虫剂制备方法中各种工艺条件的选择，提供一种可大规模生产淡紫拟青霉生物杀线虫剂的方法，获得的淡紫拟青霉生物杀线虫剂的袍子产量高、生产成本低。本专利技术通过如下技术方案实现一种，其包括如下步骤准备菌株、制备菌种、第一次发酵、第二次发酵和造粒，其特征在于，所述制备菌种中采用的培养基的组成为蔗糖、酵母、MgSO4, KC1、ZnSO4 · 7H20和蒸馏水；所述第一次发酵中的培养基的组成为蔗糖、酵母、MgS04、KCl、ZnS04 · 7H20和蒸馏水；所述第二次发酵中的培养基的组成为蔗糖、酵母、MgSO4、KCl、ZnS04 · 7H20 和蒸馏水。如上所述制备方法，所述制备菌种中采用摇瓶培养，其摇瓶装量< 150ml/500ml瓶、摇床转速为150rpm、培养温度为29 30° C、时间为72h。如上所述制备方法，所述第一次发酵中的发酵罐的接种量为4%体积比，发酵罐的装罐系数为O. 6-0. 7、温度为27-29° C、搅拌速度为200-300rpm，发酵周期为45-54小时。如上所述制备方法，所述第二次发酵中的发酵罐的接种量为4%体积比，发酵罐的装罐系数为O. 6-0. 7、温度为27-29° C、搅拌速度为200-300rpm，发酵周期为42-50小时。 如上所述制备方法，所述制备菌种中的培养基的组成为蔗糖15g，酵母6. 12g，MgSO4 O. 5g，KCl O. 5g，ZnSO4 · 7H20 IOmg 和蒸馏水 1000ml。所述培养基的 pH 优选为 6. 5。如上所述制备方法，所述第一次发酵中的培养基的组成为蔗糖15g，酵母6. 12g，MgSO4 O. 5g，KCl O. 5g，ZnSO4 · 7H20 IOmg 和蒸馏水 1000ml。所述培养基的 pH 优选为 6. 5。如上所述制备方法，所述第二次发酵中的培养基就的组成为蔗糖15g，酵母6.12g，MgSO4O. 5g，KCl O. 5g，ZnSO4 ·7Η20 IOmg 和蒸馏水 1000ml。所述培养基的 pH 优选为6. 5o本专利技术的有益效果本专利技术的方法每批次可获得杀线虫剂(微球制剂)250kg以上，每克微球制剂中有效成分含量> 107CFU/g制剂菌落数，微球制剂颗粒大小范围为4±lmm，千粒微球重量范围为10-15克，且生产成本低，可以大规模的生产粒状淡紫拟青霉生物杀线虫剂。具体实施例方式根据本专利技术的制备方法，其中菌株为淡紫拟青霉菌株，是可以购买得到的，也可以通过以下方法培养得到采用马铃薯琼脂培养基(PDA)，通过本领域技术人员已知的方法获得，所述培养中具体的参数选择如下菌株生长的温度范围为8-38° C，最佳为25-30° C ;菌株生长的pH为2-11，优选pH值为5-9。所述培养基的制备方法为马铃薯去皮后切成块，200g煮沸20min，纱布过滤后，向滤液中加葡萄糖20g，琼脂粉15g，用蒸馏水定容至1000ml，分装，高压蒸汽灭菌20分钟后备用。所述菌株可通过以下方法保存将上述获得的菌株采用普通试管PDA培养基块法，即切取生长在PDA培养基上生长良好的菌块放置在I毫升无菌离心管中，低温下(4° C)至少保存I年。根据本专利技术的制备方法，所述菌种的制备方法包括(I)菌种活化将低温保存的菌种转接至PDA培养基斜面上，28 30° C条件下培养3 4天，实现菌种的充分活化。活化培养后的菌种可接种摇瓶进行种子培养。(2)制备摇瓶菌种采用液体培养基，其组成为蔗糖、酵母、MgS04、KCl、ZnS04 · 7H20和蒸馏水。所述培养基可以使用如下的配方蔗糖15g，酵母6. 12g，MgS04 O. 5g,KCl O. 5g，ZnSO4 ·7Η20 IOmg,蒸懼水 1000ml, pH=6. 5。摇瓶培养的参数如下摇瓶装量< 150ml/500ml瓶，摇床转速为150rpm，培养温度为29 30° C，时间为约72h。接种时采用培养基块直接接种摇瓶即可，具体而言，接入直径O. 5mm培养基块4块到一个摇瓶即可。所得的菌种在PDA培养基上颜色正常，镜检无其他杂菌孢子存在，无细菌菌脓等杂质，无酸性气味存在。 根据本专利技术的制备方法，所述第一次发酵(也称为种子罐发酵)具体为采用液体培养基，其组成为蔗糖、酵母、MgSO4, KC1、ZnSO4 · 7H20和蒸馏水。所述培养基具体可以采用以下配方蔗糖15g，酵母6. 12g，MgSO4 O. 5g，KCl O. 5g，ZnSO4 · 7H20IOmg,蒸懼水 1000ml, 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种粒状淡紫拟青霉生物杀线虫剂的制备方法，其包括如下步骤：准备菌株、制备菌种、第一次发酵、第二次发酵和造粒，其特征在于，所述制备菌种中采用的培养基的组成为蔗糖、酵母、MgSO4、KCl、ZnSO4·7H2O和蒸馏水；所述第一次发酵中的培养基的组成为蔗糖、酵母、MgSO4、KCl、ZnSO4·7H2O和蒸馏水；所述第二次发酵中的培养基的组成为蔗糖、酵母、MgSO4、KCl、ZnSO4·7H2O和蒸馏水。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：梁洪柱，田会鹏，陈倩，李学燕，
申请(专利权)人：北京市西山试验林场，
类型：发明
国别省市：
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