本发明专利技术公开了一种生物灭蚊剂及其制备方法，由灭蚊真菌与灭蚊细菌复配制得，以1g湿菌丝的灭蚊真菌计，配以灭蚊细菌苏云金杆菌以色列变种（Bacillusthuringiensisvar.israelensis）的个数为1.4×104～1.4×1018或配以灭蚊细菌球形芽孢杆菌（Bacillussphaericu）的个数为2.5×104～2.5×1020。灭蚊真菌为贵阳腐霉（PythiumguiyangenseSu）或卡地腐霉（PythiumcaronlinianumMatthews）。本发明专利技术具有既快速灭蚊、又持久制蚊的效果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，具体来说涉及一种生物灭蚊剂，同时还涉及该生物灭蚊剂的制备方法。
技术介绍
农业害虫和林业害虫每年给人类的农业、林业生产带来严重的损失。同时，蚊虫不但骚扰人群，而且可以传播20多种疾病，威胁人类健康。由于化学农药的专利技术，人们从虫口里夺回了粮食，也控制了媒介昆虫的数量，减少了虫媒传染病的流行。 然而长期大量使用化学杀虫剂带来了严重问题。I)环境污染，对人及生物的健康造成危害。农药中的重金属残留在土壤中，造成土壤变质，农业减产；农产品残毒含量高，出口受阻；2)生态平衡被破坏化学农药把害虫和益虫全杀死，使自然界控制害虫的天敌大大减少，害虫数量反弹，造成更大的危害；3)害虫产生抗药性昆虫极易产生抵抗农药毒性的能力，使农药施用的剂量越来越大，甚至农药完全失效。而开发新的化学杀虫剂要花大量资金和时间(据统计，约I亿美元和10年时间开发一种新农药)。生物防治是采用害虫天敌或可对害虫致病的微生物来控制或杀灭害虫。其所采用的“杀虫剂”有对害虫高度特异性，对非靶生物无毒无害，不污染环境，不破坏生态平衡，不易诱导害虫的抗药性的优点，所以是很理想的害虫防治方法。但无论国际国内，农业害虫的生物防治较之医学昆虫的生物防治要发达很多，医学昆虫的生物防治是薄弱环节。到目前为止，用得最广的生物灭蚊剂为苏云金杆菌以色列变种(Mcillusthuringiensis var. israelensis,简称Bti)。它是胃毒型灭蚊剂。它芽孢囊内的伴孢晶体含有毒素蛋白。该伴孢晶体被蚊幼虫吃进消化道即被肠内分泌物分解，释放S-内毒素，作用于肠上皮细胞，使其溶解。肠壁损坏，大量细菌进入血体腔引起败血症。蚊虫在细菌毒素和败血症的作用下很快死亡。Bti的优点是灭蚊能力强，灭蚊速度快，但是它在环境中生存时间比较短，持效期不长。实验证明它在阳光照射下灭蚊能力急剧下降。加上自然环境中水质、水温，以及淤泥吸附等因素的影响，它的持效时间一般为1-10天，特别是目前市场上比较多用的菌液和可湿性粉剂，持效性比较低。加上悬浮剂后，持效期可延长10多天，只有少数情况(如加大剂量)下可延长达I个多月。另外，由于Bti的杀蚊机理比较简单，有可能诱导蚊虫针对其毒素产生抗性。另一种灭蚊细菌球形芽孢杆菌(ifeci77i/5· sphaericu,简称Bs),它与Bti—样，也属于胃毒类杀虫剂。Bs是一种普通的革兰氏阳性菌。其杀虫毒素是二元毒素蛋白质，主要位于芽孢和细胞壁，有些位于伴孢晶体。菌株产生分子量为51. 4kD和41. 9kD的两种毒素原蛋白，被蚊虫吞食后，在蚊幼虫肠道中活化成毒素，并发挥作用，使幼虫死亡。Bs的灭蚊作用较Bti慢，持效期较Bti稍长，但在室外也一般为I个月左右。Bti和Bs是胃毒型杀蚊齐U，必须被蚊虫吃进去才能把蚊虫杀死，当它们被淤泥掩盖或包裹则不起作用。贵^\觀霉iPythium guiyangense Su,简称Pg)是一种灭蚊真菌。其无性繁殖阶段游动孢子可以在水中主动搜寻蚊幼虫，在幼虫体壁囊化，发出芽管，伸入后者体内，生长繁殖，夺取营养，破坏组织，使蚊幼虫死亡。其菌丝再从蚊尸中伸出体表，释放游动孢子进一步感染新的蚊幼虫，从而在蚊群中造成流行病，产生长期制约蚊虫种群的效果。同时，由于Pg的灭蚊机理复杂，涉及很多环节，蚊虫不易产生抗药性。但是，Pg的灭蚊过程比较慢，在刚施用时杀蚊作用不明显，因而不易被大家接受，其应用由此受限。另一种灭蚊真菌卡地腐霉caronlinianum Matthews)的灭蚊效果与Pg类似。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述缺点而提供的一种既快速灭蚊、又持久制蚊的生物灭蚊剂。本专利技术的另一目的在于提供该生物灭蚊剂的制备方法。·本专利技术的一种生物灭蚊剂，由灭蚊真菌与灭蚊细菌复配制得，以Ig湿菌丝的灭蚊真菌计，配以灭蚊细菌苏云金杆菌以色列变种(Bti)个数为I. 4X IO4 I. 4X1018或配以灭蚊细菌球形芽孢杆菌(Bs)的个数为2. 5 X IO4 2. 5 X IO200其中灭蚊真菌为贵阳腐霉(Pg)或卡地腐霉。一种生物灭蚊剂的制备方法，包括以下步骤 (1)采用SFE或KPYG2液体培养基摇床培养灭蚊真菌5天，培养温度25°C± I °C，摇床转速120rpm ;滤出菌丝，无菌水洗涤3次，加水至原体积，粉碎机高速粉碎10秒，备用； (2)配制I% 3% (W/V)海藻酸钠溶液； (3)将灭蚊真菌菌丝悬液与海藻酸钠溶液按1:4比例混合，拌匀； (4)将上述混合液缓慢滴入1% 5%(W/V)氯化钙溶液，微胶囊颗粒形成，沉淀，O. 5 3小时后滤出微胶囊，清水冲洗备用； (5)接种灭蚊细菌于灭蚊细菌液体培养基，摇床培养，转速120rpm，温度30°C±1°C;48小时后，离心收集芽孢，用时稀释至以下密度I. 4X IO4 I. 4X 1019，得芽孢悬液； (6)按I IOml细菌芽孢悬液/IOOg微胶囊的比例将芽孢悬液与微胶囊混匀，包装。一种生物灭蚊剂的制备方法，包括以下步骤 (1)采用SFE或KPYG2液体培养基摇床培养灭蚊真菌5天，培养温度25°C± I °C，摇床转速120rpm ;滤出菌丝，无菌水洗涤3次，加水至原体积，粉碎机高速粉碎10秒，备用； (2)将准备好的灭蚊真菌菌液在无菌条件下加入BF培养基，每100克(湿重)培养基加菌液15ml，拌匀，静置培养，培养温度25°C ±1°C ； (3)采用灭蚊细菌液体培养基，接种灭蚊细菌，摇床培养48小时，摇床速度120rmp，培养温度30°C ±1°C ;将培养好的菌液在无菌条件下加入HF培养基，每100克(湿重)培养基加菌液15ml，拌匀，静置培养，培养温度30°C ±1°C ; (4)5天后，将上述培养物按灭蚊真菌培养物灭蚊细菌培养物=1:3的比例均匀拌在一起，包装。上述的生物灭蚊剂的制备方法，其中KPYG2培养基的制备方法为将I. 5克蛋白胨、I. 5克酵母粉、3. O克葡萄糖、O. 025克胆固醇、O. 11克无水氯化钙、I. O克玉米油混合，加水至1000毫升，121°C灭菌30min ； 上述的生物灭蚊剂的制备方法，其中SFE (葵花籽培养基)的制备方法为生葵花籽100克加水1000毫升，粉碎，6层纱布过滤，滤液再加水至2000毫升；分装冷冻于_20°C。用时，取出解冻，121°C灭菌30min ； 上述的生物灭蚊剂的制备方法，其中灭蚊细菌液体培养基为苏云金杆菌以色列变种液体培养基，其制备方法为将O. 7g酵母膏、O. 2g硫酸镁(MgSO4 · 7H20)、lg蛋白胨、Ig磷酸氢二钾、Ig葡萄糖、和O. 2g硫酸铵混合，加蒸馏水至1000ml，pH值为7. 0_7. 2，121°C灭菌30min。(固体培养基加琼脂I. 5%_2%)； 上述的生物灭蚊剂的制备方法，其中灭蚊细菌液体培养基为球形芽孢杆菌液体培养基，其制备方法为将3. Og蛋白胨、5. Og牛肉膏、5. Og酵母膏、O. Olg MnCl2. 4H20、O. IgCaCl2. 2Η20、0· 2g MgCl2. 6H20，加蒸馏水至 1000ml, pH 值为 7. 0-7. 2，121°C 灭菌 30min。(固体培养基加琼脂I.本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种生物灭蚊剂，其特征在于：由灭蚊真菌与灭蚊细菌复配制得，以1g湿菌丝的灭蚊真菌计，配以灭蚊细菌苏云金杆菌以色列变种个数为1.4×104～1.4×1018或配以灭蚊细菌球形芽孢杆菌的个数为2.5×104～2.5×1020。
【技术特征摘要】
1.一种生物灭蚊剂，其特征在于由灭蚊真菌与灭蚊细菌复配制得，以Ig湿菌丝的灭蚊真菌计，配以灭蚊细菌苏云金杆菌以色列变种个数为I. 4X IO4 I. 4X1018或配以灭蚊细菌球形芽孢杆菌的个数为2. 5 X IO4 2. 5 X IO2002.如权利要求I所述的生物灭蚊剂，其特征在于灭蚊真菌为贵阳腐霉或卡地腐霉。3.—种生物灭蚊剂的制备方法，包括以下步骤 (1)采用SFE或KPYG2液体培养基摇床培养灭蚊真菌5天，培养温度25°C± I °C，摇床转速120rpm ;滤出菌丝，无菌水洗涤3次，加水至原体积，粉碎机高速粉碎10秒，备用； (2)配制I% 3% (W/V)海藻酸钠溶液； (3)将灭蚊真菌菌丝悬液与海藻酸钠溶液按1:4比例混合，拌匀； (4)将上述混合液缓慢滴入1% 5%(W/V)氯化钙溶液，微胶囊颗粒形成，沉淀，O. 5 3小时后滤出微胶囊，清水冲洗备用； (5)接种灭蚊细菌于灭蚊细菌液体培养基，摇床培养，转速120rpm，温度30°C±1°C;48小时后，离心收集芽孢，用时稀释至以下密度I. 4X IO4 2. 5X102°，得芽孢悬液； (6)按I IOml细菌芽孢悬液/IOOg微胶囊的比例将芽孢悬液与微胶囊混匀，包装。4.一种生物灭蚊剂的制备方法，包括以下步骤 (1)采用SFE或KPYG2液体培养基摇床培养灭蚊真菌5天，培养温度25°C± I °C，摇床转速120rpm ;滤出菌丝，无菌水洗涤3次，加水至原体积，粉碎机高速粉碎10秒，备用； (2)将准备好的灭蚊真菌菌液在无菌条件下加入BF培养基，每100克(湿重)培养基加菌液15ml，拌匀，静置培养，培养温度25°C ±1°C ； (3)采用灭蚊细菌液体培养基，接种灭蚊细菌，摇床培养48小时，摇床速度120rmp，培养温度30°C ±1°C ;将培养好的菌液在无菌条件下加入HF培养基，每100克(湿重)培养基加菌液...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏晓庆，
申请(专利权)人：郑文定，苏晓庆，
类型：发明
国别省市：
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