本发明专利技术提供一种淡紫拟青霉液体发酵方法，包括菌种活化、菌种扩培和发酵步骤。所述发酵步骤：采用的发酵培养基包括以下原料组分：棉籽饼粉、硅藻土、酵母浸出粉、红薯粉、白砂糖、鱼蛋白胨、橄榄油、甘露醇、硫酸镁、硫酸铜、吐温20、磷酸氢钙、硼酸、牛胆盐、酪氨酸、二氧化锰、去离子水。所述菌种活化步骤：采用的菌种活化培养基包括以下原料组分：海藻多糖、山梨糖醇、牛肉膏、天门冬酰胺、七水硫酸铜、二氧化锰、氯化钠、氯化钙、硼酸、柠檬酸铁、甘露醇、琼脂、去离子水。本发明专利技术制备的淡紫拟青霉发酵液，孢子含量为4.1×109～4.4×109个/g。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种淡紫拟青霉的发酵方法，具体的涉及一种淡紫拟青霉液体发酵方 法，属于农业
技术介绍
淡紫拟青霉属于内寄生性真菌，是一些植物寄生线虫的重要天敌，能够寄生于卵， 也能侵染幼虫和雌虫，可明显减轻多种作物根结线虫、胞囊线虫、茎线虫等植物线虫病的危 害。该属主要特征是分生孢子梗呈瓶状或近球形(瓶梗），在菌丝端或短枝上轮生，分生孢子 单孢链状，至今该属报道有近50个种，皆为昆虫病原菌和线虫病原菌。 淡紫拟青霉广泛分布于世界各地，具有功效高、寄主广、易培养等优点，特别在控 制植物病原线虫方面功效卓著。半个多世纪以来，国内外许多专家学者对此菌进行了广泛 而深入的研究，在生物学、生态学、大量培养、控害效能与田间应用等方面取得了一系列研 究成果。 但对淡紫拟青霉的发酵方法研究还不是非常成熟，实验室的培养方法，在实际生 产中并不能同比例放大，在工业生产中发酵液的菌含量等指标明显降低，无法大规模生产。 专利CN201110274968.X公开了一种淡紫拟青霉的液体发酵培养方法，但其制备的 淡紫拟青霉发酵液的孢子、菌体的含量都不高，且其采用的培养方法为摇床培养，并不适用 于大规模的工业生产。 现有的淡紫拟青霉液体发酵技术具有以下缺陷：（1)淡紫拟青霉发酵液的孢子含 量低；（2)淡紫拟青霉发酵液的孢子萌发率较差；（3)淡紫拟青霉发酵液的菌体含量不高； (4)制备的淡紫拟青霉防治植物病虫害的效果不理想。
技术实现思路
本专利技术为解决现有技术存在的不足，提供一种淡紫拟青霉液体发酵方法，以实现 以下专利技术目的： 1、 提高淡紫拟青霉发酵液的孢子含量，使孢子含量为4.1 X 109~4.4 X 109个/g; 2、 提高淡紫拟青霉发酵液的孢子萌发率，使孢子萌发率为98.9~99.5%; 3、 提高淡紫拟青霉发酵液的菌体含量，使菌体含量为89~96 g/L; 4、 使本专利技术制备的淡紫拟青霉对荔枝蝽蟓、大豆孢囊线虫、蓟马、褐飞虱具有明显的防 效； 5、 使本专利技术制备的淡紫拟青霉具有明显的抑制玉米小斑病、小麦赤霉病、黄瓜炭疽病 菌、棉花枯萎病的作用。 为解决上述技术问题，采用以下技术方案： 一种淡紫拟青霉液体发酵方法，所述的发酵方法包括菌种活化、菌种扩培和发酵步骤。 以下是对上述技术方案的进一步改进： 所述发酵步骤:采用的发酵培养基包括以下原料组分:棉籽饼粉、硅藻土、酵母浸出粉、 红薯粉、白砂糖、鱼蛋白胨、橄榄油、甘露醇、硫酸镁、硫酸铜、吐温20、磷酸氢f丐、硼酸、牛胆 盐、酪氨酸、二氧化锰、去离子水。 所述发酵培养基的原料重量份配比为： 棉籽饼粉:硅藻土:酵母浸出粉:红薯粉：白砂糖:鱼蛋白胨:橄榄油:甘露醇:硫酸镁:硫 酸铜：吐温20:磷酸氢钙：硼酸：牛胆盐:酪氨酸：二氧化锰:去离子水=450~520: 90~105: 198~250: 280~350: 140~160: 45~53: 0.3~0.6: 0.8~1.1: 4~6: 4~6: 3.5~ 4.5: 18~22: 4~6: 0.8~1.2: 1.8~2.2: 1.8~2.3:30000〇 所述菌种活化步骤:采用的菌种活化培养基包括以下原料组分:海藻多糖、山梨糖 醇、牛肉膏、天门冬酰胺、七水硫酸铜、二氧化锰、氯化钠、氯化钙、硼酸、柠檬酸铁、甘露醇、 琼脂、去离子水。 所述菌种活化培养基的原料重量份配比为： 海藻多糖：山梨糖醇:牛肉膏:天门冬酰胺:七水硫酸铜:二氧化锰:氯化钠:氯化钙:硼 酸:柠檬酸铁:甘露醇:琼脂:去离子水=19~21: 14.5~15.5: 9~12: 0.02~0.04: 0.03 ~0.05: 0.04~0.05: 0.01~0.02: 0.03~0.05: 0.05~0.07: 0.02~0.04: 0.04~ 0.06: 18~23:1000。 所述菌种扩培步骤:采用的菌种扩培培养基包括以下原料组分：玉米粉、山梨糖 醇、全脂奶粉、鸡蛋清、天门冬酰胺、络氨酸、二氧化锰、牛胆盐、氯化钙、硼酸、橄榄油、甘露 醇、硫铵、硫酸镁、去离子水。 所述菌种扩培培养基的原料重量份配比为： 玉米粉：山梨糖醇:全脂奶粉:鸡蛋清:天门冬酰胺:络氨酸:二氧化锰:牛胆盐:氯化钙： 硼酸:橄榄油:甘露醇:硫铵:硫酸镁:去离子水=23~26: 6~9: 13~15: 9~10.5: 0.03~ 0.05: 0.01~0.03: 0.04~0.06: 0.02~0.03: 0.03~0.05: 0.05~0.06: 0.03~0.04: 0.04~0.06: 0.01~0.02: 0.01~0.02:1000。所述菌种活化:培养温度为29°C，培养时间为7天。 所述菌种扩培：l〇〇r/min震荡培养6天，控制温度为26~28°C，湿度为35~45%。 所述发酵步骤:接种量为发酵培养基质量的5%;控制搅拌转速为60~70rpm，发酵 罐内温度为25~30°C，持续通入无菌空气，发酵时间为7~10天。 与现有技术相比，本专利技术的有益效果是： 1、 本专利技术制备的淡紫拟青霉发酵液，孢子含量为4.1 X 109~4.4 X 109个/g; 2、 本专利技术制备的淡紫拟青霉发酵液，孢子萌发率为98.9~99.5%; 3、 本专利技术制备的淡紫拟青霉发酵液，菌体含量为89~96 g/L; 4、 本专利技术制备的淡紫拟青霉对荔枝蝽蟓、大豆孢囊线虫、蓟马、褐飞虱具有明显的防 效;将本专利技术制备的淡紫拟青霉发酵菌液制成孢子质量含量为15%的菌悬液，对荔枝蝽蟓的 防效为93~95%，大豆孢囊线虫的防效为94~97%，蓟马的防效为89~93%，褐飞虱的防效为 92~98%; 5、 本专利技术制备的淡紫拟青霉可明显降低玉米小斑病、小麦赤霉病、黄瓜炭疽病菌、棉花 枯萎病的发病率； 6、 本专利技术淡紫拟青霉发酵方法可实现大规模的生产，且含菌量稳定，不易受杂菌污染。【具体实施方式】 实施例1 一种淡紫拟青霉液体发酵方法 步骤1、菌种活化 (1)制备菌种活化培养基 所述菌种活化培养基为固体平板培养基，其制备方法为： 用电子天平准确称取菌种活化培养基的原料组分，包括：海藻多糖19g、山梨糖醇 14.5g、牛肉膏9g、天门冬酰胺0.02g、七水硫酸铜0.03g、二氧化锰0.04g、氯化钠 O.Olg、 氯化钙0.03g、硼酸0.05g、柠檬酸铁0.02g、甘露醇0.04g、琼脂18g、去离子水lkg; 将上述菌种活化培养基原料加热溶解，加热至温度70~75°C，持续加热15~16min; 用NaOH和HC1调节pH=6后，倒至灭菌后的培养皿内，冷却至常温，制得菌种活化培养基。 (2)接种与活化 选取的菌种为淡紫拟青霉菌种，保藏号为ACCC30673,为市购商品； 将菌种转接到菌种活化培养基上，进行活化培养，培养条件为29°C，培养时间为7天。 步骤2、菌种扩培 将活化后的淡紫拟青霉菌株接种于装有菌种扩培培养基的300ml的锥形瓶中； 每个锥形瓶内装有150ml菌种扩培培养基，接种量为lcm2菌种活化培养基上的菌种； 所述菌种扩培培养基的配方为： 玉米粉23g、山梨糖醇6g、全脂奶粉13g、鸡蛋清9g、天门冬酰胺0.03g、络氨酸 O.Olg、二氧化锰0.04g、牛胆盐0.02g、氯化钙0.03g、硼酸本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种淡紫拟青霉液体发酵方法，其特征在于：所述的发酵方法包括菌种活化、菌种扩培和发酵步骤。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吕玉成，吴文光，薛明政，
申请(专利权)人：潍坊欧普诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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