一种检测非编码小RNA的方法技术

本发明专利技术提供了一种检测非编码小RNA的方法，寡核苷酸序列探针在末端转移酶作用下3’末端标记非同位素；将已标记探针和样品RNA置于液相杂交环境充分反应使样品中目的非编码小RNA和探针形成杂化双链。之后将杂交产物用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，分离结合为双链的RNA-探针和未杂交的过量探针，之后在转移至尼龙膜，经紫外线交联固定，加入链霉亲和素-HRP即可显色发光。在体系中，杂交后的目的RNA-探针与单一未杂交探针均能通过链霉亲和素-HRP，加入酶底物发出荧光条带，在X线光片显影。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测非编码小RNA的方法，尤其涉及一种应用非同位素标记探针液相杂交检测非编码小RNA的方法。
技术介绍
非编码小RAN (small non-messenger RNA,本专利技术也称为小RNA)是细胞中一大类由几十核苷酸到几百核苷酸组成的、不编码蛋白质的RNA，如核小RNA、核仁RNA、微RNA、干扰小RNA、时序小RNA等，这类RNA本身或与蛋白质结合形成复合体有重要的生物学功能，研究发现，小RNA在生物体内细胞、组织等的发育、生长、分化、甚至疾病的发生以及病毒的入侵和防御方面发挥着至关重要的作用。目前可用于检测小RNA的技术主要有Northern blot、RT-PCR及微阵列芯片技术。PCR技术如《实时荧光定量PCR方法检测小RNA》(中国细胞生物学学报，2010，32 (3)359 360)公开的定量检测小RNA的方法，微阵列芯片技术如CN101182576A公开的用于胃组织的微RNA探针和以及检测微RNA的方法。尽管RT-PCR、微阵列技术检在测小RNA时与Northern blot技术相比较具有较高灵敏度,但是传统的Northern blot方法不仅本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测非编码小RNA的方法，其特征在于，步骤包括：步骤1，在寡核苷酸探针的3’末端标记非同位素；步骤2，将已标记非同位素的探针与样品RNA置于液体杂交环境中，使非编码小RNA和所述探针进行液相杂交形成杂化双链，分离所述杂化双链；步骤3，定量或定性检测所述小RNA。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高丰厚，郭跃辉，姜斌，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属第三人民医院，
类型：发明
国别省市：