本发明专利技术提供了治疗哺乳动物中与蛋白聚糖产生有关的病症的方法。该方法包括给予哺乳动物钙调蛋白拮抗剂、瞬时受体电位(TRP)通道抑制剂和钙调蛋白结合肽中的至少一种。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抑制S0X9以治疗一些不良的病理病症，具体而言，本专利技术涉及已知的和新型的化合物抑制S0X9的用途。
技术介绍
脊髓损伤(SCI)是重大医疗保健问题的灾难性事件，其能导致终身残疾。在美国和加拿大，每年有超过12，000例脊髓损伤发生，以及有大约275，000人由于SCI而带着永久的严重残疾生活(Univ. of Alabama Nat. SCIStat. Cntr.和 the Cdn. ParaplegicAssoc.)。据估计，神经外伤的影响是安大略省医疗系统单个最昂贵的突发事件之一。目前，对于SCI没有有效的治疗。已将SCI后轴突再生的缺失归因于受损髓鞘和疤痕中的轴突抵制分子。在疤痕的抑制性分子中，主要的分子是由反应性星形胶质细胞响应损伤而产生的硫酸软骨素蛋白聚糖(CSPG)。然而，星形胶质细胞还被显示分泌有助于轴突生长的ECM分·子诸如层粘连蛋白和纤粘连蛋白。因此，星形胶质细胞既产生再生抑制性分子又产生再生促进性分子，并且成功地再生可能依赖于这些分子的平衡。尽管许多不同的CSPG在SCI后表达(例如，NG2、神经蛋白聚糖、磷酸蛋白聚糖、短蛋白聚糖(brevican)和多功能蛋白聚糖(versican)),所有这些CSPG都依赖于相同的酶即木糖基转移酶-I和木糖基转移酶-II(XT-I，XT-II)以及软骨素-4-磺基转移酶(C4ST)将轴突抵制的硫酸软骨素侧链添加至它们的核心蛋白。通过将木糖添加至核心蛋白的丝氨酸部分来启动硫酸软骨素侧链的合成。该功能由酶木糖基转移酶(XT)完成,所述木糖基转移酶以由两个不同基因XT-I和XT-II编码的两个同工型存在。这些侧链随后被软骨素-4-磺基转移酶(C4ST)硫酸化。这些硫酸软骨素侧链在轴突抵制中发挥的重要作用通过以下观测结果强化通过酶软骨素酶消化这些侧链或者通过抑制XT-I干扰它们的合成增加了啮齿动物SCI模型中的轴突再生。S0X9是反应性星形胶质细胞中上调ΧΤ-Ι、ΧΤ-ΙΙ和C4ST表达，并下调层粘连蛋白和纤粘连蛋白表达的转录因子。已经确定，对SCI后所有CSPG上发现的硫酸软骨素侧链的酶促消化导致SCI后恢复和再生的改善。另一组利用核酶来促进SCI后感觉轴突的再生，该核酶针对编码CSPG产生所需的酶的mRNA。以下作用也被表明能改善再生通过将层粘连蛋白Y I经鞘内给药至损伤处来增加受损伤大鼠脊髓中的层粘连蛋白。XT-I、XT-II和C4ST在SCI后以相似的模式表达已经证实，具有相关功能的基因在SCI后可以作为基因群被一起调控。这样据推测，在星形胶质细胞中，促进轴突再生的基因以及抑制轴突再生的基因将被差别性调节。通过实时定量PCR(Q-PCR)评价大鼠中SCI后XT-I、XT-II和C4ST群的表达。如通过Q-PCR所检测到的，XT-I、XT-II和C4ST在SCI后都显示了相似的基因表达模式。当利用来自脊髓损伤处的蛋白提取物和识别许多CSPG共有表位的抗体CS56，通过狭缝印迹杂交分析测量时，SCI后XT-I、XT-II和C4ST表达的增加伴随着CSPG水平的增加。Q-PCR还证实了，层粘连蛋白和纤粘连蛋白mRNA水平在SCI后早期而不是晚期提高。S0X9调节CSPG合成酶和生长促进性细胞外基质蛋白的表达。先前已证实，S0X9是反应性星形胶质细胞中上调xt-i、xt-ii和C4ST表达和下调层粘连蛋白和纤粘连蛋白表达的转录因子。原代大鼠星形胶质细胞中CMV-驱动的S0X9表达导致ΧΤ-Ι、ΧΤ-ΙΙ和C4ST而不是层粘连蛋白或纤粘连蛋白mRNA水平的明显增加，同时靶向S0X9的小干扰RNA(siRNA)导致S0X9 mRNA水平下降75± 12%，并导致XT-I mRNA下降71 ±5. 5%(在XT-II和C4ST表达中观察到相似的下降)。在未处理的原代星形胶质细胞培养物中，S0X9敲低没有减少层粘连蛋白或纤粘连蛋白的基因表达，反而是增加了这些基因的表达。这些结果证实，S0X9上调XT-I、XT-II和C4ST表达，同时降低层粘连蛋白和纤粘连蛋白的表达。S0X9在与CNS疤痕形成有关的人类疾病的星形胶质细胞中表达。为了评价S0X9在人类CNS损伤和疾病中的潜在作用，调查了人类出血性中风、缺血性中风、外伤性脑损伤和SCI病例中S0X9的表达，并且发现在这些病症中，S0X9在反应性星形胶质细胞中表达。目前，没有促进CNS损伤或疾病后的再生的疗法或得到认可的策略。治疗脊髓或脑损伤的典型试验性方法包括限制免疫应答(即细胞免疫疗法诸如Proneuron-PN277)、限制凋亡和细胞毒性级联反应(例如，利用Cethrin、Neotrofin)、或者通过细胞替代(例 如，基于干细胞)的再生。前两个策略依赖于治疗必须进行的非常有限的时间窗，将疤痕产生最小化是继发的作用。许多策略几乎专门集中在阻断神经抵制分子(N0G0、MAG)，而不是集中在增加促再生的分子。因此，鉴于上述，显然需要开发治疗CNS损伤和疾病的有效疗法。专利技术概述目前已发现，抑制S0X9对于治疗与蛋白聚糖产生或调节有关的病症是有效的，并且已经鉴定了用于调节Sox9活性的化合物。因此，在一方面，提供了治疗哺乳动物中与蛋白聚糖产生或调节有关的病症的方法，其包括给予哺乳动物钙调蛋白拮抗剂。在本专利技术的另一方面，提供了治疗哺乳动物中与蛋白聚糖产生或调节有关的病症的方法，其包括给予哺乳动物拮抗钙调蛋白和调节免疫应答的化合物。在本专利技术的另一方面，提供了治疗哺乳动物中与蛋白聚糖产生或调节有关的病症的方法，其包括给予哺乳动物钙通道拮抗剂。在本专利技术的另外方面，提供了治疗哺乳动物中与蛋白聚糖产生或调节有关的病症的方法，其包括给予哺乳动物瞬时受体电位(TRP)通道抑制剂。在本专利技术的另一方面，提供了治疗哺乳动物中与蛋白聚糖产生或调节有关的病症的方法，其包括给予哺乳动物钙调蛋白结合肽。本文通过参考下面的附图描述了本专利技术的这些方面和其他方面。附图简述图I是人类、大鼠和小鼠的XT-I、XT-II和CX4ST启动子区的序列分析图示，说明了定位和其他特征；图2通过图示说明了脊髓损伤后Sox9 CSPG靶基因表达(XT1，ΧΤΠ，C4ST)；图3说明了将它莫西芬(Tamoxifen)给予随后经历脊髓损伤的条件性Sox9敲除小鼠降低损伤处㈧以及脊髓⑶中S0X9表达细胞的频数，并且降低GFAP阳性细胞的频数(C);确定了 GFAP表达细胞和S0X9表达细胞频数间的相关性(D);但如通过线性回归分析(F)所确认的，看起来不影响星形胶质细胞的频数(谷氨酰胺合成酶阳性细胞和野生型S0X9敲除细胞的频数没有差异(E))；以及说明了 S0X9敲除对SCI时S0X9基因表达的影响(G)；图4说明了将它莫西芬给予来自条件性Sox9敲除小鼠的原代星形胶质细胞降低了 S0X9靶基因的表达㈧；以及说明了在S0X9敲低小鼠中，S0X9活性降低对体外对疤痕基因表达的影响⑶；图5说明了在用不同浓度的化合物处理的成熟星形胶质细胞培养物中，S0X9活性的荧光素酶测定结果(A-E)，所述化合物被设计为抑制钙内流和钙调蛋白活性中的至少一种；图6说明了样品的S0X9靶基因表达的实时PCR分析结果和蛋白免疫印迹结果(A、B和C)，所述样品来自用不同浓本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：亚瑟·布朗，桑迪·吉安·万斯克托，
申请(专利权)人：西安大略大学，
类型：
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。