两形真杆菌制剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及两形真杆菌制剂及其应用，具体涉及两形真杆菌作为主要活性成份制成微生态制剂，及该微生态制剂在治疗相关疾病中的应用，该微生态制剂包括药品组合物、保健品、饮品、兽药和饲料添加剂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及凸腹真杆菌和两形真杆菌制剂及其应用，具体涉及凸腹真杆菌和两形真杆菌单独或组合作为主要活性成份制成微生态制剂，及该微生态制剂在治疗相关疾病中的应用，属于生物药领域。
技术介绍
目前，抗菌药在临床和养殖业等方面滥用的危害已引起重视，由于微生态制剂没有副作用，利用微生态制剂治疗相关疾病、保健及作为兽药和饲料添加剂已得到广泛应用。目前的微生态制剂主要成份包括双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等，治疗相关疾病疗效不是非常理想。丁酸(酪酸)已经被证实是结肠能量的首选来源，提供肠粘膜70%的能量，促进肠粘膜细胞增殖生长及消化系统发育成熟，同时丁酸也是调节免疫的重要物质。本专利技术微生态制剂进入肠道由于能够分泌大量酪酸，治疗相关疾病疗效显著，并可作为保健品、兽药和饲料添加剂应用，社会意义巨大，且未见相关研究报道，特申请此专利技术专利。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新型的微生态制剂，该微生态制剂中的主要活性成份进入肠道能产生大量丁酸，修复肠粘膜，调节免疫，抑制炎症因子过度表达，同时该微生态制剂还能恢复肠道菌群平衡和提高机体及粘膜免疫，有效治疗消化系统疾病、营养吸收障碍性疾病、自身免疫性疾病、心脑血管疾病、变态反应性疾病、手足口病及提高免疫和抗癌。其中所述消化系统疾病包括腹泻、肠易激综合征、冷凉泻、喝酒泻、溃疡性结肠炎、克罗恩病、抗生素相关性腹泻、伪膜性肠炎、小儿肺炎继发性腹泻、肠癌、肿瘤放化疗辅助治疗、腹胀和 消化不良、便秘、便臭、便臭中毒综合征、肝胆疾病、病毒性腹泻、喂养不耐受、坏死性小肠结肠炎、黄疸、口腔溃疡、鹅口疮、促进小儿肠道发育成熟、促进消化吸收、营养保健和生长发育；所述营养吸收障碍性疾病包括佝偻病；所述自身免疫性疾病包括类风湿性关节炎、强直性脊柱炎；所述心脑血管疾病包括高脂血症、高血压、脑血栓、脑栓塞、脑缺血、心肌梗塞、冠心病、脑梗死、脑出血、心绞痛、心肌炎、动脉粥样硬化；所述变态反应性疾病包括湿疹；所述提高免疫包括治疗反复呼吸道感染。本专利技术的微生态制剂的制备优选是通过下述步骤实施的，但不局限于此制备工艺，公知的能实现的制备工艺均可以采取含凸腹真杆菌或两形真杆菌的样本，优选人或动物粪便，更优选健康婴儿粪便，然后将样品置于灭菌厌氧瓶内，吹入氮气同时充分混合，迅速从中取2克样品加入ISmL灭菌的稀释液中，吹入氮气同时充分混匀，在无菌操作台内，进行10' 10_2、10' 1θΛ 10_5，10_6，10_7梯度稀释，取10_5，10_6，10_7三个稀释梯度，分别涂布于凸腹真杆菌或两形真杆菌选择性单菌落分离固体培养基上，置于厌氧罐内，厌氧37°c下培养48小时，选择长势良好的单菌落分别接种于液体扩增培养基中，置于厌氧罐内，厌氧37°C下扩增培养48小时。将所得培养液离心(12000rpm)分离出菌体后，将菌体冷冻真空干燥，调制出各菌种的干燥菌粉，然后进行菌种鉴定、产丁酸实验和毒性试验，将鉴定的无毒性凸腹真杆菌或两形真杆菌干燥菌粉单独或组合按需要比例添加辅料制成片剂、胶囊和散剂等各种剂型或兽 药、饲料添加剂。凸腹真杆菌或两形真杆菌选择性单菌落分离固体培养基优选但不局限于纯化水IOOmL,胰蛋白胨Ig,酵母浸膏O. 5g,磷酸氢二钠O. 4g,葡萄糖O. 15g,可溶性淀粉O. 05g,L-半胱氨酸O. 02g, L-半胱氨酸盐酸盐O. 05g,琼脂I. 5g，调pH值7. 7，115°C，20分钟高压灭菌。灭菌后在冷却到60°C后加入5mL脱纤维马血，ES溶液4mL。其中ES溶液丙酸纳30%，硫酸链霉素4*%，硫酸巴龙霉素2*%，硫酸多粘囷素BO. 02%。凸腹真杆菌或两形真杆菌液体扩增培养基优选但不局限于绞碎的牛肉500g，蒸馏水11，IN NaOH 25. OmL，用精牛肉或马肉，绞碎去除脂肪和连接组织，混合肉、水和氢氧化钠煮沸，同时搅拌，冷却至室温，略去表面的脂肪并过滤，保留滤液，补充足够的蒸馏水滤液恢复I升原体积。向每IOOmL滤液中添加蛋白胨2. Og、葡萄糖O. 5g、酵母浸膏I. Og、盐酸半胱氨酸O. 05g、盐溶液4. OmL,维生素Kl溶液O. lmL、5mg/mL氯化血红素溶液O. 5mL，调pH至7. 2 士 O. 1，在厌氧管内通入97%的氮，3%的氢，盖紧丁基橡胶瓶塞帽，121°C高压灭菌15min。其中1、盐溶液的配制称取无水氯化钙O. 2g，硫酸镁O. 2g，磷酸氢二钾lg，磷酸二氢钾lg，碳酸氢钠IOg,氯化钠2g,加蒸懼水至IOOOmL ;2、氯化血红素溶液(5mg/mL)的配制称取氯化血红素0. 5g溶于lmol/L氢氧化钠ImL中，加蒸馏水至lOOmL，121°C高压灭菌15min，冰箱保存；3、维生素K1溶液的配制称取维生素K1Ig加无水乙醇99mL，过滤除菌，放冷暗处保存。本专利技术优选使用的凸腹真杆菌的细菌学性质I、菌落形态显微镜观察长I. 5-2微米，宽0. 5微米，短杆，革兰氏染色阳性。平板形态菌体呈圆形、凸起、周边整齐、光滑；颜色灰色，不透明。2、生理生化鉴定石蕊牛奶_ ;脂酶_ ;明胶液化_ ;过氧化氢酶_ ;精氨酸产氨_ ;七叶苷水解+ ;吲哚-;硫化氢乙酰甲基甲醇试验(V-P试验)-;是否需氧厌氧性。3、糖酵解实验鉴定纤维二糖_ ；D-果糖+ ；D-半乳糖+ ;匍萄糖+ ；D-甘露糖+ ；D-棉子糖-；鼠李糖;山梨糖_ ;松三糖_ ;蔗糖_ ;海藻糖_ ;木糖+ ;麦芽糖+ ;淀粉+ ;蜜二糖+ ;核糖+ ;甘油_ ;七叶灵+ ;阿拉伯糖_ ;果糖+。本专利技术优选使用的两形真杆菌的细菌学性质I、菌落形态显微镜观察长2. 0-5微米，宽I. O微米，中长杆，革兰氏染色阳性。平板形态菌体呈圆形、凸起、周边整齐、光滑；颜色灰色，不透明。2、生理生化鉴定石蕊牛奶_ ;脂酶_ ;明胶液化_ ;过氧化氢酶_ ;精氨酸产氨_ ;七叶苷水解+ 引哚_;硫化氢_ ；v-p试验-;是否需氧厌氧性。 3、糖酵解实验鉴定纤维二糖-；D-果糖+ ；D-半乳糖+ ;匍萄糖+ ；D-甘露糖+ ；D-棉子糖-；鼠李糖;山梨糖_ ;松三糖_ ;蔗糖_ ;海藻糖+ ;木糖_ ;麦芽糖_ ;淀粉_ ;蜜二糖_ ;核糖_ ;七叶灵+ ;甘油_ ;阿拉伯糖_。专利技术人利用上述方法通过凸腹真杆菌或两形真杆菌选择性单菌落分离固体培养基分离鉴定出了凸腹真杆菌或两形真杆菌。本专利技术所述凸腹真杆菌优选但不限于凸腹真杆菌(Eubacterium ventriosum)、CGMCC、保存编号2465。本专利技术所述两形真杆菌优选但不限于两形真杆菌(Eubacterium biforme)、CGMCC、保存编号2466。本专利技术所述的凸腹真杆菌或两形真杆菌指活生物个体。 本专利技术是以有效剂量的上述凸腹真杆菌或两形真杆菌单独或组合作为主要药物活性成份，按照一定的制剂工艺，加入常规的赋形剂、调味剂、崩解剂、防腐剂、润滑剂、湿润齐U、黏合剂、溶剂、增稠剂、增溶剂等药物辅料，制成任何一种适合于临床上使用的剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液体制剂、灌肠剂等剂型。本专利技术所述以有效剂量的上述凸腹真杆菌或两形真杆菌单独或组合作为主要药物活性成份制成活菌微生态制剂，也可以是上述凸腹真杆菌或两形真杆菌单独或本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新型微生态制剂，其特征在于该微生态制剂是用两形真杆菌作为活性成份制成制剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：崔云龙，李洪福，王发合，
申请(专利权)人：青岛东海药业有限公司，北京普尔康医药高科技有限公司，
类型：发明
国别省市：