本发明专利技术涉及中药肉桂水提物中的原花青素在制备治疗糖尿病药物中的应用。胰岛淀粉样多肽在体内发生聚集，这一聚集过程会破坏胰岛β细胞膜的结构，诱导β细胞凋亡，损伤β细胞的功能，被认为是2型糖尿病的重要致病原因之一。本发明专利技术发现中药肉桂水提物中的原花青素能够有效抑制2型糖尿病中胰岛淀粉样多肽的聚集，同时逆转其聚集过程中对β细胞产生的毒性，从而保护β细胞。本发明专利技术发现肉桂原花青素能够以抗胰岛淀粉样多肽聚集为靶点，在制备治疗2型糖尿病药物中具有极大的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物药学领域，涉及中药肉桂水提物中的原花青素在制备治疗糖尿病药物中的应用。
技术介绍
近年来中国已成为全球糖尿病发病率高速增长的地区之一，糖尿病患者总人数位居世界第一。根据国际糖尿病联盟估计，我国2007年糖尿病患病人数约为3980万，2025年时将达到5930万。糖尿病已经成为严重威胁我国国民健康和生活质量的重大慢性疾病。糖尿病分为I型和2型，其中2型糖尿病(T2DM)人数占糖尿病患者总数的90%以上，2型糖尿病的病理特征之一为由胰岛β细胞分泌的胰岛淀粉样多肽(human isletamyloid polypeptide, hIAPP)的错误折叠和形成淀粉样聚集。这种淀粉样多肽聚集会破坏膜岛 β 细胞膜的结构(参见 L. Haataja, T. Gurlo, C. J. Huang, and P. C. Butler,Islet amyloid in type 2 diabetes, and the toxic oligomer hypothesis. EndocrRev 2008; 29 (3) : 303-316.)，诱导β细胞凋亡，损伤β细胞的功能，被认为是2型糖尿病的重要致病原因之一(参见 Westermark P, Wernstedt C，O’Brien TD, Hayden Dff,Johnson KH. Islet amyloid in type 2 human diabetes mellitus and adult diabeticcats contains a novel putative polypeptide hormone. Am J Pathol 1987; 127 (3):414-417.)。此外，在2型糖尿病中晚期患者中，hIAPP的聚合物还可能通过打断β细胞间的耦合、诱导β细胞的凋亡等机理，导致β细胞功能的损伤，加重糖尿病的病情。肉桂作为一种传统中药，已列入中国药典。在抗菌抗炎、抗肿瘤和治疗糖尿病中有广泛应用。研究表明肉桂水提物可以抑制阿尔兹海默病中聚集蛋白A-beta的聚集。本专利技术研究了肉桂水提物对2型糖尿病中胰岛淀粉样多肽聚集性的影响，并且鉴定了其活性成分。
技术实现思路
肉桂作为一种传统中药在抗菌抗炎、抗肿瘤和治疗糖尿病中有广泛应用。本专利技术发现中药肉桂水提物能够有效抑制2型糖尿病中胰岛淀粉样多肽的聚集，降低其聚集过程中对β细胞产生的毒性，并且鉴定出其中的有效成分为原花青素。为肉桂或者肉桂原花青素在制备治疗2型糖尿病药物中奠定了基础。所以本专利技术提供了原花青素在制备治疗糖尿病药物中的应用。同时本专利技术还提供了一种治疗糖尿病的药物，其中含有原花青素作为活性成分。该治疗糖尿病的药物可以按医药行业现有技术来制备，比如，取原花青素适量，以乳糖、淀粉和糊精为稀释剂，羧甲基淀粉钠(CMS-Na)为崩解剂，乙醇为润湿剂，硬脂酸镁为润滑剂经过筛，混匀，压片制成原花青素片剂。附图说明图1，实施例I用反相高效液相色谱鉴定肉桂水提物成分。图2，实施例2 hIAPP和肉桂水提物、原花青素共浴的硫磺素荧光光谱实验。图3，实施例2 hIAPP和肉桂酸、肉桂醛、香豆素共浴的硫磺素荧光光谱实验 图4，hIAPP和化合物共浴孵育12小时后在透射电镜下观察到的形态。图5,光催化交联实验,用20%的Tricine-Urea凝胶电泳分离并用银染方法分析结果O图6，各种肉桂水提物对羧基荧光素泄露的影响。图7，肉桂水提物或原花青素对红细胞溶血率的影响。图8，肉桂水提物或原花青素对细胞存活率的影响。具体实施例方式下面结合具体实验，进一步阐述本专利技术。应当理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术保护的范围，下列实施例中未注明具体实验条件和方法，通常按照常规条件如J.萨姆布鲁克等主编，科学出版社，1992，分子克隆实验指南(第二版);D. L.斯佩克特等，科学出版社，2001，细胞实验指南；吕鸿声，科学出版社，1982，或接照制造厂商所建议的条件。本专利技术所用的肉桂酸(C9H8O2)、肉桂醛(C9H8O )、香豆素(C9H6O2)和原花青素(C3tlH26O12)均订购于阿拉丁试剂有限公司(中国)；胰岛淀粉样多肽订购于金丝瑞公司(美国)，其它本专利技术所涉及到试剂均订购于奥德里奇-西格玛公司(美国)。实施例I.反相高效液相色谱(reverse phase high performance liquidchromatography)鉴定肉桂水提物。具体操作采用Apollo C18色谱柱(250X4.6 mm, 5 μ m)，柱温为40°C。流动相为60%乙腈，等梯度洗脱，流速为lml/min。检测波长为280 nm。结果如图I所示，原花青素，肉桂酸，香豆素，肉桂醛标准品的保留时间分别为2.09 min, 3.87 min, 4.56 min 和 5. 77 min (见图 1A，1B，IC 和 1D)，通过和肉桂水提物的各个峰的半保留时间对比得知，肉桂水提物中的主要成分为原花青素、肉桂酸、肉桂醛和香豆素(见图1E)。实施例2.硫磺素突光光谱实验(Thioflavin-T fluorescence assay) 具体操作将胰岛淀粉样多肽(hIAPP)溶解于六氟异丙醇(HFIP)并超声2分钟，用25 mM PBS (50 mM NaCl，pH7. 4)将其溶解稀释为含1% HFIP终浓度为13 μ M的溶液。在25°C下分别与肉桂水提物、原花青素、肉桂酸、肉桂醛和香豆素共水浴，每两小时取点，用日立2700荧光分析仪进行分析，检测体系包含25 mM PBS (50 mM NaCl, pH 7.4)和26 μ M硫磺素(Thioflavin-T),激发和发射波长分别为450 nm和482 nm,波长扫描60 s,记录数据分析。结果如图2、图3所示，hIAPP随着孵育的时间增加逐渐开始聚集，同时荧光信号强度随着hIAPP的聚集而增强。当加入肉桂水提物后，荧光信号强度随着肉桂水提物浓度的上升而下降(见图2)。相同地，加入原花青素后，荧光信号强度随着原花青素的浓度升高而降低，当原花青素与hIAPP的摩尔浓度达到2:1时，荧光信号强度几乎完全被抑制(见图2)。然而当加入近饱和浓度的肉桂酸、肉桂醛和香豆素时，荧光信号强度与只有hIAPP时相似(见图3)。该实验说明肉桂水提物和原花青素均能有效地抑制hIAPP的聚集，而肉桂酸、肉桂醛和香豆素不能抑制hIAPP的聚集。实施例3.透射电镜实验(Transmission electronic microscopy) 具体操作取实施例2中孵育12小时的样品在透射电镜下观察其形态。结果如图4所示，hIAPP单独孵育12小时后呈现细长的纤维状形态(见图4A)。当hIAPP分别和O. 26 μ g/ml的肉桂水提物、I. 3 μ M的原花青素共同孵育12小时后呈现短小的纤维状形态(见图4B，4D)，当hIAPP和分别和26 μ g/ml的肉桂水提物、26 μ M的原花青素共同孵育12小时后没有观察到典型的纤维状形态(见图4C，4E)。说明肉桂水提物和原花青素对hIAPP的聚集有抑制作用，且呈现剂量依赖性。当hIAPP分别和近饱和浓度的肉桂 酸、肉桂醛、香豆素共同孵育时，仍可本文档来自技高网...
【技术保护点】
原花青素在制备治疗糖尿病药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄昆，焦丽华，朱俊铭，郑凌，
申请(专利权)人：武汉百奥京生物医药有限公司，武汉生物技术研究院，
类型：发明
国别省市：
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