本发明专利技术涉及一种检测自身免疫疾病相关抗核抗体谱的试剂盒。该试剂盒包括膜条、酶标液、底物和浓缩洗涤孵育液，膜条由载片和依次固定在载片上的抗原条带、临界质控带、功能质控线构成，抗原条带由dsDNA、核小体、SmD1、核糖体P0蛋白、组蛋白、U1snRNP、Ro/SS-A(52KD)、Ro/SS-A(60KD)、La/SS-B、Scl-70、CENP-B、Jo-1、AMA-M2、PM-Scl、PCNA、Mi-2和Ku中的至少两个彼此独立的划线到硝酸纤维素膜或尼龙膜上形成。本发明专利技术具有独创性的临界质控带，一个临界质控带可以同时对两个乃至更多的检测条带（抗原条带）起到判读的作用，结果判定更加简单可靠。
【技术实现步骤摘要】
一种检测自身免疫疾病相关抗核抗体谱的试剂盒
本专利技术属于生物
，涉及一种诊断疾病的试剂盒，具体地，涉及一种检测自身免疫疾病相关抗核抗体谱的试剂盒。
技术介绍
自身免疫是机体免疫系统对自身抗原发生反应，产生自身抗体和自身应答T细胞。在正常生理状态下，自身免疫可以及时清除衰老死亡的自身细胞，维持内环境的稳定。 在某些病理的状态下，可能会产生直接和间接的破坏自身组织的自身应答性T细胞和自身抗体，并引起相应器官组织的病变和功能障碍，称为自身免疫性疾病(Autoimmune disease ，AID)。常见的自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、系统性硬化症、多发性皮炎/肌炎、混合性结缔组织病、甲状腺机能亢进、青少年糖尿病、原发性血小板紫癜、自身免疫性溶血性贫血、溃疡性结肠炎以及许多种皮肤病、慢性肝病等。AID的临床表现复杂多变，在临床上常造成漏诊和误诊；疾病常慢性迁延，进行性加剧，最后造成不可逆的器质性或功能损害，严重影响患者的生活质量，甚至危及生命。而 AID的早期诊断和治疗将显著的控制病情发展，使病人的生活质量显著提高，可像正常人一样生活。自身抗体检测对与自身免疫疾病的诊断和治疗监测都有重要意义，很多自身抗体已经被写入了 AID诊断的国际标准,其中最重要的是抗核抗体(antinuclear antibodies, AM)。ANA是抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称，本专利包含了常见抗核抗体的靶成分共 17 种:dsDNA、核小体、SmD I、核糖体 PO 蛋白、组蛋白、UI snRNP、Ro/SS-A (52KD)、Ro/SS-A (60 KD)、La/SS-B、Sc I-70、CENP-B, Jo_l、ΑΜΑ-Μ2、PM-Sc I, PCNA, Mi-2 和 Ku。这些自身抗体均是常见的有明确临床意义的。目前国内外还没有同时检测17种抗核抗体的诊断试剂。对于自身免疫疾病诊断方法多采用间接免疫荧光分析法(IFA)、酶联免疫吸附法 (ELISA)和免疫印迹，但各有其不足。间接免疫荧光分析法是检测自身抗体的常用技术。其实验基质为Hep-2细胞或不同灵长类肝脏组织冰冻切片，含有完整的抗原谱，适合筛查试验。但是有如下缺点不能作为确诊依据；结果的判断需要有丰富的经验；滴度的意义大于核型，但滴度的判定主观性强；灵敏度较低，特异性也不高。酶联免疫吸附法(ELISA)具有灵敏度高，可作为筛选实验，也可作为确诊依据，还可定量测定，检测病情和治疗效果。但一次试验只能检测单一指标，通量低，检测成本较高， 在自身免疫疾病的诊断应用推广方面存在着极大的局限性。Western blot(WB)是在凝胶电泳和免疫分析技术基础上发展起来的一种免疫检测技术，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性的优点，比较适合发现未知的抗体。而对于检测已知的抗体，由于使用了天然的混合抗原，实验过程中经常出现找不到目标条带和条带偏移的问题， 给结果的判读造成了不少困难，极易误判和漏判。同时WB使用时间长，也不适合在临床检验中推广。有人将WB改进，直接将纯化抗原包被于硝酸纤维素膜上，然后进行免疫反应检测抗体，形成了改良的免疫印迹方法。目前已有同时检测15个自身抗体的膜条，通过将纯化抗原平行包被到硝酸纤维膜，封闭非特异性反应区。在第一次温育时，已稀释的血清与检测膜条反应，不同的样本或质控在不同的孵育槽间进行。如果样本阳性，特异性的IgG (也包括IgA和IgM)与相应抗原结合。为检测已结合的抗体，加入酶标抗人IgG (酶结合物)进行第二次温育，然后加入酶底物，孵育显色，加入终止液，结果判读。优点是可实现高通量的检测，由于使用了纯化抗原，特异性和灵敏度比传统的Western blot高了不少。对于现有的试剂盒，存在下述缺点I、所检测的抗体仅有15个，并且某些抗原为早期研究的成果，目前已有新的更有意义的靶抗原。2、所使用的纯化抗原多为从天然组织中提取，纯度的不足O 90%)依然影响了检测的灵敏度和特异性。3、膜条背景深，有时比阳性条带还要深，影响了结果的可靠性。4、不同的抗原条带宽度不一，条带间隔不一，影响了结果的准确判读。5、同类产品如CN200810132304. 8公开的试剂盒，没有临界质控带，结果的判读需要另做一个对照膜条，增加了实验的成本，同时由于槽与槽之间反应环境存在一定的差异， 可能造成假阳性或假阴性。目前有的相关产品也有临界质控带，但一条质控带只能对一个检测条带或项目的结果进行判读，目前尚没有用一个临界质控带同时对两个乃至更多的条带进行判读的应用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种检测自身免疫疾病相关抗核抗体谱的试剂盒，该试剂盒的质控带可以同时对两个乃至更多的检测条带起到判读的作用。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案是一种检测自身免疫疾病相关抗核抗体谱的试剂盒，包括膜条、酶标液、底物和浓缩洗涤孵育液，膜条由载片和依次固定在载片上的抗原条带、临界质控带、功能质控线构成，抗原条带由dsDNA、核小体、SmDl、核糖体 PO 蛋白、组蛋白、Ul snRNP、Ro/SS-A(52KD)、Ro/SS-A(60 KD)、La/SS-B, Scl-70、CENP-B, Jo-l、AMA-M2、PM-Scl、PCNA、Mi-2和Ku中的至少两个彼此独立的划线到硝酸纤维素膜或尼龙膜上形成。该方法中，功能质控线属于现有技术，其目的是用于判断该膜条的一次反应是否有效，步骤I)的阴性和步骤4)的阳性是相对抗原条带中的抗原而言的，具有这些抗原所能检测的抗体为阳性，不具有这些抗原所能检测的抗体为阴性。本方案的抗原条带中都每个抗原都彼此独立的划线到硝酸纤维素膜或尼龙膜上形成一个独立的抗原检测线，这些所有的抗原检测线统称为抗原条带，步骤I中的“取膜条对每一个样本进行检测，扫描得到膜条中每一个抗原所检测抗体的灰度值”，这里的灰度值为每一个抗原检测线检测样品后扫描得到的灰度值。本方案的专利技术点在于临界质控带同时为抗原条带中的至少两个抗原的对照条带；通过设置了一个可以同时对两个乃至更多的检测条带(抗原条带)起到判读的临界质控带，随着检测条带的增多，每增加一条被检测条带，都要对重新进行完整的临界质控值确定实验，同时实验难度显著加大。通常，确定一个临界质控值需要许多次实验，才能最终确定。所述临界质控带的成分为20ng 20y g/mL的人IgG。现有技术中有选用抗羊IgG作为对照线的记载，如CN200810132304. 8中，但是该专利中的每一个抗原条带上都需要划一个抗羊IgG的对照线，这样制作工艺比较比较繁琐，而且成本较高，在CN200810132304. 8 中，没有关于同一对照线可以用于2个或者2个以上的抗原条带判读的记载。本专利技术通过创造性实验发现，选择一定浓度范围的人IgG作为临界质控带，可以清楚、准确的对2个或者2个以上的抗原条带进行判读。作为优选,所述临界质控带的成分为200ng 2y g/mL的人IgG。所述临界质控带的临界质控值确定方法包括下述步骤1)选择m个确诊为阴性的新鲜血液标本作为样本，膜条的抗原条带中具有η个抗原，取膜条对每一个样本进行检测， 扫描得到膜条中每一个抗原所检测抗体的灰度值，将m个样本中相同本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测自身免疫疾病相关抗核抗体谱的试剂盒，包括膜条、酶标液、底物和浓缩洗涤孵育液，其特征在于，膜条由载片和依次固定在载片上的抗原条带、临界质控带、功能质控线构成，抗原条带由dsDNA、核小体、SmD1、核糖体P0蛋白、组蛋白、U1？snRNP、Ro/SS？A(52KD)、Ro/SS？A(60？KD)、La/SS？B、Scl？70、CENP？B、Jo？1、AMA？M2、PM？Scl、PCNA、Mi？2和Ku中的至少两个彼此独立的划线到硝酸纤维素膜或尼龙膜上形成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李想，周帅，何涛涛，陈洪，郑丽，陈卫，陈川，
申请(专利权)人：四川省新成生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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