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适用于双向电泳的亚洲玉米螟幼虫血浆蛋白样品制备方法技术

技术编号:8321841 阅读:273 留言:0更新日期:2013-02-13 21:20
适用于双向电泳的亚洲玉米螟幼虫血浆蛋白样品制备方法属农田害虫防控技术领域,本发明专利技术包括:将亚洲玉米螟幼虫体表消毒,收集血淋巴,每200ul血淋巴中加入10mgN-苯基硫脲;将血淋巴离心取上清分装,每管中加入80ul?50%的PEG,终浓度为40%,震荡混匀,冰浴1h;离心弃上清,沉淀中加入4倍体积冷丙酮悬浮震荡混匀,冰浴30min;将亚洲玉米螟幼虫血浆蛋白粗提物溶解于水化/裂解缓冲液后,离心取上清液,得到亚洲玉米螟幼虫蛋白双向电泳样品液。采用本发明专利技术制备亚洲玉米螟幼虫血浆蛋白样品快速、简易,且可获得高质量、重复性好的双向电泳图谱,便于进行后续生物质谱分析鉴定蛋白的研究,本发明专利技术可广泛应用于亚洲玉米螟幼虫血浆蛋白质组学研究,具有较高的实用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属农田害虫防控
,具体涉及一种。
技术介绍
亚洲玉米螟又称钻心虫,属鳞翅目螟蛾科,是玉米的主要虫害,也为害高粱和谷子等作物。玉米螟可危害玉米植株地上的各个部位,使受害部分丧失功能,降低籽粒产量。北方春玉米区因玉米螟为害,一般年份减产10 %左右,大发生年减产20 % 30%。仅吉林省每年因玉米螟为害损失在5亿公斤以上。随着人类基因组计划的实施和推进,生命科学研究已进入了后基因组时代,蛋白质组学的研究是生命科学进入后基因时代的特征,要对生命的复杂活动有全面和深入的认 识,必然要在整体、动态、网络的水平上对蛋白质进行研究,可以说蛋白质组研究的开展不仅是生命科学研究进入后基因组时代的里程碑,也是后基因组时代生命科学研究的核心内容之一。蛋白质组研究的发展以双向电泳技术作为核心,样品制备和溶解事关2-DE的成效,目标是尽可能提高分辨率。由于昆虫血淋巴是血液和淋巴液的混合物,在昆虫的开放式循环系统中循环,是昆虫代谢的重要场所,也是代谢过程中各种物质储存和交换的场所,在昆虫的防御、抗冻、免疫、损伤应答等方面起重要作用。昆虫蛋白制备方法较多,但是针对亚洲玉米螟幼虫血浆样品(特别是适本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种适用于双向电泳的亚洲玉米螟幼虫血浆蛋白样品制备方法,其特征在于包括下列步骤:1)用75%酒精对亚洲玉米螟幼虫进行体表消毒,在?20℃冰冻10min;2)取出亚洲玉米螟幼虫,在不破坏消化道的前提下,用无菌剪剪掉幼虫腹足,挤压腹部,再用10ul的移液枪吸取透明的血淋巴,在冰上快速将其放入离心管中;3)将吸取后的亚洲玉米螟放入底部设有小孔的0.5ml的锥形离心管,再将锥形离心管插入1.5ml离心管中,在4℃条件下8000×g离心10min后,从1.5ml离心管底部收集血淋巴,每200ul血淋巴中加入10mgN?苯基硫脲;4)将收集好的血淋巴在4℃条件下5000×g离心5min,取上清,按每管20...

【技术特征摘要】
1.一种适用于双向电泳的亚洲玉米螟幼虫血浆蛋白样品制备方法,其特征在于包括下列步骤 1)用75%酒精对亚洲玉米螟幼虫进行体表消毒,在-20°c冰冻IOmin; 2)取出亚洲玉米螟幼虫,在不破坏消化道的前提下,用无菌剪剪掉幼虫腹足,挤压腹部,再用IOul的移液枪吸取透明的血淋巴,在冰上快速将其放入离心管中; 3)将吸取后的亚洲玉米螟放入底部设有小孔的O.5ml的锥形离心管,再将锥形离心管插入I. 5ml离心管中,在4°C条件下8000Xg离心IOmin后,从I. 5ml离心管底部收集血淋巴,每200ul血淋巴中加入IOmgN-苯基硫脲; 4)将收集好的血淋巴在4°C条件下5000X g离心5min,取上清,按每管20ul分装,每管中加入80ul 50 %的PEG,使PEG的终浓度为40 %,震荡混匀30s,放冰上冰浴Ih ; 5)在4°C条件下15000Xg离心15min,弃上清,每管沉淀中加入600ull00%的冷丙酮悬浮震荡混匀,放冰上冰浴30min ; 6)在4°C条...

【专利技术属性】
技术研发人员:张炬红王滔席景会王玉衣建坤孙宇张桦杨巽
申请(专利权)人:吉林大学
类型:发明
国别省市:

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