一种原位测定木质纤维生物质酶可及性的方法技术

本发明专利技术属于环境生物能源领域，涉及一种原位测定木质纤维生物质的纤维素酶可及性的方法。包含以下步骤：（1）标记木质纤维生物质样品的总的酶结合位点；（2）原位观测总的酶结合位点分布及数量，计算得样品表面吸附的纤维小体荧光蛋白探针量；（3）释放总的酶结合位点；（4）将（3）的样品用木质素吸附蛋白封闭，标记样品中的纤维素酶结合位点，得到纤维素酶结合位点的分布、数量及样品表面吸附的纤维小体荧光蛋白探针量；（5）比较步骤（4）和（2）的结果评价木质纤维生物质的纤维素酶可及性。本发明专利技术提供的方法能够原位观测和计数酶结合位点并实现可视化，从而直观地评价木质纤维生物质的酶可及性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于环境生物能源领域，涉及一种原位测定木质纤维生物质的纤维素酶可及性的方法。
技术介绍
随着能源短缺问题的加剧，寻找可替代的新能源十分必要。我国作为农业大国，木质纤维生物质每年固定的太阳能大约是人类能源消耗总量的10倍；因此，在未来的能源结构中木质纤维生物质将占据重要地位。但木质纤维生物质的木质素含量，纤维的聚合度、结晶度以及粒径、孔隙率等物理化学组成和结构很大程度上限制了木质纤维生物质的生物转化利用。木质纤维生物质基质的纤维素酶可及性是指单位量的基质中可以与纤维素酶 结合，并且能够被微生物利用或酶解的纤维素酶结合位点的量；它是基于酶水解的生物处理中最根本的限制因素。只有当纤维素表面位点能与酶接触、与酶吸附结合，才有可能进一步被催化水解。因此，需寻找一种准确测定木质纤维生物质酶结合位点的方法，用于评价基质的纤维素酶可及性，为评价各种木质纤维生物质的酶催化水解特性提供方法依据，为不同木质纤维生物质预处理方法及工艺提供理论指导。已有文献报道，基于比表面检测的氮吸附法(BET)、排阻色谱法(SEC)、小角X射线散射法(SAXS)等用于测定纤维素酶可及性都不能取得满意的结果。一些本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种原位测定木质纤维生物质的纤维素酶可及性的方法，其特征在于：包含以下步骤：（1）向木质纤维生物质样品中加入初始探针浓度为Et的纤维小体荧光蛋白探针溶液，标记样品的总的酶结合位点；（2）用荧光显微镜原位观测和计数木质纤维生物样品上荧光标记的总的酶结合位点的分布及数量，用荧光光度计测定标记溶液的上清液中游离纤维小体荧光蛋白探针浓度Efa，与初始探针浓度Et相比较，采用差量法计算得样品表面吸附的纤维小体荧光蛋白探针浓度Ea，并计算单位面积吸附的纤维小体荧光蛋白探针量Eua；（3）用洗脱液脱附样品上吸附的纤维小体荧光蛋白探针，释放总的酶结合位点；（4）将步骤（3）处理获得的样品用木质素吸附蛋白封闭后...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何品晶，柴丽娜，吕凡，章骅，邵立明，曹江林，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：