全人源抗人VEGF单抗分子及其应用制造技术

本发明专利技术涉及抗人VEGF单抗及其编码核酸序列。本发明专利技术特别与高亲和力低解离速率的抗人VEGF单抗有关。本发明专利技术的优选抗人VEGF单抗包含全人源Fc区和框架区以及通过分子进化获取的全人源的轻链和/或重链可变区。本发明专利技术还披露了这种全人源抗体组成的药物组成在人疾病的治疗中的应用以及在治疗中使用这种全人源抗体的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗人VEGF单抗及其编码核酸序列。本专利技术特别与高亲和力低解离速率的抗人VEGF单抗有关。本专利技术的优选抗人VEGF单抗包含全人源Fe区和框架区以及通过分子进化获取的全人源的轻链和/或重链可变区。本专利技术还披露了这种全人源抗体组成的药物组成在人疾病的治疗中的应用以及在治疗中使用这种全人源抗体的方法。
技术介绍
血管内皮生长因子的生物学功能血管内皮生长因子(Vascularendothelial growth factor,简写为 VEGF)是一种由刺激新生血管生长的细胞产生的信号蛋白，它是在血液循环系统供氧不足的情况下恢复向组织供氧机制的一个组成部分。 VEGF是生长因子的一个亚族，包括VEGF-A、VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D和胎盘生长因子(P1GF)，它们都是与血管发生和血管生成中的重要信号蛋白。在发现其他成员之前，VEGF-A 一直称为 VEGF。本专利技术中，除特别指定的外，VEGF即指VEGF-A。VEGF亚族的所有成员都能通过与细胞表面的酪氨酸激酶受体(VEGFRs)结合而引起二聚体化，并通过转磷酸化作用(尽管位点、时间和程度不同)而活化，从而刺激细胞反应。血管发生(Vasculogenesis)是指从循环或组织的内皮干细胞分化成新的能形成血管的内皮细胞的过程。这一过程特别与血管系统的胚芽发育有关。血管生成(angiogenesis)是指由已存在的血管内皮以出芽、分裂增殖等方式形成毛细血管丛的过程。这一过程与受伤组织的修复机制有关，在人的一生中都起着重要作用。已有很多工作证明，VEGF对正常和非正常血管生成有重要调节作用(Ferrara，et al，1997，Endocr Rev，18 :4-25)。研究发现，即使丢失了一个VEGF等位基因也将导致胚胎死亡，说明这一因子在血管系统发育和分化中起着不可取代的作用。此外，VEGF还是肿瘤和眼睛疾病新生血管化作用(neovascularization)的重要介导因子。研究证明，大多数人类癌症涉及 VEGF 的过量表达(Berkman, et al, 1993, J Clin Invest,91 :153-159 ；Brown, et al,1995, Human Pathol，26 :86-91 ；Brown, et al, Cancer Res，53 :4727-4735 ；Mattern,et al,1996,Brit J Cancer，73 :931-934 ；and Dvorak,et al,Am J Pathol,146 1029-1039)。另外，VEGF在眼液中的浓度与糖尿病患者以及缺血性肌萎缩相关的视网膜病人血管分化活性高度相关(Aiello，et al，1994，N Engl J Med, 331 :1480-1487)。最近的研究表明，受AMD影响的病人中，VEGF定位于无脉络新生血管膜(Lopez，et al，1996，InvestOphtalmo Vis Sci，37 :855-868)。抗VEGF中和抗体可以抑制裸鼠中多数人类肿瘤细胞系的生长(Kim, et al, 1993, Nature, 362 :841-844 ；ffarren, et al, 1995, J Clin Invest, 95 1789-1797 ；Borgstrom,et al,1996, Cancer Res, 56 :4032-4039 ；and Melnyk,et al,1996,Cancer Res, 56 :921-924),并抑制缺血性肌萎缩视网膜病模型中眼内血管生成(Adamis,etal，1996，Arch Opthalmol，114 :66-71)。因此，抗VEGF单抗或其他VEGF抑制剂是治疗实体瘤和各种眼内新生血管病的有前途的候选分子。血管生成是涉及从现有血管生成新生血管的生理过程(John SP, 2008, Retinaland Choroidal Angiogenesis, Springer ppll9)。尽管对这一名词长期争论，但血管发生是用于描述血管自发形成的术语。血管生成在生长、发育以及伤口癒合中是正常的、至关重要的过程。同时，它还是癌症从休眠向恶性转换的关键步骤。癌症中出现的血管发生可扩散因子是Greenblatt和Shubik(Greenblatt M, Shubik, PJ, 1968, Natl Cancer Inst,41 :111-124)发现的。VEGF的正常功能是，在胚胎发育过程中、受伤后以及产生新血管阻塞后形成旁路时产生新的血管。若VEGF过量表达，则可导致疾病。如果没有充足的营养供应，实体瘤就不能超过一定的体积(体积限制)。可以产生VEGF的肿瘤因形成新的血管从而获得营养，就能够体积限制继续生长并转移。VEGF的过量表达可引起眼睛或人体的其他部位出现血管性疾病。像bevacizumab这样的药物能够抑制VEGF并控制或延缓这些疾病的发生和发展。·细胞缺氧可诱发产生VEGF。当一个细胞缺乏氧气时，它就产生HIG(低氧症诱导因子，是一种转录调控因子)。HIF刺激VEGF的释放。然后循环中的VEGF可以与内皮细胞的VEGF受体结合，引发导致血管生成的酪氨酸激酶途径。HIFla和HIFl β总是表达的。但HIFl a遇氧不稳定，在氧气充足的情况下很容易降解。在缺氧情况下，HIFa很稳定，且HIFl α/β复合物可刺激VEGF释放。在实体瘤中，新生血管化作用使得肿瘤细胞相对于正常细胞获得生长优势并可自主分化。因此，在乳腺癌和若干种其他肿瘤中发现，肿瘤切片中微血管的密度与病人生存率有密切关系(Weidner, et al, 1991, N Engl J Med, 324 :1_6 ；Horak, et al, Lancet, 340 1120-1124(1992) ；Macchiarini, et al，1992，Lancet，340 :145-146)。VEGF 的过量表达可能是转移过程的早期步骤，是一个“血管生成”的开关。尽管VEGF与低生存率有关，但是在肿瘤发展中的真实机理尚不清楚。在类风关病人中，与TNFa相对应，也有VEGF的释放，从而导致内皮细胞通透性增强和浮肿，并刺激血管生成(形成毛细血管)。VEGF在糖尿病视网膜病(DR)也是重要的，在糖尿病人视网膜微循环可诱发视网膜缺氧性肌萎缩，这正是VEGF引起的。VEGF是前血管生成VEGF异构体超过正常表达的VEGFb异构体平衡的转换器。VEGF可进而引起在视网膜和眼睛的其他部位产生新血管，预示视力将受到威胁。VEGF在湿性AMD病理中具有重要作用，它导致了当今全球老龄化社会中失明的主要原因。尽管在病因和新生血管化作用的典型起源方面不同，AMD的血管病理学与DR具有很多相同特征。一旦释放，VEGF就可引发多种反应。它可以引起一个细胞存活、移动，甚至分化。因此VEGF是治疗癌症的潜在靶点。第一种抗VEGF药物是一种叫做bevacizumab的单抗，于2004年被批准上市。大约10至15%的病人从bevacizumab治疗中获益,但是bevacizumab有效性的生物标志物至今仍不清楚。已经知道VEGF具有促进内皮祖本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种全人源抗人VEGF单克隆抗体，所述全人源抗人VEGF单克隆抗体能特异性地与人VEGF结合。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘庆法，
申请(专利权)人：无锡天演生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：