本发明专利技术涉及抗人CD20单抗及其编码核酸序列。本发明专利技术特别与高亲和力低解离速率的抗人CD20单抗有关。本发明专利技术的优选抗人CD20单抗包含全人源Fc区和框架区以及通过分子进化获取的全人源的轻链和/或重链可变区。本发明专利技术还披露了这种全人源抗体组成的药物组成及其在人疾病的治疗中的应用以及在治疗中使用这种全人源抗体的方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗人CD20单抗。本专利技术特别与高亲和力、低解离速率的抗人CD20单抗有关。本专利技术还披露了这种全人源抗体组成的药物在人类疾病治疗中的应用。
技术介绍
⑶20蛋白，也称之为人B淋巴细胞限制性分化抗原或Bp35，是一种非糖基化的疏水穿膜磷酸化蛋白，其分子量为35kD，在所有成熟B细胞表面表达，由MS4A1基因编码(Valentine et al，1989，J Biol Chem 264(19) :11282-11287 ；and Einfield et al,1988,EMBO J7(3) :711-717)。在人体，⑶20在B细胞发育的整个过程中，除了第一和最后阶段外均进行表达；它从pre-pre B细胞到记忆细胞都存在，但是在pro_B细胞或浆细胞中不表达(Bona C,et al, 1996, Textbook of Immunology. Martin Soohoo,2rd edition). CRC Press, pl02.ISBN9783718605965)。曾经认为，它可能是B细胞激活过程中的一个调节步骤，是细胞周期启动、分化所需要的，并在B细胞发育和分化成成浆细胞过程中起重要作用。在B细胞淋巴瘤、毛发细胞白细胞瘤和慢性B细胞淋巴细胞白血病发现它的存在，在皮肤/黑色素瘤癌干细胞也发现它的存在(Fang D，et al.，2005，Cancer Res. 65(20) :9328-37)。CD20 存在于90%以上的外周血或淋巴器官的B细胞表面，并且在早前B细胞(early pre-B)发育过程中表达，直到浆细胞分化。CD20不但存在于正常的B细胞，也存在于恶性B细胞。特别是，CD20 在 90% 以上的 B 细胞非霍金奇(NHL)中表达(Anderson, et al (1984)Blood63 (6)1424-1433)。但是在造血干细胞，pro_B细胞，正常浆细胞和其他正常组织中没有发现它的存在(Tedder et al, 1985, J Immunol, 135 (2) :973-979)。在体液免疫反应(与由T细胞控制的细胞介导的免疫反应相对)中B细胞是其重要作用的淋巴细胞。B细胞的重要功能是制造抗抗原的抗体，起抗原提呈细胞(APCs)作用，并经与抗原作用最终发育成记忆细胞。B细胞是被动免疫系统的重要组分。另一个重要方面是，⑶20不发生遮蔽、调变或内部化(internalize) (Cragg MS,etal.，2005，Curr Dir Autoimmun 8:140-74)。所有这些背景都是使得它成为诱人的治疗性靶点。已经有几个抗人⑶20的单抗被成功用于与该靶点相关的恶性肿瘤的治疗，例如rituximab, Ibritumomab tiuxetan和tositumomab,它们都是治疗B细胞淋巴瘤和白血病的有效药物。抗人CD20单抗Ofatumumab (GenMab公司产品)2009年被FDA批准用于治疗慢性淋巴细胞白血病，正在开发的其他抗人⑶20抗体治疗药物还有AME-133v(AME开发)andIMMU-106(veltuzumab)(Morrow KJ, Methods for Maximizing Antibody Yields. GeneticEngineering&Biotechnology News (Mary Ann Liebert, Inc.) :p. 36)。Rituximab,商品名为Rituxan和MabThera，是人鼠嵌合的IgGlkappa型抗人⑶20基因工程抗体，其分子量为145kD，与人⑶20的亲和力大约是8. OnM，可有效地破坏B细胞。抗人⑶20抗体治疗可以单独注射，也可以与第二种放射性标记的或偶联了化学治疗剂的抗人CD20抗体联用。FDA已经批准了用一种这样的抗⑶20抗体Rituxan用于治疗复发性及已治疗过的低度非霍金奇淋巴细胞瘤(NHL)。尽管Rituxan对于治疗B细胞淋巴瘤有治疗效果，但被治疗的病人经常复发。最近发现，Rituxan对类风湿关节炎有疗效(Edwards J, et al, 2004, N Engl JMed350 (25) :2572-81)，并被FDA批准与MTX联用治疗对一种或多种抗TNFa治疗方法无效的中重度活动性类风湿关节炎。已有证据表明，Rituxan对多种自身免疫疾病有效，并已被off-label用于治疗难治性多发性硬化(Stephen LH, et al,2009, N Engl J Med 2008 ；358 :676-688)、系统性红斑狼疮以及自身免疫性贫血。尽管CD20在促进B细胞增值和分化方面的实际功能和机理还不清楚，但是它是以抗体为基础的控制或杀死与癌症和自身免疫疾病有关的B细胞的重要靶点已是不争的事 实。特别是，在NHL这样的癌症细胞中CD20的表达使其成为以抗体为基础的治疗方法的重要靶点，用于使治疗剂特异性地攻击⑶20阳性癌症细胞。然而，在至今已经获得的证据证明CD20是免疫治疗的有效靶点的同时，也发现现有的鼠源、嵌合甚至人源化或全人源的抗体因为其HAMA或HACA反应、高达375mg/m2的剂量和因为注射间隔过短而导致的频繁注射，作为治疗剂仍不够理想。因此，存在着进一步改进抗人⑶20抗体，使其在治疗或预防与⑶20表达有关的疾病方面更为有效的现实需求。PEG化是一种有效的改进蛋白质特性的方法。与蛋白分子共价结合的PEG可以起到遮蔽作用，使其免疫原性和抗原性降低，借以逃避免疫系统的攻击，提高其流体动力学体积，通过降低肾排而延长在循环系统的滞留时间。PEG化还可以为疏水性药物或蛋白提供良好的水溶性。因此，PEG化可以用于改进抗体，特别是scFv，Fab这类半衰期短的分子形式的特性。纯化的scFv, Fab分子可以定点共价链接上带分支的PEG分子。现在需要的是具有高亲和力和低解离速率的抗人CD20分子，使得治疗过的B细胞淋巴瘤病人不再复发，并且给未进行免疫抑制的病人施用后不引起HAMA或HACA反应或引起的可能性大大降低，在循环系统中的半衰期长以延长注射间隔。当然，也期望产品的成本能够大大降低。
技术实现思路
本专利技术提供了一种全人源抗人⑶20单克隆抗体(以下简称抗人⑶20单抗分子)及其编码核酸序列。特别是，本专利技术的这种分子对人CD20分子具有高亲和力和低解离速率。本专利技术中，所述抗体分子的重链和轻链是全人源的，尽管嵌合的或人源化的也可以使用，但是用于人体时，全人源的可以避免很多副作用，例如HAMA和HACA反应引起的副作用。本专利技术的某些实施例提供了包括抗人CD20单抗分子的组合物，所述分子包含(a) 一个由可变区和Fe片段等部分构成的完整的或不完整的轻链，其可变区由氨基酸序列SEQ IDNO 1或由SEQ ID NO 3或编码同样氨基酸序列的等效序列编码的SEQ ID NO 4所示的氨基酸序列组成jPb) —个由可变区和Fe片段等部分构成的完整的或不完整的重链，其可变区包含SEQ. ID NO 2或由SEQ. ID NO 5或其等效序列编码的SEQ. ID NO 6所示的氨基酸序列。本专利技术的抗人⑶20单抗分子包括重链与轻链；所述轻链包含有序列如SEQ IDNO: I本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种全人源抗人CD20单克隆抗体，所述全人源抗人CD20单克隆抗体能特异性地与人CD20结合。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘庆法，
申请(专利权)人：无锡天演生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。