一种超敏C反应蛋白检测方法及检测试剂技术

本发明专利技术涉及免疫检测，具体涉及一种超敏C反应蛋白检测方法及检测试剂。该检测方法，包括以下步骤：（1）测试多个已知浓度的标准液，建立浓度与散射值的标准数据库；（2）将标准曲线制作成试剂的测试卡，在特定蛋白分析仪上刷卡后即把标准数据库录入仪器计算软件，通过测试样本的散射值后通过计算可以得到样本的浓度结果。该检测方法及检测试剂检测速度快，特异性高，可以在特定蛋白分析仪上检测体液，特别是血液中微量生物化学物质，检测范围为0.4mg/L-350mg/L，扩大了超敏C反应蛋白的检测范围。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫检测，具体涉及一种超敏C反应蛋白检测方法及检测试剂。
技术介绍
1930年，Tillett和Francis首次在急性大叶性肺炎患者的血清中发现一种能在Ca2+存在时与肺炎球菌细胞壁中的C 一多糖发生特异性沉淀反应的物质。1941年Avery等测知它是一种蛋白质，故称为C反应蛋白(CRP)。 C反应蛋白是一类正急性时相反应蛋白，随着损伤、炎症或各类疾病迅速增加。 常规C反应蛋白检测试剂盒的检测范围3mg/L — 350mg/L，目前超敏C反应蛋白试剂盒最宽的检测范围是lmg/L — 350mg/L，还可以继续优化，让超敏C反应蛋白能检测到更低含量。
技术实现思路
为解决现有技术的上述问题，本专利技术提供一种超敏C反应蛋白检测方法及检测试剂。本专利技术的超敏C反应蛋白检测方法，其特征是，包括以下步骤 (1)测试多个已知浓度的标准液，建立浓度与散射值的标准数据库； (2)将标准曲线制作成试剂的测试卡，在特定蛋白分析仪上刷卡后即把标准数据库录入仪器计算软件，通过测试样本的散射值后通过计算可以得到样本的浓度结果。其中，步骤(I)测试多个已知浓度的标准液，建立浓度与散射值的标准数据库的操作为①用处理稀释液将已知浓度的标准品稀释成多个不同浓度将多个已知不同浓度的C反应蛋白标准品分别与缓冲液Rl试剂混匀制得抗原标准液，然后将乳胶抗体R2试剂加入抗原标准液、同时用特定蛋白分析仪测定标准品散色值，从而建立散射值-浓度对应标准数据库；③测定待检样品的散色值用处理稀释液按测试要求稀释待检样品，将稀释样本与缓冲液Rl试剂混匀制得抗原液，然后将乳胶抗体R2试剂加入抗原液、同时用特定蛋白分析仪测定待检样品的散色值；④查询C反应蛋白浓度将③步骤测定的散色值与散射值-浓度数据库对照，查询得知C反应蛋白浓度。所述处理稀释液试剂包括如下组分SDS O. 1%、叠氮钠O. 12%. 所述缓冲液Rl试剂包括如下组分NaCl O. 9%、Tirs I. 2%、Na2CO3 O. 06% ； 所述乳胶抗体R2试剂包括如下组分羊抗人C反应蛋白抗体致敏的苯乙烯乳胶O. 6%、甘氨酸I. 1%、碳酸钠O. 1%、碳酸氢钠O. 1% ； 本专利技术所述超敏C反应蛋白检测试剂，该检测试剂包含处理稀释液、缓冲液Rl试剂、乳胶抗体R2试剂，其中，处理稀释液包含SDS O. 1% O. 5 %、叠氮钠O. 12% O. 4%，试剂Rl包含 NaCl O. 9% 2. 1%、Tirs I. 2% 2. 5%、Na2CO3 O. 06% O. 1% ;试剂 R2 包含羊抗人 C反应蛋白抗体致敏的苯乙烯乳胶O. 2% O. 7%、甘氨酸I. 1% 2%、碳酸钠O. 1% O. 9%、碳酸氢钠O. 1% O. 9% ； 优选地，所述处理稀释液试剂包括如下组分SDS O. 1%、叠氮钠O. 12% ； 所述缓冲液Rl试剂包括如下组分NaCl O. 9%、Tirs I. 2%、Na2CO3 O. 06% ； 所述乳胶抗体R2试剂包括如下组分羊抗人C反应蛋白抗体致敏的苯乙烯乳胶O. 6%、甘氨酸I. 1%、碳酸钠O. 1%、碳酸氢钠O. 1%。该检测方法及检测试剂检测速度快，特异性高，可以在特定蛋白分析仪上检测体液，特别是血液中微量生物化学物质，检测范围为O. 4mg/L-350mg/L，扩大了超敏C反应蛋白的检测范围。 附图说明图I是散射值与浓度的曲线图。具体实施例方式以下提供本专利技术的一些优选实施例，以助于进一步理解本专利技术，但本专利技术的保护范围并不仅限于这些优选实施例。实施例I 以静脉全血为样本测试超敏C反应蛋白，包括如下步骤 a、建立散射值与多个已知标准品浓度的散射值-浓度对应数据库检测方法为定时散射比浊法，将10微升的多个不同浓度的标准品分别与440微升的处理稀释液混合，制成标准品稀释样本；将标准品稀释样本与400微升的Rl混合，再加入40微升的R2，第20秒读取的该时间段最低散射值得Al，第80秒后读取散射值A2，标准品散射值为A2减去Al的差值，根据多个标准品浓度与散射值差值建立标准品散射值-浓度对应数据库(如图1，图I是散射值与浓度曲线图。)，仪器的检测光源为670nm。(其中，处理稀释液试剂包括如下组分=SDS O. 1%、叠氮钠O. 12% ;缓冲液Rl试剂包括如下组分NaCl O. 9%、Tirs I. 2%、Na2CO3O.06% ;乳胶抗体R2试剂包括如下组分羊抗人C反应蛋白抗体致敏的苯乙烯乳胶O. 6%、甘氨酸I. 1%、碳酸钠O. 1%、碳酸氢钠O. 1%。) b、测定静脉全血的散射值取静脉全血10微升，加入处理稀释液440微升，摇匀至完全溶血，制成稀释样本；将稀释样本与400微升的Rl混合，再加入40微升的R2，第20秒读取的该时间段最低散射值得Al，第80秒后读取散射值A2，样本散射值为A2减去Al的差值为1800。C、查询样本的浓度步骤测定的散射值1800与数据库对照，查询得知样本检测浓度为30mg/L。其中实施案例I中检测样本可以是末梢全血、血清或血浆。在实践中，取样量为10微升至20微升，取样量不会因为少而产生测试结果一致性偏差大，相比较目前市场上取样量小于5微升的检测方法，其检测结果的一致性将容易受到取样误差影响检测结果。步骤b检测样本，测试时间总共为80秒，检测范围为O. 4mg/L-350mg/L,目前市场上超敏C反应检测试剂的检测范围都没有这么宽。实施例2准确度验证实施取具有溯源性的血清高值质控物和低值质控物各一份，用试剂分别进行检测，各检测10次，与质控物靶值进行对照。结果见下表I : 表I 由表I数据可知，本专利技术的C反应蛋白检测准确度高。实施例3 精密度验证实施取具有溯源性的血清高值质控物和低值质控物各一份，用试剂分别进行检测，各检测10次，计算检测结果的平均值、标准差和变异系数。结果见下表2 表2 茨数 I低值质控物(mg/L) I高值质控物(mg/L) 1.150.151"20. 312 2" 150. 334.21.111 3. 150.367"20. 521 4.151.137.21.033 5" 150.456■ 21.093 6. 151.990"20.681 7. 151.778"20. 555 8_ 151. 161"21.087 9.151.155~21. QQl 10" 152. 390"21.021 平均 .151.0919 "20.8415 标准差.O. 7719 "0.295变异系数|θ.51%11. 4%- 由表2中变异系数可知，本发名检测C反应蛋白具有较高的精密度。实施例4 灵敏度验证实施取具有溯源性的质控物稀释至检测范围下限附件进行测定，重复5次，计算平均值与质控物靶值对照。见表3表3 及数 I低值质控物(mg/L)— 10.432 20.434 30.407 40.437 50.406 平均值|θ. 42权利要求1.一种超敏C反应蛋白检测方法，其特征是，包括以下步骤 (1)测试多个已知浓度的标准液，建立浓度与散射值的标准数据库； (2)将标准曲线制作成试剂的测试卡，在特定蛋白分析仪上刷卡后即把标准数本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种超敏C反应蛋白检测方法，其特征是，包括以下步骤：（1）测试多个已知浓度的标准液，建立浓度与散射值的标准数据库；（2）将标准曲线制作成试剂的测试卡，在特定蛋白分析仪上刷卡后即把标准数据库录入仪器计算软件，通过测试样本的散射值后通过计算可以得到样本的浓度结果。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：韦胜富，李晓，孙海江，王建东，李淮彬，
申请(专利权)人：深圳市希莱恒医用电子有限公司，
类型：发明
国别省市：