本发明专利技术公开了一种血斑标本采集和处理方法及其采集卡干血斑DNA提取方法。所述血斑标本采集和处理方法，包括以下步骤：（1）采血；（2）采集卡血斑处理；（3）采集卡干血斑的保存；（4）采集卡干血斑的递送。本发明专利技术的血斑标本可在常温保存，耐运输，方便送检，可代替抗凝全血作为基因诊断的DNA提取标本。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，具体是一种血斑标本采集和处理方法及其采集卡干血斑DNA提取方法。
技术介绍
目前，用于地中海贫血基因诊断的DNA是从抗凝全血中提取的。该方法用柠檬酸钠或EDTA抗凝管保存静脉血，需在_20°C冰箱中低温保存，不耐运输，送检不方便。因些，急需一种方便运输的样本采集方法和高提取率的DNA提取方法
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决上述问题，提供一种血斑标本采集和处理方法及其采集卡干血斑DNA提取方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的 一种血斑标本采集和处理方法，包括以下步骤 (1)米血 Φ ·婴儿采血 ()用热毛巾温浴采血部位不超过41°C，3 5分钟； (i i)酒精消毒，用无菌纱布垫擦干； (iii)针刺，无菌纱布垫擦去第一滴血； (Iv )用血样标本采集卡蘸取单个血滴，让血滴充分浸润采血圈，形成血斑；至少采集3个米血圈； 上述婴儿米血，6周 4月或小于5kg的婴儿米用脚后跟米血法；4 10月或5 IOkg的婴儿采用脚大拇指采血；大于10月或大于IOkg的婴儿采用手指采血；②·采用静脉采血，用柠檬酸钠或EDTA抗凝管静脉血，采集的抗凝全血用移液器移取75 80ul全血，对准血样标本采集卡采血圈中心缓慢将血液滴加在采集卡上，形成血斑，避免气泡产生；至少采集3个血圈； 上述静脉采血用于婴儿之外的人群； (2)采集卡血斑处理 血样采集完毕后，将制成的采集卡在干燥桌面放置3 4小时风干，形成干血斑，不要放在太阳下晾晒或用任何人工方法(如烘干机)加速干燥；(3)采集卡干血斑的保存 采集卡风干后，将每张采集卡分装入封口袋中，并在封口袋中放入干燥剂，轻轻将封口袋的空气挤压出去在封口，遵循一袋一卡的原则，以避免交叉污染； (4)采集卡干血斑的递送 准确填写样本信息卡后，将采集卡和信息卡一同放入大信封，采用常温运输。上述采集卡干血斑DNA提取方法，包括以下步骤 (1)将采集卡上的2个或以上血斑用打孔器打孔3*3mm(或将圆形的血斑剪下后，剪为约3*3_的样品)，置于I. 5ml离心管中； (2)加入300 400ul的TissueLysis Buffer,加入20ul蛋白酶K，震荡混匀； (3)56°C温浴lh，期间颠倒混匀3 5次； (4)取200ul上清液转入新的I.5ml离心管中，加入200ul的溶液L，70°C温浴IOmin,期间颠倒2 3次； (5)加入200ul4°C的无水乙醇，室温放置5min ； (6)将液体转入带硅胶柱的2ml离心管中，IOOOOrpm离心lmin，倒掉离心管的收集管中的废液，将硅胶柱放入收集管中； (7)在硅胶柱中加入500ul溶液Wl，10000rpm离心lmin，倒掉收集管中的废液，将硅胶柱放入收集管中； (8)在娃胶柱中加入500ul溶液W2,IOOOOrpm离心lmin,倒掉收集管中的废液； (9)重复步聚8； (10)将硅胶柱放入收集管中，12000rpm空管离心3min，倒掉收集管中的废液； (11)将硅胶柱放入新的I.5ml离心管中，开盖静置I 2min，往硅胶柱中心加入60ul的TE洗脱液，静置2 5min, 12000rpm离心2min,弃柱得DNA ； 所述溶液L为含有10% GuSCN、10% Tris的水溶液，溶液Wl为含有10%GuSCN、P/oEDTA、25%无水乙醇的水溶液，溶液W2为含有75%无水乙醇的水溶液，TE洗脱液为含有l%Tris、1%EDTA的水溶液，以上溶液除无水乙醇是体积浓度外，其他的皆为质量百分比浓度。本专利技术采用过柱法的提取DNA，操作简单，快速省时，获得的DNA纯度高。血斑标本可在常温保存，耐运输，方便送检，可代替抗凝全血作为基因诊断的DNA提取标本。附图说明图I为本专利技术所采用的血样标本采集卡。图2为采集卡干血斑。具体实施例方式以下通过实施例对本专利技术进行详细的说明。实施例 一、对22个成年人进行本专利技术的血斑标本采集和处理 I.静脉采血用柠檬酸钠抗凝管静脉血，采集的抗凝全血用移液器移取80ul全血，对准如图I所示的血样标本采集卡采血圈中心缓慢将血液滴加在采集卡上，形成血斑，避免气泡产生；采集3个血圈；2.采集卡血斑处理 血样采集完毕后，将制成的采集卡在干燥桌面放置4小时风干，形成如图2所示的干血斑； 3.采集卡干血斑的保存 采集卡风干后，将每张采集卡分装入封口袋中，并在封口袋中放入干燥剂，轻轻将封口袋的空气挤压出去在封口，遵循一袋一卡的原则，以避免交叉污染； 4.采集卡干血斑的递送 准确填写样本信息卡后，将采集卡和信息卡一同放入大信封，采用常温运输。 上述采集卡干血斑DNA提取 1.将采集卡上的2个圆形的血斑剪下后，剪为3*3mm的样品，置于I. 5ml离心管中(每处理完一个样本后，剪刀均需用75%乙醇擦拭，晾干后在酒精灯上烧热)； 2.加入300ul的Tissue Lysis Buffer,加入20ul蛋白酶K,震荡混勻； 3.56°C温浴lh，期间颠倒混匀4次； 4.取200ul上清液转入新的I.5ml离心管中，加入200ul的溶液L，70°C温浴lOmin，期间颠倒3次； 5.加入200ul4°C的无水乙醇，室温放置5min ； 6.将液体转入带硅胶柱的2ml离心管中，IOOOOrpm离心lmin，倒掉离心管的收集管中的废液，将硅胶柱放入收集管中； 7.在硅胶柱中加入500ul溶液Wl (使用前先检查是否加入无水乙醇)，IOOOOrpm离心lmin，倒掉收集管中的废液，将硅胶柱放入收集管中； 8.在硅胶柱中加入500ul溶液W2 (使用前先检查是否加入无水乙醇)，IOOOOrpm离心lmin，倒掉收集管中的废液； 9.重复步聚8； 10.将硅胶柱放入收集管中，12000rpm空管离心3min，倒掉收集管中的废液； 11.将硅胶柱放入新的I.5ml离心管中，开盖静置2min，往硅胶柱中心加入60ul的TE洗脱液(55°C预热)，静置5min，12000rpm离心2min，弃柱得血斑DNA。二、对上述22个成年人进行传统的抗凝全血DNA采集和处理 使用传统检测手段对同样的22个成年人进行抗凝全血DNA的采集和处理，得到抗凝全血 DNA。三、样品检测 将上述提取的血斑DNA和抗凝全血DNA采用潮州凯普生物化学有限公司生产的α -和β-地中海贫血基因检测试剂盒进行地贫基因检测。22例抗凝全血DNA和血斑DNA的地贫基因检测结果如下权利要求1.一种血斑标本采集和处理方法，包括以下步骤 (1)米血 X .婴儿采血 G )用热毛巾温浴采血部位不超过41°C，3 5分钟； Gi)酒精消毒，用无菌纱布垫擦干； Gii)针刺,无菌纱布垫擦去第一滴血； (IV )用血样标本采集卡蘸取单个血滴，让血滴充分浸润采血圈，形成血斑；至少采集3个米血圈； 上述婴儿米血，6周 4月或小于5kg的婴儿米用脚后跟米血法；4 10月或5 IOkg的婴儿采用脚大拇指采血；大于10月或大于IOkg的婴儿采用手指采血； I ·采用静脉采血，用柠檬酸钠或EDTA抗凝管静脉血，采集的抗凝全血用移液器移取75 80ul全本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种血斑标本采集和处理方法，包括以下步骤：（1）采血.？婴儿采血（）用热毛巾温浴采血部位：不超过41℃，3～5分钟；（）酒精消毒，用无菌纱布垫擦干；（）针刺，无菌纱布垫擦去第一滴血；（）用血样标本采集卡蘸取单个血滴，让血滴充分浸润采血圈，形成血斑；至少采集3个采血圈；上述婴儿采血，6周～4月或小于5kg的婴儿采用脚后跟采血法；？4～10月或5～10kg的婴儿采用脚大拇指采血；大于10月或大于10kg的婴儿采用手指采血；.？采用静脉采血，用柠檬酸钠或EDTA抗凝管静脉血，采集的抗凝全血用移液器移取75～80ul全血，对准血样标本采集卡采血圈中心缓慢将血液滴加在采集卡上，形成血斑，避免气泡产生；至少采集3个血圈；上述静脉采血用于婴儿之外的人群；（2）采集卡血斑处理血样采集完毕后，将制成的采集卡在干燥桌面放置3～4小时风干，形成干血斑；（3）采集卡干血斑的保存采集卡风干后，将每张采集卡分装入封口袋中，并在封口袋中放入干燥剂，轻轻将封口袋的空气挤压出去在封口，遵循一袋一卡的原则，以避免交叉污染；？（4）采集卡干血斑的递送准确填写样本信息卡后，将采集卡和信息卡一同放入大信封，采用常温运输。408010dest_path_image001.jpg,2012103642947100001dest_path_image002.jpg,143885dest_path_image003.jpg,2012103642947100001dest_path_image004.jpg,936261dest_path_image005.jpg,2012103642947100001dest_path_image006.jpg...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：苏彬峰，邱美兰，卢敏，
申请(专利权)人：广东凯普生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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