本发明专利技术提供了一种含有NAD+或NADH的稳定的组合物，可使NAD+和NADH长期稳定保持其生物活性。本发明专利技术通过使用包括海藻糖、甘油、缓冲液、表面活性剂的稳定剂而提高NAD+和NADH溶解状态稳定性。本发明专利技术还提供一种稳定NAD+或NADH的方法，以及提供海藻糖、甘油、缓冲液、表面活性剂和PH值调整剂组合物用于增加NAD+或NADH的稳定性的用途。本发明专利技术可用于乳酸脱氢酶试剂、丙氨酸转移酶试剂、天冬氨酸氨基转移酶试剂、尿素试剂盒等，具有广泛的用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生物
，涉及了一种含有NAD+或NADH的稳定的组合物，以及增加NAD+或NADH稳定性的方法。
技术介绍
烟酸胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadenine dinucleotide,简称为 NAD),是一种转递电子的辅酶，它出现在细胞很多新陈代谢反应中。NADH是它的还原形式。NAD是脱氢酶的辅酶，如乙醇脱氢酶(ADH)，用于氧化乙醇。它在糖酵解、糖异生、三羧酸循环和呼吸链中发挥着不可替代的作用。中间产物会将脱下的氢递给NAD，使之成为NADH。而NADH则会作为氢的载体，在呼吸链中通过化学渗透偶联的方式，合成ATP。 在吸光方面，NADH在260nm和340nm处各有一吸收峰，而NAD则只有260nm —处吸收峰，这是区别两者的重要属性。这同时也是很多代谢试验中，测量代谢率的物理依据。NAD在260nm的吸光系数为I. 78X IOL /(moI .cm)，而NADH在340nm的吸光系数为6. 2X IOL/(mo I · cm)。NAD在体外诊断试剂配方上有很多应用比如乳酸脱氢酶试剂、丙氨酸转移酶试齐U、天冬氨酸氨基转移酶试剂、尿素试剂盒、α-羟丁酸脱氢酶等。因此本保护剂有较广泛的应用。NAD和NADH辅酶是不稳定的。NAD是碱不稳定的分子，还原形式的NADH对酸不稳定，如差向异构化是已知的降解途径。在现有技术中，稳定NAD和NADH的手段有(1)如CN200680027359. I所公开的(公开日2008-07-30)，通过制备衍生物的方法使之稳定，或对储存环境的特殊要求，如冷却或者干燥储存增加其稳定性。(2)如CN200680027359. I所公开的(公开日2008-07-30)，采用稳定剂，如海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮和血清清蛋白形成聚合物网络而增加NAD或NADH的稳定性。(3)如CN87100939所公开的(公开日1987-11-04)，以碱性水溶液环境、多羟基烷基溶剂(20-90%V/V)如丙二醇、硼酸增加其稳定性。(4)如CN200410043900. O所公开的(公开日2005-05-18)，采用表面活性剂如O. I 2ml吐温-20增加其稳定性。专利技术人注意到，即使在并不剧烈的条件下(比如含水溶液中)，辅酶NAD和NADH仅仅通过环境湿度进行水解也会导致测量结果不精确。因此，专利技术人意识到提高NAD+和NADH在体外溶解状态时的稳定性将对提高测量结果的精确性具有重要作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种含有NAD+或NADH的稳定的组合物，本专利技术组合物可提高NAD+和NADH在体外溶解状态时的稳定性。本专利技术的另一目的在于提供一种稳定NAD+或NADH的方法。本专利技术的另一目的在于提供一种包含海藻糖、甘油、缓冲液和表面活性剂的组合物及其用途，即用于增加NAD+或NADH的稳定性。本专利技术的目的可通过以下技术方案实现通过使用将海藻糖、甘油、缓冲液、表面活性剂混合组成一定的溶液，然后再将NAD+和/或NADH溶解其中。上述物质组合在本专利技术中称为稳定剂，通过研究发现能够显著提高溶解状态的NAD+和/或NADH的稳定性。具体来说，本专利技术含有NAD+或NADH的稳定的组合物包括NAD+或NADH以及所述的稳定剂，所述稳定剂包括海藻糖、甘油、缓冲液和表面活性剂。NAD+或NADH在组合物中的含量为 3-40g/l。本专利技术通过使用稳定剂提高NAD+和/或NADH在溶解状态的稳定性，稳定剂可以由以下物质按照不同比例组合 (I)海藻糖，含量为10g/l 60 g/Ι，进一步优选为30g/l 40 g/1。(2)甘油含量为5g/l 30g/l，进一步优选为15g/l 20g/l。 (3)缓冲液可为tris盐缓冲液、goods盐缓冲液、磷酸盐缓盐冲液、碳酸盐缓冲液或这些缓冲液的组合。所述Tris缓冲液中，Tris的含量为50mmol/l 100mmol/l。所述磷酸盐缓冲液中磷元素的含量为50mmol/l lmol/1。(4)表面活性剂可为吐温20、吐温80、聚氧乙烯月桂醚、聚乙二醇、SDS或者这几种物质的混合物，其中，所述吐温20含量为llg/Ι 10g/l，吐温80含量为lg/Ι 10g/l，聚氧乙烯月桂醚含量为lg/Ι 10g/l。聚乙二醇含量为lOmmol/1 500mmol/l，SDS含量为 lg/Ι 10g/lo如上所述的稳定剂用于增加NAD+或NADH稳定性的用途。所述稳定剂可用于乳酸脱氢酶试剂、丙氨酸转移酶试剂、天冬氨酸氨基转移酶试剂、尿素试剂盒的配制。本专利技术进一步提供一种稳定NAD+或NADH的方法，包括将NAD+或NADH溶解于含有海藻糖、甘油、缓冲液、表面活性剂的溶液中。所述溶液中，海藻糖含量为10g/l 60 g/I，甘油含量为5g/l 30g/l，缓冲液可为tris盐缓冲液、goods盐缓冲液、磷酸盐缓盐冲液、碳酸盐缓冲液或这些缓冲液的组合，所述Tris缓冲液中，Tris的含量为50mmol/l lOOmmol/1，所述磷酸盐缓冲液中磷元素的含量为50mmol/l lmol/1 ;表面活性剂可为吐温20、吐温80、聚氧乙烯月桂醚、聚乙二醇、SDS或者这几种物质的混合物，其中，所述吐温20含量为llg/Ι 10g/l，吐温80含量为lg/Ι 10g/l，聚氧乙烯月桂醚含量为lg/Ι 10g/l。聚乙二醇含量为 10mmol/l SOOmmol / I, SDS 含量为 lg/Ι 10g/l。本专利技术通过将海藻糖、甘油、缓冲液、表面活性剂应用于提高NAD+或NADH的稳定性，显著提高了 NAD+和NADH在体外溶解状态时的稳定性，在常规的储存条件下保持期可达到十八个月。专利技术人通过对比实验发现，未采用本稳定剂时，在相同储存条件下保持期一般为十二个月。本专利技术可以应用到乳酸脱氢酶试剂、丙氨酸转移酶试剂、天冬氨酸氨基转移酶试齐U、尿素试剂盒、α -羟丁酸脱氢酶等试剂盒的配制过程，因此具有较广的应用价值。以下结合具体实施例进一步说明本专利技术，应理解，具体实施方式仅用于说明本专利技术，而非限制本专利技术。具体实施例方式实施例I 本专利技术在乳酸脱氢酶试剂盒中的应用首先配制试剂盒试剂I :乳酸40mmol/l, 100mmol/l Tris溶液,使用lmol/1盐酸或氢氧化钠调节pH至9. 2。再配制试剂盒试剂2 :含有海藻糖10g/l，甘油lg/1，Tris O. lmol/1，吐温20O.lg/Ι的溶液,然后使用lmol/1盐酸或氢氧化钠将其pH调至7. O,再称取若干NAD+溶解到IOml上述保护剂中，使其浓度达到20g/l，搅拌 均匀。上述试剂I和试剂2组成乳酸脱氢酶试剂盒，本试剂盒在2 8 °C保持期可达到十八个月。通过对比试验，未加稳定剂的乳酸脱氢酶试剂盒在相同条件下仅可保持十二个月。实施例2 本专利技术在在α-羟丁酸脱氢酶试剂盒的应用 首先配制试剂盒试剂I :含有海藻糖5g/l，甘油10g/l ,Tris O. lmol/1，吐温20 O. 5g/I的溶液，然后将其PH调至7. 0，再称取IOmg NAD溶解到IOml上述保护剂中，搅拌均匀。再配制试剂盒试剂2 :硝酸50mmol/l溶液，α -氧络丁酸3mmol/l。调节pH至7.5。上述试剂I本文档来自技高网...
【技术保护点】
含有NAD+或NADH的稳定的组合物，其特征在于，含有NAD+或NADH以及稳定剂，所述稳定剂包括海藻糖、甘油、缓冲液、表面活性剂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王辉，王军峰，吴静，孟菲，王宇飞，
申请(专利权)人：上海执诚生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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