本发明专利技术公开了一种高纯度核糖核酸的制备工艺，通过在酵母浆料中加入碱液，使酵母破壁，然后离心得到核糖核酸粗溶液，加入复合酶进行酶解后，将酶解液过滤，调节滤液的pH使核糖核酸析出，洗涤、干燥，得到高纯度核糖核酸。本发明专利技术工艺制备的核糖核酸纯度可达90%以上，与现有的方法相比，其纯度提高了近10个百分点；核糖核酸的总收率可高达60%，提取效率大大提高；且提取条件较为温和，能耗低，基本不会产生难以处理的废弃物，对环境的污染基本没有，或极少对环境造成污染。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种エ业化生产核糖核酸的方法，特别涉及一种高纯度核糖核酸的制备エ艺。
技术介绍
核糖核酸是酶解法生产5' —核苷酸的重要エ业原料，近年来ー些研究表明，核糖核酸及其降解物之核苷酸主要生理功能是广泛參与人体的能量代谢、蛋白质合成，具有提高各种酶的活性、活化细胞功能、促进抗体形成、增强免疫功能的作用。对婴幼儿来说，核酸及核苷酸可促进神经细胞的生长发育，是与“神经生长因子”或且可以作为神经生长物质利用的营养成分，促进铁质吸收及影响脂质代谢，改变肠道菌·丛及提供肠道粘膜完整所需的营养，达到提升免疫功能的效果。根据有关规定，婴幼儿奶粉中添加的核苷酸必须是由核糖核酸经酶解法生产得到的。核苷酸广泛应用于食品及调味品作为添加剤、以及药品、化妆品等，而高纯度的核糖核酸对酶解法生产核苷酸的有关键性的影响，高纯度核糖核酸的需求量巨大。从微生物菌体中提取核糖核酸是经济安全的，提取方法有多种，如浓盐提取法、稀碱提取法、苯酚法、十二烷基磺酸法、细胞破碎均质法等等。目前エ业化生产通常采用浓盐法和稀碱法。浓盐法存在废水含盐份过高，产生的废水难以处理，环境污染严重；稀碱法提取的核糖核酸提取液里存在着大量的糖类、肽类杂质，难以分离，产品纯度低；而其它方法则成本太高。现有的化学方法提取方法，制备得到的核糖核酸的纯度普遍不高，一般在80%左右，核糖核酸的总提取率一般不超过50%，在提取、纯化的过程中会损失大量的核糖核酸。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高纯度核糖核酸的制备エ艺。本专利技术所采取的技术方案是 一种核糖核酸的制备エ艺，包括如下步骤 1)在酵母浆料中加入碱液，使酵母破壁，得到破壁酵母液； 2)将破壁酵母液离心，得到核糖核酸粗溶液； 3)在核糖核酸粗溶液中加入复合酶，进行酶解，将酶解液过滤，取滤液； 4)调节滤液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸并洗涤，干燥，得到高纯度核糖核酸； 其中，复合酶由1000 10000U的￠-葡聚糖酶、5000 20000U的淀粉酶和50000 200000U的蛋白酶配合而成。优选的，加入碱液使酵母浆料的pH为10. 5 11. 5，使酵母破壁。优选的，加入碱液后，在15 45°C下进行破壁处理；在酵母破壁后，中和其中残留的碱液，得到破壁酵母液。优选的，蛋白酶为木瓜蛋白酶。优选的，进行酶解处理的时候，在核糖核酸粗溶液中加入螯合剂；螯合剂优选为EDTA-Na2。优选的，螯合剂的加入量为每升核糖核酸粗溶液中加入I 5g。酶解的温度为21 57°C，优选为37 50で。本专利技术的有益效果是 本专利技术エ艺，制备得到的核糖核酸纯度可达90%以上，与现有的通用方法相比，其纯度提高了近10个百分点； 本专利技术エ艺，核糖核酸的总收率可高达60%，提取效率大大提高；· 本专利技术エ艺，提取条件较为温和，能耗低，基本不会产生难以处理的废弃物，对环境的污染基本没有，或极少对环境造成污染。具体实施例方式下面结合实施例，进ー步说明本专利技术。实施例I 1)在固含量为10%的酵母浆中加入Na2CO3溶液，调节酵母浆的pH为10.8，20°C抽取破壁2. 5小时，加入盐酸中和剩余的碱，得到破壁酵母液； 2)将破壁酵母液离心，去除菌体，得到核糖核酸粗溶液； 3)在核糖核酸粗溶液加入复合酶，使各酶的终浓度分别为P—葡聚糖酶1000U/し淀粉酶5000U/L、木瓜蛋白酶50000U/L，同时每升溶液中加入螯合剂EDTA-Na2 Ig,在420C ± I°C，反应3小时，冷却至10°C，硅藻土过滤，收集滤液； 4)调节滤液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸,用95%(v/v)的こ醇洗漆，干燥得到高纯度核糖核酸粉末。将检测计算，得到的核糖核酸粉末纯度为91. 3%，核糖核酸的总收率为63. 5%。实施例2 1)在固含量为10%的酵母浆中加入Na2CO3溶液，调节酵母浆的pH为10.5，15°C抽取破壁3小时，加入盐酸中和剰余的碱，得到破壁酵母液； 2)将破壁酵母液离心，去除菌体，得到核糖核酸粗溶液； 3)在核糖核酸粗溶液加入复合酶，使各酶的终浓度分别为d—葡聚糖酶4000U/し淀粉酶10000U/L木瓜蛋白酶100000U/L，同时每升溶液中加入螯合剂EDTA-Na2 lg，在370C ± I°C，反应2. 5小时，冷却至10°C，硅藻土过滤，收集滤液； 4)调节滤液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸,用95%(v/v)的こ醇洗漆，干燥得到高纯度核糖核酸粉末。将检测计算，得到的核糖核酸粉末纯度为91. 5%，核糖核酸的总收率为62. 3%。实施例3 1)在固含量为10%的酵母浆中加入Na2CO3溶液，调节酵母浆的pH为11，30°C抽取破壁2. 5小时，加入盐酸中和剰余的碱，得到破壁酵母液； 2)将破壁酵母液离心，去除菌体，得到核糖核酸粗溶液； 3)在核糖核酸粗溶液加入复合酶，使各酶的终浓度分别为P—葡聚糖酶7000U/し淀粉酶15000U/L、木瓜蛋白酶130000U/L，同时每升溶液中加入螯合剂EDTA-Na2 lg，在470C ± I°C，反应2小时，冷却至10°C，硅藻土过滤，收集滤液； 4)调节滤液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸,用95% (v/v)的こ醇洗漆，干燥得到高纯度核糖核酸粉末。将检测计算，得到的核糖核酸粉末纯度为91. 6%，核糖核酸的总收率为61. 2%。实施例4 1)在固含量为10%的酵母浆中加入Na2CO3溶液，调节酵母浆的pH为11.5，40°C抽取破壁2小时，加入盐酸中和剰余的碱，得到破壁酵母液； 2)将破壁酵母液离心，去除菌体，得到核糖核酸粗溶液； 3)在核糖核酸粗溶液加入复合酶，使各酶的终浓度分别为P —葡聚糖酶10000U/·し淀粉酶15000U/L、木瓜蛋白酶150000U/L，同时每升溶液中加入螯合剂EDTA-Na2 3g，在420C ±1°C，反应I. 5小时，冷却至10°C，硅藻土过滤，收集滤液； 4)调节滤液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸,用95%(v/v)的こ醇洗漆，干燥得到高纯度核糖核酸粉末。将检测计算，得到的核糖核酸粉末纯度为91. 9%，核糖核酸的总收率为60. 8%。实施例5 1)在固含量为10%的酵母浆中加入Na2CO3溶液，调节酵母浆的pH为11.2，45°C抽取破壁I. 5小时，加入盐酸中和剩余的碱，得到破壁酵母液； 2)将破壁酵母液离心，去除菌体，得到核糖核酸粗溶液； 3)在核糖核酸粗溶液加入复合酶，使各酶的终浓度分别为P —葡聚糖酶10000U/し淀粉酶20000U/L、木瓜蛋白酶200000U/L，同时每升溶液中加入螯合剂EDTA-Na2 5g，在500C ±1°C，反应I小时，冷却至10°C，硅藻土过滤，收集滤液； 4)调节滤液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸,用95%(v/v)的こ醇洗漆，干燥得到高纯度核糖核酸粉末。将检测计算，得到的核糖核酸粉末纯度为92. 3%，核糖核酸的总收率为60. 4%。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种核糖核酸的制备工艺，包括如下步骤：1)在酵母浆料中加入碱液，使酵母破壁，得到破壁酵母液；2)将破壁酵母液离心，得到核糖核酸粗溶液；3)在核糖核酸粗溶液中加入复合酶，进行酶解，将酶解液过滤，取滤液；4)调节滤液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸并洗涤，干燥，得到高纯度核糖核酸；其中，复合酶由1000～10000U的β？葡聚糖酶、5000～20000U的淀粉酶和50000～200000U的蛋白酶配合而成。
【技术特征摘要】
1.一种核糖核酸的制备エ艺，包括如下步骤 1)在酵母浆料中加入碱液，使酵母破壁，得到破壁酵母液； 2)将破壁酵母液离心，得到核糖核酸粗溶液； 3)在核糖核酸粗溶液中加入复合酶，进行酶解，将酶解液过滤，取滤液； 4)调节滤液的pH使核糖核酸析出，收集析出的核糖核酸并洗涤，干燥，得到高纯度核糖核酸； 其中，复合酶由1000 10000U的￠-葡聚糖酶、5000 20000U的淀粉酶和50000 .200000U的蛋白酶配合而成。2.根据权利要求I所述的エ艺，其特征在于加入碱液使酵母浆料的PH为10.5 .11. 5，使酵母破壁。3.根据权利要求I或2所述的エ艺，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：聂振泰，卢超凡，
申请(专利权)人：江门市天成生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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