本发明专利技术公开了Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro-NHCH2(CH2)nCH3(n＝6、8、10、12、14或16)及其合成方法和应用。本发明专利技术以亮氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、异亮氨酸、丝氨酸、赖氨酸为原料合成七肽小分子，然后用脂肪胺对这个七肽小分子进行修饰，从而得到了目标化合物。本发明专利技术在细胞模型和小鼠S180模型上评价本发明专利技术化合物的抑制肿瘤细胞增值、粘附活性及抗肿瘤活性。体外和体内试验结果表明，本发明专利技术化合物无论是在体外或是在体内均具有良好的抗肿瘤活性，并有良好的抗粘附活性，可将其制备成抗肿瘤药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及式如Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro-NHCH2(CH2)nCH3(式中 η 为 6、8、10、12、14或16)的6种寡肽，涉及它们的制备方法，进一步涉及它们在细胞模型和小鼠S180模型上的抗肿瘤作用及抗粘附作用及应用，本专利技术属于生物医药领域。
技术介绍
恶性肿瘤作为一种复杂的疾病，严重危害着人民生命健康，如何有效有力地治疗肿瘤得到了越来越多学者的关注和研究。目前，化学治疗仍然是临床治疗肿瘤的主要手段，寻找抗肿瘤药物是新药研究的热点之一。专利技术人了解，七肽LPNISKP能抑制肝癌细胞的运动与侵袭，显著降低肝内及肺转移率，并可降低肿瘤微血管密度，这些结果提示了七肽LPNISKP及其修饰物作为抗侵袭及抗肿瘤剂的临床应用前景。已知肿瘤细胞运动与侵袭的 首要步骤是粘附，这也提示了七肽LPNISKP及其修饰物具有抗肿瘤细胞粘附的潜能。按照一般的认识，含多肽的两亲性分子，例如脂肪胺链修饰的多肽，在适当的条件下通过分子间非共价键相互作用可发生自组装，形成纳米结构。借助纳米结构可改善多肽在体内的输送、延缓多肽在体内的降解速率和提高多肽的体内活性。根据这些认识，专利技术人提出了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个内容是提供脂肪胺链修饰的抗肿瘤寡肽，如下式Leu-Pro-Asn-I Ie-Ser-Lys-Pro-NHCH2 (CH2)nCH3其中，η为 6、8、10、12、14 或 16。本专利技术的第二个内容是提供所述寡肽的制备方法，是通过以下技术方案来实现的(I)将保护基保护的脯氨酸(Pro)与饱和脂肪胺缩合，所述饱和脂肪胺为CH3 (CH2)nCH2NH2, η = 6、8、10、12、14 或 16 ；(2)脱去保护基后，再按照现有液相合成技术，逐步接肽合成保护基保护的Ser-Lys-Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 ；(3)按照现有液相合成技术,逐步接肽合成保护基保护的Leu-Pro-Asn-Ile ;(4)将保护基保护的 Leu-Pro-Asn-Ile 与保护基保护的 Ser-Lys-Pro-NHCH2(CH2)IiCH3缩合后脱去保护基得到目标化合物。其中所述保护基包括N端保护基、C端保护基或侧链保护基，所述N端保护基是对多肽的N端进行保护时常用的保护基团，例如可以是叔丁氧羰基(Boc)、苄氧羰基(Z)；C端保护基是对多肽的C端进行保护时常用的保护基团，例如可以是甲氧基(OMe)、苄氧基(OBzl);所述侧链保护基是对多肽侧链进行保护时常用的保护基团，例如可以是苄基(Bzl)、苄氧基(OBzl)、硝基(NO2)、苄氧羰基(Z);所述液相合成技术及涉及的保护、缩合、脱保护的过程是本领域的常规并公知的技术。其中缩合反应是在二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三氮唑(HOBt)存在下于无水THF中进行；脱去N端保护基如Boc是在含氯化氢的乙酸乙酯中进行或如Z是在甲醇中发生氢解；脱去C端保护基如OBzl是在甲醇中进行皂化；脱去侧链保护基如Z、OBzl,NO2是在甲醇中发生氢解。具体的，合成路线如图2所示，按照如下步骤制备I)在二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三氮唑(HOBt)存在下Boc-Pro在无水THF中与饱和脂肪胺NH2CH2 (CH2)nCH3脱水形成Boc-Pro-NHCH2 (CH2)nCH3 ;其中η为6、8、10、12、14 或 16 ；2)在含氯化氢的乙酸乙酯中Boc-Pro-NHCH2(CH2)nCH3脱除Boc生成Pro-NHCH2(CH2)nCH3 ； 3)在 DCC 和 HOBt 存在下 Boc-Lys (Z)在无水 THF 中与 Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 缩合生成 Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 ；4)在含氯化氢的乙酸乙酯中Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) nCH3脱除Boc生成Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 ；5)在 DCC 和 HOBt 存在下 Boc-Ser 在无水 THF 中与 Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 缩合生成 Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NH-CH2 (CH2) nCH3 ；6)将Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2)nCH3经柱层析纯化后，在含氯化氢的乙酸乙酯中 Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2)nCH3 脱除 Boc 生成 Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2)nCH3 ；7)在DCC和HOBt存在下Boc-Asn在无水THF中与Ile-ΟΒζΙ缩合生成Boc-Asn-IIe-OBzI ；8)在含氯化氢的乙酸乙酯中Boc-Asn-Ile-OBzl脱除Boc生成Asn-Ile-OBzl ；9)在DCC和HOBt存在下Boc-Pro在无水THF中与Asn-I Ie-OBz I缩合生成Boc-Pro-Asn-Ile-OBzl ；10)在含氯化氢的乙酸乙酯中Boc-Pro-Asn-Ile-OBzl脱除Boc生成Pro-Asn-Ile-OBzl ；11)在DCC和HOBt存在下Ζ-Leu在无水THF中与Pro-Asn-Ile-OBzl缩合生成Z-Leu-Pro-Asn-Ile-OBzl ；12)将Z-Leu-Pro-Asn-Ile-OBzl经硅胶柱纯化后，在甲醇中将Z-Leu-Pro-Asn-Ile-OBzl 阜化为 Z-Leu-Pro-Asn-Ile ；13)在 DCC 和 HOBt 存在下 Z-Leu-Pro-Asn-Ile 在无水 THF 中与Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2)nCH3 缩合生成 Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (Ch2) ch3 ；14)在甲醇中 Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2)nCH3 氢解为 Leu-Pro-Asn-I Ie-Ser-Lys-Pro-NHCH2 (CH2) nCH3。本专利技术的第三个内容是通过评价所述寡肽的体外抑制肿瘤细胞增值、抑制肿瘤粘附活性及体内抗肿瘤活性，提供其在制备抗肿瘤和抗粘附药物中的应用。附图说明图I为本专利技术化合物8a_f在水中自组装纳米球的8天粒径图。图2为本专利技术提供的合成路线，其中i)DCC，HOBt，NMM ；ii)氯化氢/乙酸乙酯溶液(4N) ;iii)NaOH 水溶液，甲醇；iv)Pd/C, H20图3为本专利技术化合物8c在水溶液中形成的纳米球的代表性透射电镜照片。具体实施例方式为了进一步阐述本专利技术，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本专利技术进行具体描述，不应当理解为对本 专利技术的限制。实施例I 制备 Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 6CH3 (Ia)将Boc-Pro 3. Og (13. 95mmol)溶于 20ml 无水 THF 中，冰浴下加入2. 07g(15. 22mmol)H0Bt，并使完全溶解。然后加入3. 14g(15. 22mmol)DCC，反应混合物冰浴搅拌10分钟本文档来自技高网...
【技术保护点】
脂肪胺链修饰的抗肿瘤寡肽，如下式：Leu？Pro？Asn？Ile？Ser？Lys？Pro？NHCH2(CH2)nCH3其中，n为6、8、10、12、14或16。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赵明，彭师奇，刘春娜，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：
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