本发明专利技术涉及一种植物天然化合物在植物病害防治中的应用方法，具体是木蜡树叶片中的3，4，5-三羟基苯甲酸甲酯在植物细菌性病害和卵菌病害防治中的应用方法。3，4，5-三羟基苯甲酸甲酯可以人工合成，也可以从多种植物中分离纯化。本发明专利技术中，用乙醚提取木蜡树叶片干粉中的抑菌物质，采用硅胶柱层析法分离纯化3，4，5-三羟基苯甲酸甲酯，生产成本低，生产工艺简单。3，4，5-三羟基苯甲酸甲酯的抑菌谱广泛，可以采用施用木蜡树植物残渣或3，4，5-三羟基苯甲酸甲酯药剂的方式防治植物病害。本发明专利技术为新农药的创制和仿生农药的研制开发提供了新的资源，并使木蜡树这一植物资源得到了充分开发利用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种植物天然化合物在植物病害防治中的应用方法，具体是3，4，5-三羟基苯甲酸甲酯在植物细菌性病害和卵菌病害防治中的应用方法。属于植物病害的生物防治领域。
技术介绍
有机合成化学农药的问世，对控制农作物有害生物，保证农业增产增收发挥着重要的作用。但是，在大面积使用化学农药产生巨大社会效益和经济效益的同时，也带来了残留(Residue)、抗性(Resistance)和病虫害再娼撅(Resurgence)等3“R”问题。为了提高人类的生存环境和食品质量，世界各国都在进行减少化学农药使用量的研究，农药的发展方向从高毒、高残留、长持久性的合成化学农药转向安全、低残留、无公害、高生物活性、高选择性的生物农药。植物源农药顺应了这一发展趋势，成为新农药研究与开发的热点。 据统计，全世界有近50万种植物，目前在化学性质方面进行研究的约仅占10%。已报道具有抑菌活性的植物有208科915属1600多种，其产生的次生代谢物质超过40万种，有效成分主要有生物碱、留体类、萜类、黄酮类、醌类、苯丙素类、单宁、甙类等。这些成分对研究现代农药具有巨大的启发价值和影响作用。由于植物资源丰富，其代谢产物种类繁多，被认为是化学合成杀菌剂替代品最好的开发资源。目前，国内外对于植物源杀菌剂的开发应用主要有两个途径(1)直接利用抑菌植物，即提取抑菌植物活性部位的有效成分，然后按照农药的标准，直接将提取物加工成可利用的制剂来控制病害。这种利用方式的主要优点是能够发挥提取物中各种成分的协同作用，投资少，见效快。(2)间接利用抑菌植物，即研究植物中抑菌活性物质的结构、作用机制及结构与活性间的关系，优化先导化合物结构，修饰模拟合成新型高效的生物合理性农药。由于植物内有效成分含量一般很低，直接加工利用需要大量的植物材料，不仅原材料的供应困难，在工厂化加工中也存在原料运输、储存、废渣处理和生产操作上的体积庞大臃肿等问题。从国际上的发展趋势看，有抑菌活性的植物天然产物作为合成的先导化合物要比直接作为商品更有前途。近些年，我国植物源农药的商品化进程发展较快，目前全国生产植物源农药的厂家有100多家。从2003年到2010年，中国农业信息网中登记注册的植物源农药种类超过40种，品种超过140种，其中有植物源杀菌剂品种近40种。但是，登记防治对象为植物卵菌病害的只有乙蒜素、苦参碱和小檗碱等3种，登记防治对象为植物细菌性病害的只有乙蒜素I种。针对这类病害，尚需要大力加强抑菌植物及其抑菌活性成分研究开发的力度。木腊树是漆树科(Anacardiaceae)漆树属(Toxicodendron)植物,生于海拔 140-800 (-2300)米的林中，中国长江以南各省区、朝鲜和日本有分布。木蜡树属于我国民间传统药用植物，其根、叶、树皮、果实等有活血止痛、祛瘀消肿、治疗疥疮等功效，也有将其根捣碎水煎后加水或煤油用于防治水稻害虫的记载，然而国内外对木蜡树化学成分抑制病原菌的研究至今仍是空白，尚未见有关于3，4，5-三羟基苯甲酸甲酯防治植物细菌性病害和卵菌病害的报道。本专利技术是在对木蜡树叶片抑菌活性成分分离纯化的基础上，利用其抑菌化合物开发植物源杀菌剂，国内外尚属首例。
技术实现思路
专利技术目的针对目前植物细菌性病害和卵菌病害防治中，有效的生物农药种类缺乏、防治效果不够稳定的现状，提供了利用木蜡树叶片中的抑菌物质-3，4，5-三羟基苯甲酸甲酯对植物病害进行防治的方法，同时充分开发利用木蜡树这一植物资源。技术方案本专利技术中，木蜡树叶片的抑菌物质一 3，4，5-三羟基苯甲酸甲酯通过以下方法获得(1)将木蜡树叶片阴干后烘干粉碎，用甲醇回流提取；(2)甲醇提取物用乙醚萃取，浓缩得到乙醚提取物，植物残渣晒干备用；(3)采用常规硅胶柱层析法，以不同有机溶剂配比的洗脱体系对植物提取物的成分进行反复分离，最后经重结晶法纯化获得抑菌化合物。本专利技术中，植物源杀菌剂防治番茄青枯病可以通过2种途径实现第一种途径将植物残渣完全挥发完溶剂，与土壤以I : 3的比例混匀后配制成植物残渣土播种番茄。第二种途径用甲醇、乳化剂和水将3，4，5-三羟基苯甲酸甲酯配制成5%的水乳剂，在作物移栽后，将水乳剂与水以I : 100或I : 50的体积比混合后灌根。有益效果本专利技术所提供的木蜡树叶片开发的植物源杀菌剂与现有技术相比，具有以下优点和有益效果(I)以常见植物木蜡树为原料，原料来源广，生产成本低，生产工艺简单，适合规模生产。(2)3，4，5_三羟基苯甲酸甲酯对多种植物病原细菌和植物病原卵菌抑菌效果强，本专利技术为新农药的创制和仿生农药的研制开发提供了新的资源。(3)提取抑菌活性物质后的木蜡树残渣有减轻病害和肥效的作用，这使木蜡树这一植物资源得到了充分开发利用。具体实施例方式实施例I :木蜡树叶片抑菌物质的提取将收集的木蜡树叶片阴干后于50°C下烘24 48h，用40目筛的粉碎机粉碎，以甲醇回流提取3次，每次回流3h。合并提取液用旋转蒸发仪在50°C水浴中减压浓缩，获得木蜡树叶片的甲醇提取物，另将过滤后的植物残渣晒干备用。将甲醇提取物用乙醚萃取后浓缩萃取液，得到乙醚提取物。实施例2 :木蜡树叶片乙醚提取物中3，4，5_三羟基苯甲酸甲酯的分离纯化木蜡树叶片乙醚提取物以试剂型硅胶(100-200目)拌样，采用硅胶(100-200目)柱层析，以石油醚(60-90°C)/丙酮(5 : I和I : I)为洗脱剂梯度洗脱，将石油醚/丙酮(I D的组分合并，以硅胶(100-200目)拌样，采用硅胶(100-200目)柱层析，以氯仿/甲醇(10 I)为洗脱剂洗脱，将所得组分再以硅胶(100-200目)拌样，采用硅胶(200-300目)柱层析，以氯仿/甲醇(20 : I)为洗脱剂洗脱，最后将所得组分以硅胶(200-300目)拌样，采用硅胶(200-300目)柱层析，以石油醚(60-90°C )/乙酸乙酯(10 : I和2 : I)为洗脱剂梯度洗脱，将石油醚/乙酸乙酯(2 : I)的组分以乙醚为溶剂进行重结晶，获得白色结晶-3，4，5-三羟基苯甲酸甲酯。实施例3 :3，4，5_三羟基苯甲酸甲酯对茄青枯拉尔氏菌的毒力供试细菌菌种爺青枯拉尔氏菌(Ralstonia solanacearum)由广西大学植物病理学研究室提供，属于小种I生化型III，于灭菌水中20°C下保存。供试菌先在NA固体培养基(Nutrient agar,配方:酵母粉3g、蛋白胨5g、葡萄糖10g、琼脂17g、水IOOOmL, pH 7. 0 7.2)上划线活化培养24 48h，然后转入NA培养液中进行悬浮培养(28°C，120rpm) 24h。以平板稀释法测定3，4，5_三羟基苯甲酸甲酯对茄青枯拉尔氏菌的毒力。用10%二甲基亚砜溶解3，4，5-三羟基苯甲酸甲酯，将不同浓度的药液加入NA培养基中，制备系列浓度的含药液平板。将细菌悬浮液稀释成103CFU/mL，取IOOy L涂于平板上，以含相同浓度的二甲基亚砜平板作对照，置于28°C的培养箱中培养。以培养48h完全没有菌落生长的浓度作为该化合物的最低抑菌浓度(MIC)，以培养96h仍然没有菌落生长的浓度作为该化合物的最低杀菌浓度(MBC)，按照下式计算抑菌率。以农用硫酸链霉素为对照药剂。 抑菌率(<% ) 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种植物源杀菌剂，其特征是：该杀菌剂为3，4，5？三羟基苯甲酸甲酯，分子式为C8H8O5，结构式如下：FSA00000496712900011.tif
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黎起秦，袁高庆，林纬，秦健，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：
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