本发明专利技术公开了一种防治植物终极腐霉病害的木霉菌株及制剂。该木霉菌株为厚垣孢木霉（Trichoderma chlamydospora） CCTCC-TW20622，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号是CGMCC NO.11337，保藏日期是2015年9月8日。该木霉菌株产生的纤维素酶和葡聚糖酶可消解终极腐霉的细胞壁，引起菌丝破裂；对终极腐霉有强烈的抑制作用，平板抑制率达100%。本发明专利技术制剂对由终极腐霉引起的植物病害防治效果达到90%以上。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种防治植物病害的木霉及其应用，特别是涉及一种防治植物终极腐 霉病害的木霉菌株及制剂。
技术介绍
终极腐霉（/yMii/a? 属于真菌界真菌门鞭毛菌亚门藻状菌纲霜霉目腐霉 科，为低等真菌，目前报道分布甚广，它不仅栖息在土壤中，还广泛侵染大豆、菜豆、豌豆、甘 薯、松苗、咖啡、苹果、柑橘、桃、棉花、菊花、大丽花、南瓜、西瓜、甘蔗、苜蓿、番茄等150余种 经济植物，引起苗枯，猝倒、根腐、脚腐、枯萎等多种病害。目前常用的预防及防治该病害的方法有：农田管理改善、应用抗性品种、化学药剂 防治，但效果不甚明显，且化学农药施用不当造成了一系列的环境及健康问题。随着生活水 平的提高，人们对绿色食品、有机食品需求越来越大，对支撑其生产的绿色、无污染、高效生 物农药的需求也日益扩大。国内外也开展了相关的研究，如李琳（2013)等分离到的棘孢木 霉T31对腐霉的平板抑制率为74. 39 %，但没有开发出相关产品，仅有10多项相关的专利技术专 利涉及植物提取抑菌有效成分或微生物菌株可防治腐霉猝倒病的报道。BinLi(2007)筛 选到14株类芽孢杆菌，防治黄瓜腐霉猝倒病防效达到73 % ;Novozymes公司利用专利菌株 利迪链霉菌WYEC108研制了防治腐霉、疫霉、镰刀菌、丝核菌等病原菌的生物杀菌剂；国外 还有报道利用木霉菌、荧光假单胞菌防治玉米腐霉猝倒病的成功案例。 然而，国内登记防治作物猝倒病的药剂99个，其中仅有2个产品不是化学农药，且 为捷克进口产品，国内没有相关产品报道，因此研制多机制防治腐霉病害的微生物农药成 为市场急需。木霉spp.)具有多种生防机制：寄生、竞争、水解酶活性、抗生 性代谢产物等，是重要的植物病害生物防治菌，目前已有10多个木霉产品获得农药登记并 得到广泛应用，故利用木霉研发生物农药防治由终极腐霉类低等真菌引起的植物病害成为 可能。
技术实现思路
本专利技术的目的就是针对上述存在的缺陷而提供一种防治植物终极腐霉病害的木 霉菌株及制剂。该木霉产生的纤维素酶和葡聚糖酶可消解终极腐霉的细胞壁，引起菌丝破 裂；对终极腐霉有强烈的抑制作用，平板抑制率达100 %。本专利技术制剂对由终极腐霉引起的 植物病害防治效果达到90 %以上。 本专利技术一种防治植物终极腐霉病害的木霉菌株及制剂的技术方案为，该木霉 CCTCC-TW20622在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中心保藏，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，其保藏编号是： CGMCCN0. 11337,菌种的拉丁文名称是 参据的微生物(株）： CCTCC-TW20622,保藏日期是2015年9月8日。 该木霉CCTCC-TW20622在PDA平板上对终极腐霉抑制率高达100 %，其产生的纤维 素酶和葡聚糖酶可消解终极腐霉的细胞壁，引起菌丝破裂；CCTCC-TW20622在PDA平板上产 生分生孢子能力较弱，而产生厚垣孢子的能力较强，4d后可产生大量的厚垣孢子；液体发 酵厚垣孢子产量为5亿/mL。该木霉ITS扩增引物：ITS1-F:5'-CTTGGTCATTTAGAGGAAGT AA-3'，ITS4 :5' -TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'，菌株CCTCC-TW20622 的ITS序列全长为 613bp，如下所示：该木霉ie/7扩增引物：EF1-728F:5'-CATCGAGAAGTTCGAGA AGG-3'，EF200R:5' -GCCATCCTTGGAGATACCAGC-3'，菌株CCTCC-TW20622 的ie/7序列全 长为649bp，如下所不：该木霉印似扩增引物：fRPB2-5F:5' -GA(T/C)GA(T/C) (A/C)G (A/T)GATCA(T/C)TT(T/C)GG-3 '，fRPB2-7cR: 5 '-CCCAT(A/G)GCT TG(T/C)TT(A/G)CCCAT-3'，菌株CCTCC-TW20622 的印似序列全长为 1 146bp，如下所 示： 所述木霉制备的制剂，由该木霉经过斜面培养、三角瓶培养、液体培养后得到的发 酵液，以及凹凸棒土、羧甲基纤维素钠、茯苓粉、黄原胶、SDS组成。 所述的发酵液制备过程为： (1) 斜面培养：采用固体PDA培养基，将菌株接种在试管培养基上，25 °C培养2d~3 d; (2) 三角瓶培养：采用液体PDB培养基，将试管菌种接种在液体三角瓶中，置于摇床上 25 °C振荡培养1d~2d; (3) 液体培养：采用发酵培养基，115 °C灭菌30min，将三角瓶种接种发酵罐，接种量 0. 2 %，25 °C培养，溶氧量40 %~50 %，通气量1 :0. 6~0. 8,搅拌速度为160r/min，培养 24h后，添加0.4 %草酸，调整发酵参数：25 °C培养，溶氧量20 %~30 %，通气量1 :0.4~ 〇. 6,搅拌速度为140r/min，继续培养24h~30h，至厚垣孢子量达到5亿/mL以上时，结 束发酵得到发酵液。 步骤（3)中，发酵培养基为，玉米粉2 %，葡萄糖0.5 %，豆饼粉4 %，磷酸氢二钾0.2 %，磷酸二氢钾0. 2 %，碳酸钙0. 5 %，余量为水，pH5. 5~6. 0。 所述的制剂，由以下成分组成： 发酵液 20 mL 凹凸棒土（300目） 78g 羧甲基纤维素钠 〇.8g 茯苓粉 〇.8g 黄原胶 〇.2g SDS 0. 2g〇 本专利技术的有益效果为：该木霉产生的纤维素酶和葡聚糖酶可消解终极腐霉的细胞 壁，引起菌丝破裂；该木霉CCTCC-TW20622在PDA平板上产生分生孢子能力较弱，而产生厚 垣孢子的能力较强，4d后可产生大量的厚垣孢子；液体发酵厚垣孢子产量为5亿/mL，该木 霉菌株CCTCC-TW20622对终极腐霉有强烈的抑制作用，25 °C对峙培养4d，已完全覆盖终 极腐霉，且终极腐霉的气生菌丝成塌陷现象，抑制率达100 %。温室试验和小区试验表明，本 专利技术制剂对由终极腐霉引起的植物病害防治效果达到90 %以上。 本专利技术制剂对茄子猝倒病的防治效果达到了 94. 9 %，对番茄猝倒病防治效果达到 了 90 %以上。【附图说明】 图1所示为基于17也序列的CCTCC-TW20622系统发育进化树； 图2所示为CCTCC-TW20622分别在SNA培养基、PDA培养基、CMD培养基上25 °C下培 养7d的平板形态； 图3所示为CCTCC-TW20622的显微形态；其中，a，分生孢子；b~e，分生孢子梗；f，厚垣 孢子，标尺：a~e，5ym;f，10μπι; 图4所示为CCTCC-TW20622在PDA平板上对终极腐霉的抑制结果； 图5所示为CCTCC-TW20622与终极腐霉对峙培养时的显微形态； 图6所示为CCTCC-TW20622分别在β-1，3-葡聚糖酶培养基和纤维素培养基平板培 养基上的水解圈。【具体实施方式】 为了更好地理解本专利技术，下面用具体实例来详细说明本专利技术的技术方案。 实施例1:木霉菌株的分离 从全国各地采集土样及水样，利用选择性培养基PDAm分离木霉。称取10g土样，倒入 100mL生理盐水三角瓶中，25 °C，160r/min摇床振荡1h，进行梯度稀释，每稀释度取1mL 放入本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种防治植物终极腐霉病害的木霉菌株，其特征在于，该木霉菌株为厚垣孢木霉CCTCC‑TW20622，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号是CGMCC NO.11337，保藏日期是2015年9月8日。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈凯，李纪顺，赵晓燕，李舒依，杨合同，吴晓青，王贻莲，魏艳丽，扈进冬，
申请(专利权)人：山东省科学院中日友好生物技术研究中心，
类型：发明
国别省市：山东;37
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