本发明专利技术公开了一种黄精的组织培养方法，对当年生地下茎上的幼芽进行丛生芽诱导、生根培养、炼苗后进行移栽；对当年生带有隐藏芽点的块茎部分进行愈伤组织培养、增殖培养、生根培养、炼苗后进行移栽，通过该方法可以对黄精进行快速繁殖，并实现大面积工业化种植，以解决野生地藏黄精产量低、供应少和自然栽培周期长的问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物组织培养方法，具体地说是黄精的组织培养方法。
技术介绍
黄精(Polygonaturm sibiricum Redoute)别名鸡头黄精、鸡头参，属于百合科(Liliaceae)黄精属(Polygonatum)多年生草本植物。中药以黄精根莖入药,具有补脾润肺、益气养阴、强壮筋骨等功效，能治疗体虚乏力、心悸气短、肺燥干咳、病后体虚、风湿痛疼、糖尿病等疾病，其活性成分主要为黄精多糖及皂甙等。地藏黄精是安徽九华山地区特有的野生黄精品种，有着极高的药用和经济价值， 随着黄精药用价值和保健价值越来越被人们认识，黄精原料的需求量也越来越大，致使野生黄精的无计划采集加剧，导致其资源枯竭加速，影响可持续开发利用。因此，为了保证黄精原料来源、实行产业化种植将成为必然趋势。近年来虽然有些地方开始人工种植黄精，但由于生产上多采用分根繁殖，其繁殖系数低，质量不稳定，故黄精种苗问题成了人工大面积种植的瓶颈。植物的离体快速繁殖，是目前植物组织培养中应用最广泛、最有效的技术，尤其对于新引进品种、脱毒苗、优良单株、濒危植物和基因工程植株等可实现离体快速增殖，且不受地区、气候影响，繁殖速度比常规生产快数百万倍，能迅速提供大量优质种苗。目前，人们对黄精的研究主要集中在其成分测定、药理作用以及人工栽培等方面，而关于组织培养方面的研究内容较少。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，通过该方法可以对黄精进行快速繁殖，并实现大面积工业化种植，以解决野生地藏黄精产量低、供应少和自然栽培周期长的问题。本专利技术解决技术问题采用如下方案( I)外植体的选择与灭菌选择当年生地下茎上的幼芽或当年生带有隐藏芽点的的块茎部分，所述块茎将其切成小块，且每块都带有至少一个隐藏的芽点；将所述幼芽或块茎用自来水快速冲去泥沙，并用洗涤剂液浸泡30min以除去表面污垢，然后自来水冲洗3h，再置于超净工作台用体积浓度75%酒精灭菌15s，无菌水冲洗3遍，再将其放入体积浓度0. 2%Hgcl2溶液中浸泡12-14min，所述Hgcl2溶液中包含有体积浓度0. 15%-02%的吐温20，之后无菌水冲洗5遍，转入培养皿中吸干水分，等待接入培养基；(2)幼芽丛生芽的诱导、块茎丛生芽愈伤组织培养和增殖培养A、将经过步骤(I)处理的幼芽转入丛生芽诱导培养基中，所述丛生芽诱导培养基的配方为MS+6-BA 4. Omg/L+NAAO. 2mg/L+ 琼脂 7g/L+ 蔗糖 30g/L，pH=5. 8 ;培养条件为温度23±1°C、光照1500-2000Lx ;光照时间为10-12小时/天，培养时间为20-30天；然后直接转入生根培养；B、①将经过步骤(I)处理的带有隐藏芽点的的块茎接种MS+6-BA 4. Omg/L+NAA0. 2mg/L+ 琼脂 7g/L+ 蔗糖 30g/L，pH=5. 8 培养基上，23± 1°C、光照 1500-2000Lx ;光照时间为10-12小时/天，培养时间为20-30天；中间剔除污染的块茎外植体；②在块茎组织分化形成愈伤组织后，转入培养基为MS+6-BA 3. Omg/L+NAA 0. 2mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH 5. 8 ;培养条件为温度23±1°C、光照1500-2000Lx ;光照时间为10-12小时/天，培养时间为10-20天；愈伤组织进行增殖，将增殖后的愈伤组织切成I. 0cm*I. 0cm*I. Ocm大小然后转入原先的诱导培养基MS+6-BA 4. Omg/L+NAA 0. 2mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH=5. 8培养基上，23±1°C、光照1500-2000LX ;光照时间为10-12小时/天，培养时间为15-25天;(3)生根的培养将经过步骤(2)处理的外植体转入生根培养基中培养，所述生根培养基的配方为 l/2-l/3MS、NAA 0. 2-0. 5mg/L、琼脂 6_8g/L、蔗糖 20_30g/L ;培养条件为温度 23±1°C、光照1500-2000LX ;光照时间为10-12小时/天，培养时间为35-50天；(4)炼苗和移栽将经过炼苗的黄精根茎从接种瓶中取出，用清水洗掉培养基，在质量浓度0. 1%高锰酸钾溶液中消毒lmin，用清水冲洗干净后，假植在腐殖质土 沙子=1:1 (v :v)的基质上，保持空气湿度95%以上，用遮阳网遮荫；根据成苗的时间安排栽植，在春季以后成苗则选择秋栽即9-10月下旬，在春季之前成苗则选择春栽即3月下旬，将假植的黄精根茎栽种到整好的露地畦内，将根茎段芽眼向上，每隔10 15cm平放I个根茎，行距20 25cm，覆土 4 6cm，浇足水；在土壤封冻前，畦面上盖一层有机肥或薄膜，以利保暖越冬。本专利技术方法中，采用不同营养体作为材料，既保证了遗传的稳定性，又增加了原材料利用的可能性。利用芽直接分化成叶片，然后进行成苗阶段，缩短了原先用芽经过诱导愈伤组织再分化成苗阶段的时间，同时利用块茎分化并增殖，大大提高繁殖的效率和数量，而对于不同部位消毒方法的不同，不仅降低了污染率也保证了较高的成活率，从而满足大规模推广和工厂化生产的要求。本专利技术方法具有如下优点或效果I.本方法采用的黄精材料是安徽特有的野生品种，有极高的药用价值，而本方法可以适合工厂化使用，解决野生产量较少的问题，同时通过不同部位不同的培养方式多方面的对材料进行扩大和快速培养，提高材料的利用率的同时缩短培育时间，而且保证了较高的成活率。2.本方法改进了常用的繁殖方法如选择和常用方法不一样的取材部位，针对不同的取材部位采取不同的灭菌方式。针对不同部位的质地不同采用不同浓度的表面活性剂吐温20，使得消毒溶液Hgcl2能有效的渗透表层，改善之前的消毒效果不佳的状况，提高消毒的效率，从而大大提高无菌率和成活率。在此过程中因为茎段芽选取的是去除外层较厚苞片的最内层幼芽(一般成乳白色)，所以需要表面活性剂的加入，提高灭菌效果，但是由于芽的组织选取的比较幼嫩，所以活性剂的量减少，达到即加强渗透效果又不损伤幼芽，而对于块茎组织，为坚硬的肉质结构，为了达到好的灭菌效果，所以增加吐温20的浓度，两种不同的取材选择不同的灭菌方式是为了在不伤害组织本身都能到达理想的灭菌效果。3.本方法采用的诱导培养基对于茎段芽组织进行直接诱导分化形成叶片，而不需要通过先诱导愈伤组织再进行分化的长时间过程，大大缩短了成苗时间，对于野生黄精的资源利用，快速繁殖有极大的作用。4.本方法在对于块茎培养的过程中采用了与前人不同的循环路径，即先将块茎在诱导培养基中进行培养，快速诱导出愈伤组织后立即转入增殖培养基进行增殖，将增殖后的材料再切分成I. 0cm*l. 0cm*l. Ocm的大小接入原先的诱导培养基进行接下来的诱导分化培养，在两次诱导培养中间加入增殖的部分，这样做可以大大提高最终诱导产生的实验苗的数量，从而获得较大量的成苗，也可以一定程度上缩短常规成苗的时间。5.本方法在前期诱导的过程中采用一种培养基对不同材料产生两种不同的诱导结果，可以节约配置不同实验材料所需的时间，能提高材料的利用率。6.本方法中的组培苗营养充足、温光合理，长势旺盛。具体实施方式 以下通过具体实施例对本专利技术技术方案做进一步说明。以下实施例MS培养基配方每升培养基中含KN03本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种黄精的组织培养方法，其特征在于该方法按如下步骤进行：（1）外植体的选择与灭菌选择当年生地下茎上的幼芽或当年生带有隐藏芽点的的块茎部分，所述块茎将其切成小块，且每块都带有至少一个隐藏的芽点；将所述幼芽或块茎用自来水快速冲去泥沙，并用洗涤剂液浸泡30min以除去表面污垢，然后自来水冲洗3h，再置于超净工作台用体积浓度75%酒精灭菌15s，无菌水冲洗3遍，再将其放入体积浓度0.2%Hgcl2溶液中浸泡12？14min，所述Hgcl2溶液中含有体积浓度0.15%？02%的吐温20，之后无菌水冲洗5遍，转入培养皿中吸干水分，等待接入培养基；（2）幼芽丛生芽的诱导、块茎丛生芽愈伤组织培养和增殖培养A、将经过步骤（1）处理的幼芽转入丛生芽诱导培养基中，所述丛生芽诱导培养基的配方为：MS+6？BA？4.0mg/L+NAA0.2mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH=5.8；培养条件为温度：23±1℃、光照1500？2000Lx；光照时间为10？12小时/天，培养时间为20？30天；然后直接转入生根培养；B、①将经过步骤（1）处理的带有隐藏芽点的的块茎接种MS+6？BA？4.0mg/L+NAA？0.2mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH=5.8培养基上，23±1℃、光照1500？2000Lx；光照时间为10？12小时/天，培养时间为20？30天；中间剔除污染的块茎外植体；②在块茎组织分化形成愈伤组织后，将诱导出的的愈伤组织转入培养基为：MS+6？BA？3.0mg/L+NAA？0.2mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH？5.8；培养条件为温度23±1℃、光照1500？2000Lx；光照时间为10？12小时/天，培养时间为10？20天；愈伤组织进行增殖，然后将增殖后的愈伤组织切成1.0cm*1.0cm*1.0cm大小，再转入原先的诱导培养基MS+6？BA？4.0mg/L+NAA？0.2mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH=5.8培养基上，23±1℃、光照1500？2000Lx；光照时间为10？12小时/天，培养时间为15？25天；（3）生根的培养将经过步骤（2）处理的外植体转入生根培养基中培养，所述生根培养基的配方为：1/2？1/3MS、NAA？0.2？0.5mg/L、琼脂6？8g/L、蔗糖20？30g/L；培养条件为温度23±1℃、光照1500？2000Lx；光照时间为10？12小时/天，培养时间为35？50天；（4）炼苗和移栽将经过炼苗的黄精根茎从接种瓶中取出，用清水洗掉培养基，在质量浓度0.1%高锰酸钾溶液中消毒1min，用清水冲洗干净后，假植在腐殖质土：沙子=1:1（v：v）的基质上，保持 空气湿度95%以上，用遮阳网遮荫；根据成苗的时间安排栽植，在春季以后成苗则选择秋栽即9？10月下旬，在春季之前成苗则选择春栽即3月下旬，将假植的黄精根茎栽种到整好的露地畦内，将根茎段芽眼向上，每隔10～15cm平放1个根茎，行距20～25cm，覆土4～6cm，浇足水；在土壤封冻前，畦面上盖一层有机肥或薄膜，以利保暖越冬。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：项艳，任洁，赵华琳，沈周高，汤锋，王进，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：
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