描述了用于创伤护理和/或其它组织愈合应用的支架材料及其制备方法。支架材料由来自鱼皮的脱细胞细胞外基质构成。支架材料还可包括来自鱼皮脂质层的脂质。还描述了制备和使用支架材料的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于创伤护理和/或其它组织愈合应用的支架材料领域 本专利技术涉及用于创伤护理和/或其它组织愈合应用的支架材料及其制备方法。支架材料包含来自鱼皮的脱细胞细胞外基质。背景目前将多种人、动物和合成材料描述或用于医学程序以增强、修复或纠正组织缺陷。例如美国公布专利申请号2003/0059460公开一种杂化聚合物材料，其包含可用于活体组织再生的合成和天然聚合物。杂化物包含交联的天然存在的聚合物和生物降解-可吸收的合成聚合物。但是，必须采取一系列复杂的加工步骤以制备该杂化材料。此外，所得杂化材料含有合成以及天然存在的材料。 美国专利号6，541，023描述来自鱼皮的多孔胶原凝胶用作组织工程支架的用途。制备胶原凝胶包括研磨鱼皮。另外，中国专利号1068703描述制备用于敷裹烧伤创伤的鱼皮的方法，包括从鱼体分离鱼皮，将该皮肤置于足以建立2. 5-3的pH值的量的碘酊、乙醇、樟醇、磺胺嘧啶锌和盐酸的防腐液中。但是，这些产物可能难以处理，因为美国专利号6，541，023的产物为凝胶形式，中国专利号1068703的产物贮存于溶液中。此外，源自人皮肤(ALL0DERM 再生组织基质(LifeCell));胎牛真皮(PRIMATRIX 皮肤修复支架(TEI Biosciences));猪膀胱(MATRISTEM 细胞外基质创伤片(Medline Industries, Inc.));和猪小肠黏膜下层(OASIS 创伤基质(HealthpointLtd.))已产生多种用于医疗用途的细胞外基质产物。但是，需要改良的产品和方法以增强创伤愈合和组织修复。本专利技术满足这种需要。概述 脊椎动物的细胞外基质(ECM)是包围和支持细胞的复杂结构实体。ECM由结构蛋白的复杂混合物组成，其中最丰富的是胶原，及其它特化的蛋白和蛋白聚糖。本文描述的支架材料是来自鱼皮的天然生物ECM组分的非常完整的无细胞支架。该支架还可包含来自鱼皮的天然存在的脂质。皮肤ECM的天然三维结构、组成和功能基本不变，并提供支架以支持细胞移行、粘附、增殖和分化，由此促进组织的修复和/或更换。本专利技术还涉及该支架材料的制备方法和使用方法。附图简述图I显示根据本文所述方法用鱼皮制备的脱细胞ECM产物(支架材料)的示例性样品; 图2显示以IOOx (2A)和400x (2B)放大的支架材料横截面的光学图像；图3显示以300x (3A)和600x (3B)放大的支架材料横截面的扫描电镜(SEM)图像。描述 本专利技术的支架材料由完整鱼皮获得。图I显示示例性样品，其显示支架材料样品的外观。任何物种的鱼，包括硬骨鱼或软骨鱼，都可用作鱼皮来源。例如来源可以是圆型鱼如鳕鱼、黑线鳕和It鱼；比目鱼，如大比目鱼、鲽鱼和鳎鱼；鲑鱼如大马哈鱼和鳟鱼；鲭科如鲔鱼；或者小型鱼如青鱼、凤尾鱼、鲭鱼和沙丁鱼。在某些实施方案中鱼皮由冷水多脂鱼和/或已知含有大量ω-3油的鱼获得。ω-3油高的鱼的实例是大马哈鱼、青鳞鱼、鲔鱼、青鱼、鳕鱼、沙丁鱼、鲭鱼、裸盖鱼(sable fish)、胡瓜鱼、白鲑、南极鳕鱼(hoki fish)和一些鳟鱼品种。在加工之前从鱼去除鱼皮。如果鱼皮来自有鳞品种的鱼,应当将鱼皮去鳞以便除去实质部分的鳞或者至少从鳞除去羟磷灰石。短语“除去实质部分的鳞”或者“基本无鳞”指除去鱼皮上至少95%，优选至少99%，更优选100%的鳞。“基本无鳞的”鱼皮还可指来自无鳞品种鱼的鱼皮。要么在所有加工之前，用单纯的机械压力(通过例如刀、与研磨剂一起振荡、水压、使用与刀相同的机械力的专用去鳞设备或其它压力设备，如用陶瓷或塑料抛光)除去鳞，要么在某种化学处理(如脱细胞)之后除去鳞，然后用机械压力洗掉鳞。如果将鱼皮首先化学和/或酶处理(如用TRITON X-100处理)，机械压力一般需要柔和，因为在脱细胞之后皮肤更容易撕裂受损。可以多于一个的步骤去鳞，例如在脱细胞前部分除去，接着在脱细胞期间和/或之后进一步除去。或者可以只通过化学处理去鳞。在鳞已除去后，将鱼皮在脱细胞前任选冷冻。可通过将皮肤培养在液氮中或者用 其它可将皮肤冷冻至-70°C或更低的专用冷冻装备将鱼皮快速冷冻，以保存支架的胶原结构。或者，可将鱼皮冷冻在通常见于鱼厂的常规类型冷冻库中。冷冻过程可溶解或部分溶解构成完整鱼皮的细胞，帮助促进鱼皮脱细胞。如果鱼皮已冷冻，可将其稍后解冻用于进一步加工。无论鱼皮是否冷冻，在进一步加工之前都可将其用缓冲液洗涤。例如可将鱼皮用缓冲液洗涤1-3次，缓冲液任选含有一种或多种抗氧化剂(如抗坏血酸(比如50 mM抗坏血酸)，维生素A、C、E，和β-胡萝卜素)，抗生素(如链霉素和青霉素)，蛋白酶(如分散酶II)和蛋白酶抑制剂(如抗痛素、抑肽酶、苯甲脒、苯丁抑制素、DFP、EDTA、EGTA、亮抑蛋白酶肽、胃酶抑素、膦酰二肽和PMSF)以促进鱼皮的消毒和稳定化。缓冲液可为至少5. 5的pH，比如6.0，6.5，7.0，7.5，8.0，8.5，9.0，9.5，10. O或更大。在某些实施方案中pH为7. 0-9.0，如7. 5-8. 5。缓冲液还可用作其中可将鱼皮贮存几天至几周或更久的介质。在某些实施方案中将鱼皮贮存于约4V温度的该缓冲液中。在冷冻和/或洗涤和/或贮存于缓冲液中后，将鱼皮用一种或多种脱细胞溶液处理以除去鱼皮的细胞材料，包括抗原材料，而对天然存在的细胞外基质的机械完整性和结构完整性和生物活性有最小限度的损害乃至无损害。术语“细胞外基质”或“ECM”用于本文指存在于鱼皮内的无细胞组织材料，除了执行各种其它重要功能外为皮肤细胞提供结构支持。本文描述的ECM不包括已完全用提取、纯化或分离的ECM组分(如胶原)构成或再形成的基质材料。术语“无细胞的”、“脱细胞的”、“脱细胞的鱼皮”等用于本文指从中已除去基本量细胞和核酸内容物剩下复杂的ECM三维间质结构的鱼皮。“脱细胞剂”是从ECM有效除去基本量细胞和核酸内容物的那些剂。当已从ECM除去至少50%活力和无活力核酸及其它细胞材料时，将ECM称为“脱细胞的”或“基本不含”细胞和核酸内容物(即已除去“基本量”)。在某些实施方案中，除去约 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%,94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99. 5%或100%活力和无活力核酸和细胞材料。脱细胞可通过例如测试经处理鱼皮的DNA含量验证。可以例如通过ECM的组织学检查，和/或通过生化测定比如PIC0GREEN 测定、二苯胺测定，或者通过PCR，确定从ECM除去的核酸。脱细胞破坏细胞膜和释放细胞内容物。脱细胞可涉及一种或多种物理处理、一种或多种化学处理、一种或多种酶处理或其任何组合。物理处理的实例是声处理、机械搅动、机械按摩、机械压力和冷冻/解冻。化学脱细胞剂的实例是离子盐(如叠氮钠)、碱、酸、去污剂(如非离子和离子去污剂)、氧化剂(如过氧化氢和过氧酸)、低渗溶液、高渗溶液、螯合剂(如EDTA和EGTA)、有机溶剂(如三(正丁基)_磷酸酯)、抗坏血酸、蛋氨酸、半胱氨酸、马来酸和与DNA结合的聚合物(如聚-L-赖氨酸，聚乙烯亚胺(PEI)，和聚酰胺胺(PAMAM))。非离子去污剂包括4-(1，1，3，3-四甲本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.10.07 US 61/249,341;2010.06.10 US 61/353,3201.一种支架材料，其包含脱细胞的鱼皮。2.权利要求I的支架材料，其中支架材料包含来自鱼皮的细胞外基质材料。3.权利要求2的支架材料，其中支架材料进一步包含来自鱼皮脂质层的脂质。4.权利要求I的支架材料，其中支架材料采用创伤敷料、绷带、缝合材料和/或网状物材料的形式。5.权利要求I的支架材料，其中支架材料基本无鳞。6.权利要求I的支架材料，其中支架材料是生物相容的。7.权利要求I的支架材料,其中支架材料进一步包含一种或多种加入的活性剂。8.权利要求6的支架材料，其中加入的活性剂选自抗生素、防腐剂、抗微生物剂、抗病毒剂、抗真菌剂、抗寄生虫...
【专利技术属性】
技术研发人员：GF西古尔荣松，DH吉斯拉多蒂尔，G古蒙森，
申请(专利权)人：克雷西斯公司，
类型：发明
国别省市：
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