转AaWRKY1基因提高青蒿中青蒿素含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种转AaWRKY1基因提高青蒿中青蒿素含量的方法，包括以下步骤：从青蒿中克隆青蒿中WRKY类转录因子AaWRKY1基因；构建含AaWRKY1基因的植物表达载体；用根癌农杆菌介导，将AaWRKY1基因转入青蒿并再生出植株；PCR检测外源目的基因AaWRKY1的整合情况；高效液相色谱法及蒸发光散射检测器测定转基因青蒿中青蒿素的含量，筛选获得青蒿素含量提高的转基因青蒿植株。本发明专利技术提供的转AaWRKY1基因青蒿中青蒿素的含量达到24.59mg/g?DW，其含量是非转化青蒿含量的4.44倍，从而提供了一种提高青蒿中青蒿素含量的方法，为青蒿素的规模化生产提供了高产、稳定的新药源。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种利用转基因技术提高青蒿中青蒿素含量的方法，特别是一种转AaffRKYl基因提高青蒿中青蒿素含量的方法。
技术介绍
青蒿(Artemisia annua L.)是菊科蒿属的一年生草本植物。青蒿素(artemisinin)是从其地上部分分离的一种含有过氧桥结构的倍半職内酯化合物,是目前世界上公认的最有效的治疗疟疾的药物，特别是对于脑型疟疾和抗氯喹疟疾具有速效和低毒的特点。目前，世界卫生组织推荐的最有效的治疗疟疾的方法就是青蒿素联合疗法(ACTs)。另外，随着对青蒿素药理研究的逐步深入，科学家发现青蒿素及其衍生物还具有抗炎、抗血吸虫、抗肿瘤以及免疫调节的功能。可见青蒿素是一种极具潜力的天然药物。 目前青蒿素的主要来源是从青蒿植株的地上部分提取，然而青蒿中青蒿素的含量非常低，不同种植环境和种植品种中其平均含量在青蒿叶片干重的0.01 1%，使得这种药物的大规模商业化生产受到了限制。由于青蒿素结构复杂，人工合成难度大，产量低，成本高，不具有可行性。有人尝试用组织培养和细胞工程的方法来生产青蒿素，然而青蒿素在愈伤组织中含量低于干重的0. 1%，在芽中最高也只有干重的0. 16本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种转AaWRKY1基因提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，采用基因克隆方法获得青蒿WRKY类转录因子AaWRKY1基因；步骤二，把所述AaWRKY1基因连结于表达调控序列，构建含AaWRKY1基因的植物表达载体；步骤三，将所述含AaWRKY1基因的植物表达载体转化根癌农杆菌，获得用于转化青蒿的含所述AaWRKY1基因植物表达载体的根癌农杆菌菌株；步骤四，利用所述构建的根癌农杆菌菌株转化青蒿，获得经PCR检测的整合外源目的基因AaWRKY1基因的转基因青蒿植株；步骤五，对所述转基因青蒿中青蒿素含量进行HPLC？ELSD测定，筛选获得青蒿素含量提高的转基因青蒿植株。

【技术特征摘要】
1.一种转AaWRKYl基因提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，包括如下步骤 步骤一，采用基因克隆方法获得青蒿WRKY类转录因子AaWRKYl基因； 步骤二，把所述AaWRKYl基因连结于表达调控序列，构建含AaWRKYl基因的植物表达载体； 步骤三，将所述含AaWRKYl基因的植物表达载体转化根癌农杆菌，获得用于转化青蒿的含所述AaWRKYl基因植物表达载体的根癌农杆菌菌株； 步骤四，利用所述构建的根癌农杆菌菌株转化青蒿，获得经PCR检测的整合外源目的基因AaWRKYl基因的转基因青蒿植株； 步骤五，对所述转基因青蒿中青蒿素含量进行HPLC-ELSD测定，筛选获得青蒿素含量提高的转基因青蒿植株。2.根据权利要求I所述的转AaWRKYl基因提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，在所述步骤四中，所述转化包括以下步骤外植体的预培养；农杆菌与外植体的共培养；抗性再生植株的筛选。3.根据权利要求2所述的转AaWRKYl基因提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，所述预培养包括以下步骤青蒿种子用体积分数为75%乙醇浸泡lmin，再用质量分数为20%NaC10浸泡20min,无菌水冲洗3 4次,用无菌吸水纸吸干表面水分,接种于无激素的MS固体培养基中，25°C光照培养，即可获得青蒿无菌苗，待苗长至5cm后，剪取无菌苗叶片外植体用于转化。4.根据权利要求2所述的转AaWRKYl基...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐克轩，江伟民，陆续，邱波，王国丰，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：