本发明专利技术提供了一种从粉虱座壳孢菌(Aschersoniaaleyrodis)代谢物中提取抑菌剂的方法，所述的微生物抑菌剂为粉虱座壳孢菌代谢物乙酸乙酯提取物。主要包括以下步骤：液体培养、分离、加有机溶剂萃取、浓缩制得抑菌物、回收有机溶剂。本发明专利技术的抑菌剂原材料具有生长周期短、繁殖快的特点，抑菌剂来源于天然产物，具有无毒副作用，不易导致病原微生物产生抗耐药性，且制备简单，成本较低。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。
技术介绍
金黄色葡萄球菌是人类口腔微生物中的主要致病菌，还是引起化脓感染的重要病原菌，随着抗生素的广泛应用，使得金黄色葡萄球菌越来越具有耐药性。本专利技术的原材料粉風座壳孢菌(Aschersonia aleyrodis)隶属于子囊菌门、粪菌纲、肉座菌目、麦角菌科、座壳孢菌属，是一种虫生真菌，从其天然产物中提取的物质具有无毒副作用、不易导致病原微生物产生抗耐药性的特点，对开发生物抑菌剂具有重要的科学和应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，得到的抑菌剂来源于天然产物，无毒副作用，不易导致人类和工业病原微生物产生抗耐药性，且制备简单，成本较低。本专利技术的技术方案如下 ，包括以下步骤 1)将粉虱座壳孢菌活化后，取菌块接种PDB培养基中，在120-160r/min、20-28°c条件下连续培养5-10天即初级培养，按8% -10%接种量再次转接到PDB培养基中，继续在120-160r/min、20-28°C条件下连续培养25-30天即次级培养； 2)培养后将菌液、菌丝体过滤分离，用乙酸乙酯对菌液进行液液萃取，萃取液旋蒸浓缩得菌液粗提物，将乙酸乙酯回收； 3)菌丝体在28-35°C条件下干燥、粉碎，再用乙酸乙酯超声萃取，萃取液旋蒸浓缩得菌丝体粗提物，回收乙酸乙酯； 4)将菌丝体粗提物和菌液粗提物合并加乙醇溶出过滤，制得抑菌剂。步骤2)所述液液萃取的条件为乙酸乙酯与菌液按体积比2:1 1:1，在220C _28°C下摇瓶萃取20-40min、再静止20_40min，如此反复萃取3-5次。步骤3)所述超声萃取的条件为乙酸乙酯与菌丝体按体积比2:1 1:1，在220C _28°C下超声萃取20-40min，静止20_40min，如此反复萃取3-5次。步骤3)所述超声萃取的功率300 500W，频率30 40KHz。步骤3)所述粉碎的颗粒直径为10 30目。PDB培养基的制备如下200g马铃薯，20g葡萄糖，沸水煮30min，经4层纱布过滤后加单蒸水定容至1L。本专利技术的显著优点 I)本专利技术的抑制剂原材料具有生长周期短、繁殖快的特点。2)本专利技术的抑菌剂可以有效地抑制金黄色葡萄球菌，其MIC为O. 052mg/ml,对枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌等也有一定的抑菌效果。3)本专利技术的抑菌剂来源于天然产物，具有无毒副作用，不易导致人类和工业病原微生物产生抗耐药性，且制备简单，成本较低，在医药领域具有潜在的应用价值。具体实施例方式实施例I 1)取粉虱座壳孢菌(邱君志等，昆虫病原真菌粉虱座壳孢对烟粉虱侵染行为的初步研究.菌物学报，2004，23 (I) :115 121)为材料，无菌条件下挑取长宽约为Icm的菌块到PDB培养基(200g马铃薯，20g葡萄糖，沸水煮30min，经4层纱布过滤后加单蒸水定容至1L，分装到250ml三角瓶中，每瓶装100ml，在121°C高压下灭菌25min)中，在160r/min、25°C条件下连续培养8天即初级培养，按9%接种量再次转接到PDB培养基中，继续在160r/min、 25 °C条件下连续培养28天即次级培养； 2)培养后将菌液、菌丝体过滤分离，用乙酸乙酯对菌液进行液液萃取，加液量按体积比2:1，在25 °C下摇瓶萃取30min、再静止30min，如此将菌液萃取4次，旋蒸浓缩得菌液菌粗提物，将乙酸乙酯回收； 3)菌丝体在30°C条件下干燥，将其粉碎过20目筛，用乙酸乙酯进行超声萃取，加液量按体积比2:1，在25 °C下超声萃取30min，静止30min，如此反复萃取4次，旋蒸浓缩得菌丝体粗提物，回收乙酸乙酯； 4)将菌丝体粗提物和菌液粗提物合并，即得抑菌物质A。实施例2 1)取粉虱座壳孢菌(邱君志等，昆虫病原真菌粉虱座壳孢对烟粉虱侵染行为的初步研究.菌物学报，2004，23 (I) :115 121)为材料，无菌条件下挑取长宽约为Icm的菌块到PDB培养基(200g马铃薯，20g葡萄糖，沸水煮30min，经4层纱布过滤后加单蒸水定容至1L，分装到250ml三角瓶中，每瓶装100ml，在121°C高压下灭菌25min)中，在120r/min、20°C条件下连续培养5天即初级培养，按8% %接种量再次转接到PDB培养基中，继续在120r/min、20°C条件下连续培养25天即次级培养； 2)培养后将菌液、菌丝体过滤分离，用乙酸乙酯对菌液进行液液萃取，加液量按体积比1:1，在22°C°C下摇瓶萃取20min、再静止20min，如此将菌液萃取3次，旋蒸浓缩得菌液菌粗提物，将乙酸乙酯回收； 3)菌丝体在28°C条件下干燥，将其粉碎过10目筛，用乙酸乙酯进行超声萃取，加液量按体积比1:1，在22°C°C下超声萃取20min，静止20min，如此反复萃取3次，旋蒸浓缩得菌丝体粗提物，回收乙酸乙酯； 4)将菌丝体粗提物和菌液粗提物合并加乙醇溶出过滤，制得抑菌剂。实施例3 I)取粉虱座壳孢菌(邱君志等，昆虫病原真菌粉虱座壳孢对烟粉虱侵染行为的初步研究.菌物学报，2004，23 (I) :115 121)为材料，无菌条件下挑取长宽约为Icm的菌块到PDB培养基(200g马铃薯，20g葡萄糖，沸水煮30min，经4层纱布过滤后加单蒸水定容至1L，分装到250ml三角瓶中，每瓶装100ml，在121°C高压下灭菌25min)中，在160r/min、28°C条件下连续培养10天即初级培养，按10%接种量再次转接到PDB培养基中，继续在160r/min、28°C条件下连续培养30天即次级培养； 2)培养后将菌液、菌丝体过滤分离，用乙酸乙酯对菌液进行液液萃取，加液量按体积比2:1，在28°C下摇瓶萃取40min、再静止40min，如此将菌液萃取5次，旋蒸浓缩得菌液菌粗提物，将乙酸乙酯回收； 3)菌丝体在35°C条件下干燥，将其粉碎过30目筛，用乙酸乙酯进行超声萃取，加液量按体积比2:1，在28°C下超声萃取40min，静止40min，如此反复萃取5次，旋蒸浓缩得菌丝体粗提物，回收乙酸乙酯； 4)将菌丝体粗提物和菌液粗提物合并加乙醇溶出过滤，制得抑菌剂。对比实施例II)同实施例I的步骤I)。将实施例I的步骤2)中乙酸乙酯替换为二氯甲烷，方法同实施例I。将实施例I的步骤3)中乙酸乙酯替换为二氯甲烷，方法同实施例I。2)将菌丝体粗提物和菌液粗提物合并，即得抑菌物质B。对比实施例2 I)同实施例I的步骤I)。2)将实施例I的步骤2)中乙酸乙酯替换为甲醇，方法同实施例I。3)将实施例I的步骤3)中乙酸乙酯替换为甲醇，方法同实施例I。4)将菌丝体粗提物和菌液粗提物合并，即得抑菌物质C。抑菌实验用乙醇将抑菌物配制成浓度为10 mg/ml的母液并进行二倍梯度稀释，配制各梯度浓度的抑菌剂，用无菌水分别将金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌配成浓度均为108cfu/ml的菌液,在无菌条件下,分别将直径6 mm的无菌滤纸片放入个各浓度的抑菌剂中浸泡30 min,以浸泡在乙醇中的滤纸片为对照，取出，挥干溶剂，覆盖在以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌为指示菌的培养基表面，在35°C培养24小时，每种抑菌剂做三个重复，抑本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从粉虱座壳孢菌代谢物中提取抑菌剂的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：1)将粉虱座壳孢菌活化后，取菌块接种PDB培养基中，在120？160r/min、20？28℃条件下连续培养5？10天即初级培养，按8％？10％接种量再次转接到PDB培养基中，继续在120？160r/min、20？28℃条件下连续培养25？30天即次级培养；2)？培养后将菌液、菌丝体过滤分离，用乙酸乙酯对菌液进行液液萃取，萃取液旋蒸浓缩得菌液粗提物，将乙酸乙酯回收；3)？菌丝体在28？35℃条件下干燥、粉碎，再用乙酸乙酯超声萃取，萃取液旋蒸浓缩得菌丝体粗提物，回收乙酸乙酯；4）？将菌丝体粗提物和菌液粗提物合并加乙醇溶出过滤，制得抑菌剂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邱君志，毛丽慧，郭庆丰，李小霞，涂洁，关雄，邱云锋，宋飞飞，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：
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