VSTM1蛋白在制备促进白血病细胞分化产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种VSTM1蛋白在制备促进白血病细胞分化产品中的应用。本发明专利技术提供的如下1）-5）中任一一种物质在制备促进白血病细胞分化产品中的应用：1）、VSTM1蛋白；2）VSTM1蛋白编码基因；3）含有所述VSTM1蛋白编码基因的重组载体；4）含有所述VSTM1蛋白编码基因的表达盒；5）含有所述VSTM1蛋白编码基因的转基因细胞系；所述VSTM1蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列1。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术说明该蛋白可以促进细胞分化，可用于白血病治疗，尤其是为耐化疗药白血病的研究和治疗提供了新的途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种VSTMl蛋白在制备促进白血病细胞分化产品中的应用。
技术介绍
白血病是以造血细胞分化阻滞为特 征的一类恶性疾病，目前根据累及的细胞类别不同分为淋巴细胞白血病、髓系白血病、红白血病及巨核细胞白血病等。其中以急性髓系白血病(AML)因髓系细胞分化阻滞阶段不同而呈现很大的异质性。传统的对AML的FAB分型已经不足以反映AML的特征，临床应用有限。因此，目前广泛运用的WHO的分型将AML的免疫标志物表达(免疫分型)、细胞遗传学改变及分子生物学(融合基因、突变)等纳入分类因素，更详细的反映了 AML的真实特征及其与预后的关系，对临床治疗的指导意义更大。VSTMl (V-set and transmembrane domain containing I)是由北京大学人类疾病基因研究中心新发现的一种潜在的细胞因子编码基因。人类VSTMl基因定位于染色体19ql3. 42，存在五种剪切体，其中VSTMl-vl和VSTMl_v2是两种主要形式。VSTMl-vl为I型膜蛋白，在NK、T、B、单核和粒细胞中广泛表达，在大多数肿瘤来源的细胞系中表达缺失；VSTM1-V2为经典分泌的糖蛋白，能促进外周血CD4+T细胞分泌IL-17A。Gene Atlas数据库提示VSTMl在正常骨髓CD33+髓系细胞中选择性高表达，而在其它组织、细胞中的表达丰度非常低。提示VSTMl不仅参与正常髓系细胞的发生、发展，而且可能在血液肿瘤的病理机制中发挥重要作用。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供如下I) -5)中任--种物质的新用途。本专利技术提供的如下1)-5)中任--种物质在制备促进白血病细胞分化和/或治疗白血病产品中的应用I),VSTMl蛋白；2) VSTMl蛋白编码基因；3)含有所述VSTMl蛋白编码基因的重组载体；4)含有所述VSTMl蛋白编码基因的表达盒；5)含有所述VSTMl蛋白编码基因的转基因细胞系；所述VSTMl蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列I。上述应用中，所述VSTMl蛋白编码基因的核苷酸序列为序列表中的序列2。上述应用中，所述含有所述VSTMl蛋白编码基因的重组载体为将所述VSTMl蛋白编码基因插入表达载体中得到的重组载体。上述含有所述VSTMl蛋白编码基因的重组载体具体为pcDB-VSTMl，为将序列2(VSTMl蛋白编码基因)插入pcDNA3. 1-Myc-his (-)B的Not I和Kpn I酶切位点间得到的载体。上述应用中，所述含有所述VSTMl蛋白编码基因的转基因细胞系为将所述重组载体转入目的细胞得到的转基因细胞系。上述应用中，所述白血病细胞和所述目的细胞均为慢性髓性白血病细胞或巨核细胞白血病细胞系；所述慢性髓性白血病细胞系具体为K562细胞；所述巨核细胞白血病细胞具体为MEG-Ol细胞；所述促进白血病细胞分化通过促进白血病细胞表面分化抗原⑶Ilb表达体现。本专利技术的另一个目的是提供如下I)-5)中任一一种物质的新用途。本专利技术提供的如下I) -5)中任--种物质在制备促进白血病细胞表面分化抗原⑶I Ib表达产品中的应用I),VSTMl蛋白；2) VSTMl蛋白编码基因；3)含有所述VSTMl蛋白编码基因的重组载体；4)含有所述VSTMl蛋白编码基因的表达盒；5)含有所述VSTMl蛋白编码基因的转基因细胞系； 所述VSTMl蛋白的氣基酸序列为序列表中的序列I ;所述VSTMl蛋白编码基因的核苷酸序列为序列表中的序列2。上述应用中，所述含有所述VSTMl蛋白编码基因的重组载体为将所述VSTMl蛋白编码基因插入表达载体中得到的重组载体；所述含有所述VSTMl蛋白编码基因的转基因细胞系为将所述重组载体转入目的细胞得到的转基因细胞系。上述含有所述VSTMl蛋白编码基因的重组载体具体为pcDB-VSTMl，为将序列2(VSTMl蛋白编码基因)插入pcDNA3. 1-Myc-his (-)B的Not I和Kpn I酶切位点间得到的载体。上述应用中，所述白血病细胞和所述目的细胞均为慢性髓性白血病细胞或巨核细胞白血病细胞系；所述慢性髓性白血病细胞系具体为K562细胞；所述巨核细胞白血病细胞具体为MEG-Ol细胞。本专利技术的第三个目的是提供一种制备促进白细胞分化、促进白血病细胞表面分化抗原⑶I Ib表达和/或治疗白血病产品。本专利技术提供的产品，为上述的应用中的所述I) -5)中任--种物质。上述产品中，所述白血病细胞为慢性髓性白血病细胞或巨核细胞白血病细胞系；所述慢性髓性白血病细胞系具体为K562细胞；所述巨核细胞白血病细胞具体为MEG-Ol细胞。本专利技术的实验证明，本专利技术发现VSTMl蛋白可以促进白血病细胞的分化，将VSTMl蛋白编码基因转染白血病细胞K562细胞或MEG-Ol细胞，得到的转基因细胞的CDllb (细胞分化的细胞标记物，表达量越高，分化程度越高)表达量增加，说明该蛋白可以促进细胞分化，可用于白血病治疗，尤其是为耐化疗药白血病的研究和治疗提供了新的途径。附图说明图I为转染细胞VSTMl蛋白表达水平检测图2为转染细胞VSTMl蛋白促进⑶Ilb表达具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到，部分具体如下列出I、小牛血清、RPMI1640 :购自GIBCO公司。2、人慢性髓性白血病细胞系K562和巨核细胞白血病细胞系MEG-01 (K562细胞购自中国科学院细胞库，产品目录号为TCHul91 ；MEG-OI细胞购自中国科学院细胞库，产品目录号为 TCHul97 ；)。5、6孔、24孔及96孔培养板购自Corning公司。7、突光素标记的单克隆抗体⑶Ilb-PE :购自美国Becton Dickinson公司。8、多克隆抗体VSTM1-FITC :将抗原多肽免疫兔，收集兔血清，纯化并且荧光标记 得到多克隆抗体VSTM1-FITC，抗原为VSTMl，其氨基酸序列为序列表中的序列I。下述实施例中所用主要仪器设备I、超净工作台北京半导体设备厂；2、CO2培养箱美国NAPCO牌；3、低温高速离心机GS_15R型,美国Beckman公司；4、流式细胞仪FACSort 型，美国 Becton Dickinson 公司；5、倒置光学显微镜日本Olympus公司；6、低速离心机BFX5_320型(白洋离心机厂)。下述实施例中的流式细胞检测运用带不同荧光素的抗白细胞表面抗原的抗体标记骨髓细胞，具体步骤如下(I)骨髓细胞计数取IOul样本，加适量冰醋酸裂解红细胞并稀释血细胞，显微镜下计数；(2)按照抗体说明书加适量抗体至200 μ I血样，室温(25°C)避光孵育15min ；(3)加红细胞裂解液(NH4CL I. 8675g, Tris (λ 65g蒸馏水250ml)，室温裂解8min ；(4)离心 1200rpmX IOmin,弃上清液；(5)加磷酸缓冲液(phosphate buffer saline, PBS)(购自上海耕欣生物科技有限公司。)洗两遍；(6)离心1200rpmX10min，弃上清液，加200μ I PBS上流式细胞仪检测。(7)数据分析下述实施例运用FCS Express V3软件分析本文档来自技高网...

【技术保护点】
如下1）？5）中任一一种物质在制备促进白血病细胞分化和/或治疗白血病产品中的应用：1）、VSTM1蛋白；2）VSTM1蛋白编码基因；3）含有所述VSTM1蛋白编码基因的重组载体；4）含有所述VSTM1蛋白编码基因的表达盒；5）含有所述VSTM1蛋白编码基因的转基因细胞系；所述VSTM1蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列1。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：阮国瑞，谢敏，黄晓军，马大龙，韩文玲，陈珊珊，刘艳荣，冷馨，李婷，王绪华，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：