一种人胰腺腺鳞癌细胞系及其建立方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种人胰腺腺鳞癌细胞系及其建立方法和应用。该人胰腺腺鳞癌细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCC201074。该人胰腺腺鳞癌细胞系可用于在哺乳动物中产生人胰腺腺鳞癌，制备人胰腺腺鳞癌模型，可进一步用于筛选治疗人胰腺腺鳞癌的候选药物。本发明专利技术的人胰腺腺鳞癌细胞系性状稳定，可稳定多次传代。体外传代自第20代至第50代性状保持稳定。本发明专利技术的人胰腺腺鳞癌细胞系具有临床上人胰腺腺鳞癌的生物学性状，为胰腺腺鳞癌研究提供新的更接近于临床肿瘤生物学特性的实验材料。

Human pancreatic gland squamous carcinoma cell line and its establishment method and Application

The invention provides a human pancreatic adenocarcinoma cell line and a method for establishing the same and an application thereof. The human pancreatic adenocarcinoma cell line was preserved in a typical Chinese culture collection center, and the preservation number was CCTCCC201074. The human pancreatic adenocarcinoma cell line can be used to produce human pancreatic adenocarcinoma in mammals and to prepare a human pancreatic adenocarcinoma model that can be further used to screen candidate drugs for the treatment of human pancreatic adenocarcinoma. The human pancreatic adenocarcinoma cell line of the invention has stable characters and can be stably passaged several times. The characters remained stable from twentieth to fiftieth generations. The human pancreatic adenocarcinoma cell line of the invention has biological characteristics of human pancreatic adenocarcinoma in clinic, and provides new experimental materials closer to the biological characteristics of clinical tumors for the study of pancreatic adenocarcinoma.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞系领域，特别涉及一种人胰腺腺鳞癌细胞系及其建立方法和应用。
技术介绍
胰腺腺鳞癌(adenosquamous carcinoma)又称胰腺黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma)、胰腺棘皮癌(adenoacanthoma),组织学上肿瘤由导管腺癌成分和鳞状细胞癌成分混合构成，是一种非常少见的胰腺恶性肿瘤，胰腺腺鳞癌占胰腺恶性外分泌肿瘤的3% 4%。胰腺腺鳞癌以老年人为常见。常见的临床体征包括腹痛、体重下降、厌食、乏力、黄疸等，无特异性，与胰腺导管腺癌无法区分。临床比较常见的是肿块与周围脏器粘连在一起，有时会难以分辨病变起源于哪个器官。有时，胰腺本身的病灶较小， 周围器官的病灶很大，似乎是其他脏器的肿瘤累及胰腺组织。这种早期发生转移的生长特点，常常给诊断带来误导。I、起源胰腺最常见的肿瘤是导管腺癌，而胰腺腺鳞癌是少见类型的胰腺恶性肿瘤。胰腺导管腺癌起源于胰腺的外分泌部(胰腺导管)，但胰腺的鳞癌成分来自哪里并不十分清楚。多数学者接受多能干细胞分化理论，认为腺鳞癌细胞起源于多能干细胞，然后分化、增殖而形成。2、病理学特征大体及镜下特点大多数胰腺腺鳞癌位于胰腺的头部，也可位于胰腺体、尾，甚至占据整个胰腺。在病灶中同时存在胰腺导管腺癌和鳞癌的成分，其中鳞癌生长较快，易发生坏死、囊变，腺癌很少发生坏死，常产生黏液。大体病理病变切除物为淡棕褐色至淡黄色，通常与正常的胰腺实质界限不清。组织病理学通过HE染色标本作为诊断的标准，肿瘤包括腺上皮细胞和鳞状上皮细胞，前者有导管或腺体结构伴有大量细胞内外粘蛋白；后者是以不规则和浸润性的实性瘤巢或带有明显的细胞边界、细胞间桥、不透亮的嗜伊红染色的胞浆、不同程度的角化现象的多形编织状细胞为特征。免疫组织化学大多数腺鳞癌中，CA 19-9、CK7、CK19、CEA阳性被认为是代表腺癌的，鳞癌中一般有高分子量CK和P63阳性，常规还做p53、Ki-67等辅助了解肿瘤的基因突变和增值活性等信息。因而可以作为鉴别胰腺腺鳞癌的补充方法。3、治疗及预后胰腺腺鳞癌由于发病隐匿，很难早期发现和治疗，往往预后不良。手术治疗(包括胰十二指肠切除、胰体尾切除加周围淋巴结清扫)是胰腺腺鳞癌的主要治疗方法。手术后患者总的生存期大概为5、6个月，超过I年者很少。肝功能衰竭、广泛转移、恶病质是最常见的死亡原因。目前，有关胰腺腺鳞癌的发生、发展的生物学机制尚不十分清楚，也缺少用于胰腺腺鳞癌发生机理及抗胰腺腺鳞癌药物开发的接近临床肿瘤生物学特性的实验材料，通过对ATCC，上海细胞库等国际上大型细胞库搜索，没有发现已经建立好的胰腺腺鳞癌细胞系。运用临床肿瘤组织直接建立细胞系的成功率较低，因此，通过运用临床肿瘤标本先建立动物模型，进而通过原代培养建立的人源肿瘤细胞更接近于肿瘤的临床生物学特性，对于研究胰腺腺鳞癌的发生和发展是个很好的研究工具。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题就是针对现有尚没有建立好并可以购买到的人胰腺腺鳞癌细胞系存在，提供一种新的人胰腺腺鳞癌细胞系及其建立方法和用途。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案是一种人胰腺腺鳞癌细胞系，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO :C201074。本专利技术还提供如上所述的人胰腺腺鳞癌细胞系的子代细胞系。本专利技术还提供如上所述的人胰腺腺鳞癌细胞系的用途，用于在哺乳动物中产生胰腺腺鳞癌。所述的哺乳动物可以是各种哺乳动物，优选裸小鼠。所述的裸小鼠优选BALC/c 裸小鼠。所述的胰腺腺鳞癌优选胰低分化或中分化腺癌。本专利技术还提供一种上述人胰腺腺鳞癌细胞系的建立方法，包括以下步骤，I)获得新鲜的临床胰腺腺鳞癌手术切除标本，切成20 50mg的小块，接种哺乳动物；2)接种80 100天后，将荷瘤动物处死，取出肿瘤组织，进行癌细胞的原代培养和传代培养。其中，所述的哺乳动物、所述的胰腺腺鳞癌都如上所述。所述的新鲜的临床胰腺腺鳞癌手术切除标本较佳的用哺乳动物细胞培养液或生理盐水漂洗后再进行接种，更佳的用新鲜的HBSS缓冲液(含500U/ml青霉素G、500 μ g/ml硫酸链霉素和I. 25 μ g/ml两性霉素B)漂洗。所述的接种的方式可以是皮下穿刺接种，原位接种或者肾囊膜内接种。对于胰腺腺鳞癌较佳的是进行皮下穿刺接种。所述的原代培养方法可以是常规的哺乳动物细胞的原代培养方法。较佳的包括以下步骤将肿瘤组织剪切成小块，置入培养瓶中，于37°C孵箱体积百分比5% CO2条件下培养；次日，将培养瓶慢慢翻转平放，向瓶内加入DMEM/F12培养液(含体积百分比5%胎牛血清，10 μ g/ml重组人胰岛素,6. 7ng/ml亚硒酸钠,5. 5 μ g/ml转铁蛋白，2 μ g/ml乙醇胺，100U/ml青霉素G、100 μ g/ml硫酸链霉素和O. 25 μ g/ml两性霉素B)，静置培养；所述的传代培养方法可以是常规哺乳动物细胞的传代培养方法。较佳的包括以下步骤吸弃旧培养液，向瓶中加入新鲜的O. 05g/100ml胰蛋白酶溶液，待细胞脱落后，力口入新鲜的DMEM/F12培养液，仔细吹打，使之脱离瓶壁形成细胞悬液；少量在瓶壁上变圆但没有脱落的细胞，用无菌细胞刮刀轻轻刮擦培养瓶表面，收集全部细胞，离心，分别接种于新的培养瓶；当细胞传代到第五代以后，将培养液更换为RPMI 1640培养液(含体积百分比10%胎牛血清，10 μ g/ml重组人胰岛素，100U/ml青霉素G、100y g/ml硫酸链霉素和O. 25 μ g/ml两性霉素B)。本专利技术还提供一种筛选治疗胰腺腺鳞癌的候选药物的方法，包括以下步骤将测试化合物施用于动物模型，施用后导致胰腺腺鳞癌症状改善或治愈的测试化合物就是治疗胰腺腺鳞癌的候选化合物，其中所述的动物模型具有如上所述的人胰腺腺鳞癌细胞系或其子代细胞系所导致的胰腺腺鳞癌肿瘤。具体的，本专利技术的筛选治疗胰腺腺鳞癌的候选药物的方法包括以下步骤(I)将所述的胰腺腺鳞癌细胞系或其子代细胞系制备成细胞悬液，接种于哺乳动物皮下，进行饲养，获得人胰腺腺鳞癌动物模型；(2)将测试化合物施用于动物模型，施用后导致胰腺腺鳞癌症状改善或治愈的测试化合物就是治疗胰腺腺鳞癌的候选化合物。其中，所述的动物模型优选裸小鼠。所述的裸鼠优选BALB/C裸小鼠。较佳的可采用细胞悬液注射来建立动物模型。在施用步骤中，将测试化合物通过尾静脉注射、口服、腹腔注射或于肿瘤局部用药等方式施用于胰腺腺鳞癌荷瘤动物。较佳的使用对照实验，一种 优选的方式是同时还使用不含测试化合物的溶剂施用于胰腺腺鳞癌荷瘤动物作为对照。本专利技术中，上述优选条件在符合本领域常识的基础上可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。本专利技术所用的原料或试剂除特别说明之外，均市售可得。相比于现有技术，本专利技术的有益效果如下本专利技术的人胰腺腺鳞癌细胞系性状稳定，可稳定多次传代，为胰腺腺鳞癌研究提供新的更接近于临床肿瘤生物学特性的实验材料。本专利技术的细胞系具有高度成瘤性，可以成功制备胰腺腺鳞癌动物模型，所制的得动物模型可以用于基础研究及药物筛选。通过与裸小鼠体内传代亲本肿瘤相比较，可用来分析体夕卜、体内药物敏感性及耐药性的相关性，进而可以建立体外、体内两个相关联的抗胰腺胰腺腺鳞癌药物筛选平台。也可用于研究胰腺腺本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人胰腺腺鳞癌细胞系，其特征在于其保藏编号为CCTCC N0:C201074。2.如权利要求I所述的人胰腺腺鳞癌细胞系的子代细胞系。3.如权利要求I所述的人胰腺腺鳞癌细胞系或如权利要求2所述的人胰腺腺鳞癌细胞系的子代细胞系的用途，其特征在于其用于在哺乳动物中产生胰腺腺鳞癌。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于所述的哺乳动物是裸小鼠。5.一种如权利要求I所述的人胰腺腺鳞癌细胞系或如权利要求2所述的人胰腺腺鳞癌细胞系的子代细胞系的建立方法，其特征在于其包括以下步骤 .1)获得新鲜的临床胰腺腺鳞癌手术切除标本，切成20 50mg的小块，接种哺乳动物；所述的接种较佳的为皮下穿刺接种； .2)接种80 100天后，将荷瘤动物处死，取出肿瘤组织，进行癌细胞的原代培养和传代培养。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述的哺乳动物是裸小鼠。7.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述的新鲜的临床胰腺腺鳞癌手术切除标本用新鲜的HBSS缓冲液漂洗后，再进行接种； 所述的HBSS缓冲液含500U/ml青霉素G、500 μ g/ml硫酸链霉素和I. 25 μ g/ml两性霉素B。8.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述的原代培养方法包括以下步骤将肿瘤组织剪切成小块，置入培养瓶中，于37°C孵箱体积百分比5%的CO2条件下培养；次日，将培养瓶慢慢翻转平放，向瓶内加入DMEM/F12培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦宵然，李富，谢付波，胡刚，王科，闻丹忆，朱明华，张陆勇，江振洲，
申请(专利权)人：上海睿智化学研究有限公司，上海长海医院，中国药科大学，
类型：发明
国别省市：