一种结冷胶高效生产菌株及其应用制造技术

本发明专利技术从福建省三明市沙县的水稻根系土壤中分离并筛选得到能高产结冷胶的菌株，该菌株为少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-5627（Sphingomonas?paucimobilis），并揭露了利用该少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-5627制备结冷胶的方法。本发明专利技术的优点在于：提供一种新的少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-5627（Sphingomonas?paucimobilis），并利用该少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-5627制备结冷胶，且制备获得结冷胶的产量符合工业化生产需求，从而增加了符合工业化生产需求的结冷胶生产菌株的来源。

【技术实现步骤摘要】
一种结冷胶高效生产菌株及其应用
本专利技术涉及一种微生物及其应用，尤其涉及一种结冷胶高效生产菌株及应用其制备结冷胶的方法。
技术介绍
结冷胶(Gellan Gum)是美国Kelco公司20世纪80年代开发的一种微生物食用胶，它是由伊乐假单胞杆菌(Pseudomonas elodea)在中性条件下，以葡萄糖为碳源,硝酸铵为氮源及一些无机盐所组成的培养基中，经有氧发酵而产生的细胞胞外多糖胶质，是一种新型的全透明的凝胶剂，并以其安全、无毒、胶体增稠、耐酸、耐盐、耐高温等优良特性，作为多功能胶凝齐IJ、悬浮齐U、增稠剂等被广泛应用于食品、医药、化妆、肥料等行业，具有广阔的应用领域和较好的市场前景。 结冷胶于1988年被日本政府批准作为食品添加剂，1992年获得美国FDA的认证许可并开始应用于食品饮料中，1994年被欧共体正式列入是食品安全代码(E-418)，我国也在1996年批准其作为食品增稠剂、稳定剂使用(GB2760-1996)。目前在结冷胶生产上，除美国Kelco公司有年产5000吨能力外，我国河北、浙江也有两家企业生产结冷胶；但国内企业的结冷胶产量较少，难以满足我国结冷胶需求量日益增长的需要，因此，必需加大对结冷胶生产等方面的研究。少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)是主要的生产结冷胶的细菌。美国Kelco公司结冷胶的生产菌株ATCC 31461，分离自植物体，最初被命名为伊乐假单胞菌，后经过系统分类鉴定为少动鞘氨醇单胞菌(也称少动鞘脂单胞菌)。从资料报道上来看，少动鞘氨醇单胞菌可以从土壤、水样、空气、植物体或动物体组织样品中分离获得。筛选获得高产结冷胶的少动鞘氨醇单胞菌菌株，同时辅以高效、优良的发酵培养方法，是提高结冷胶产量与质量的前提保证。以往的研究表明，少动鞘脂单胞菌发酵产生结冷胶至少必须达到20g/L以上才有工业化生产的意义。目前国际上，主要的生产结冷胶菌株是ATCC31461，该菌株的最高结冷胶产量可达28g/L ;而国内公开报道的结冷胶生产菌株数量很少，主要有(I)中国专利申请号为ZL 200610068788. 5、名称为一株高产结冷胶的少动鞘氨醇单胞菌及其应用中所公开的少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis) XLJ菌株；(2)少动鞘脂单胞菌S I菌株(彭志英等，少动鞘脂单胞菌S I胞外多糖发酵工艺研究，微生物学通报，2000，27 (2) =97-100)；(3)少动鞘脂单胞菌Gll菌株(李海军等，结冷胶发酵生产工艺的优化，食品与药品，2007,9 (11) 7-12)；(4)少动鞘脂单胞菌G3. I菌株(杨冬月等，结冷胶发酵生产工艺优化研究，现代农业科技，2011 (11) :25-25,34)；(5)少动鞘脂单胞菌ZJU311菌株(徐晓琴等，微生物多糖结冷胶的分批发酵动力学模型，化学工程，2011,39 (11):1-5);上述5个菌株的粗结冷胶产量依次分别为16-18g/L、9g/L、ll. 65g/L、17. 3g/L和17. 6g/L，均较低，未达到有工业化生产意义的20g/L的要求，是结冷胶大规模产业化的主要限制因素，因此从业者需要进一步研究，以期获得产量能够符合工业化生产需求的新的结冷胶生产菌株。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种结冷胶高效生产菌株，该菌株为少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-5627 (Sphingomonas paucimobilis),该少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-5627于2012年05月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCCNO. 6111，并利用该菌株制备结冷胶。本专利技术是通过以下技术方案解决上述技术问题的本申请人从福建省三明市沙县的水稻根系土壤中分离并筛选得到能够高产结冷胶的菌株，通过对该菌株进行生理生化特性测定和磷脂脂肪酸Sherlock-MIDI系统分析，最终鉴定其为少动鞘氨醇单胞菌的一个菌株。进一步地，利用该菌株制备结冷胶，其制备方法的具体步骤为(I)所述的少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-5627的活化用接种环将所述的少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-5627划线接种于菌株培养基上,并于恒温培养箱中培养48h,培养温度设定为30±1°C ;(2)制备种子液将步骤(I)所培养获得的少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-5627的单菌落接种于350ml的种子液体培养基中，并将其置于恒温摇床中振荡培养18h,温度30±1°C，转速 180r/min ；(3)发酵液的制备以体积百分比为5%的接种量将步骤(2)所获得的种子液转入已消毒灭菌的液体发酵培养基中发酵培养48-56h，温度30 土 1°C，通气量1. 0-1. 2vvm，转速180r/min，并在培养过程中每隔一段时间取适量的发酵液检测其粘度，当粘度值达到28000-32000mPa S时则获得所需的发酵液，收集备用；且其中液体发酵培养基的组分为可溶性淀粉4. 0%,豆饼粉0. 5%，KH2PO4O. 07%,蒸馏水配制，pH7. 2 ；(4)结冷胶的提取将步骤(3)中收集到的发酵液置于转速为SOOOfmin的条件下离心20min，收集上清液，向该上清液内加入3倍体积的95%乙醇(即该上清液与95%乙醇的体积比为1:3)，静置6h使结冷胶充分沉淀；接着将静置好后的溶液置于转速为8000r/min的条件下离心20min，收集沉淀物；之后将收集到的沉淀物用适量95%乙醇冲洗脱色2_3次，然后把沉淀物放置在60°C下恒温烘干24h，即得所述结冷胶粗品。进一步地，所述步骤(I)中菌株培养基的组分牛肉浸膏0.3%，蛋白胨0.5%，葡萄糖I. 0%，酵母膏0. 1%，琼脂粉I. 8%，蒸馏水配制，pH7. 2 ；所述步骤(2)中种子液体培养基的组分蔗糖1.0%，可溶性淀粉1.0%，蛋白胨0. 3%，酵母粉0. 1%，蒸馏水配制，pH7. 2。另外，上述各培养基组分中的百分比均为质量比。本专利技术的有益效果在于提供一种新的少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-5627(Sphingomonas paucimobilis),并利用该少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-5627制备结冷胶，且制备获得结冷胶的产量符合工业化生产需求，即该少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-5627能够高产结冷胶，从而增加了符合工业化生产需求的结冷胶生产菌株的来源。附图说明下面参照附图结合实施例对本专利技术作进一步的描述。图I是本专利技术中菌株FJAT-5627的磷脂脂肪酸图谱。具体实施方式本专利技术一种结冷胶高效生产菌株即少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-5627(Sphingomonas paucimobilis)是从福建省三明市沙县的水稻根系土壤中分离并筛选得到能够高产结冷胶的菌株，并揭露了利用该少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT-5627制备结冷胶的方法。 一.该菌株FJAT-5627的分离(I)从福建省三明市沙县的水稻田中连根挖起处于孕穗期的水稻植株，并用保鲜袋套住，迅速带回实验室后，抖掉与根系松散结合的土体，然后将与根系紧密结合的土壤用刷子刷下来作为根系土壤；将根系土壤晾干后过40目筛得本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结冷胶高效生产菌株，其特征在于：所述菌株为少动鞘氨醇单胞菌菌株FJAT？5627（Sphingomonas？paucimobilis），于2012年05月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO．6111。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘波，朱育菁，黄素芳，葛慈斌，胡桂萍，
申请(专利权)人：福建省农业科学院农业生物资源研究所，
类型：发明
国别省市：