腹泻性贝类毒素标准样品及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种腹泻性贝类毒素的标准样品及其制备方法，以海洋贻贝为原料，经样品去杂质及匀浆、冻干程序、样品分装、测定方法等几个方面入手，重点开展了腹泻性贝类毒素质控样品关键制备技术的研究，在此基础上，进行了均匀性和稳定性测试；通过定值方法的确定，以及对定值数据的统计处理，确定腹泻性贝类毒素质控样品含量参考值，研制了生物检测用腹泻性贝类毒素标准样品。本项标准样品的制备完成，对全面深入的研究解决贝类毒素成分检测标准样品的制备技术和稳定性保证技术，积极开展我国检测贝类毒素标准样品的研制，添补该测量领域的空白，具有很重要的现实意义及应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于海洋水产检测
，具体涉及腹泻性贝类毒素的标准样品及其制备方法。
技术介绍
近年来贝类毒素已成为一个重要的公共卫生问题，已有多个国家对食品中贝毒限量进行控制，WHO也发布了关于预防贝毒危害、保护公共卫生的草案。我国是海洋经济贝类生产和出口大国，年产贝类约1100万吨，占世界总量70%。近10多年来，由于工业污染等 原因导致我国近海赤潮频发，严重影响了海洋水产养殖发展和出口贸易。欧盟自1995年发生食用中国进口贝类中毒事件以后，对我国的贝类进口已采取无限期闭关；韩国、日本、美国等国也对我国进口贝类及相关产品制定了严格的限制措施。贝类毒素已成为妨碍我国沿海渔业经济发展的一大公害，贝类食品的安全是重大公共卫生问题，是制约我国海洋渔业经济发展的一个重要因素。贝类毒素的种类很多，目前发现的主要有麻痹性贝类毒素(paralytic shellfishpoisoning, PSP)、腹湾性贝类毒素(Diarrhetic shellfish poisons, DSP)、神经性贝类毒素(NSP)和记忆缺失性贝类毒素(ASP)四大类。我国目前常见的主要是PSP和DSP。1976年，在日本宫城县发生了食用紫贻贝(Mytilus edulis)引起的以腹泻为主要症状的集体食物中毒。当时，从该贝的中肠腺(midgiit gland)检出了能杀死小白鼠的脂溶性毒素，为了将这种毒素与水溶性毒素相区别，及防止与其它毒素混淆，1977年又改称为腹湾性贝类毒素(Diarrhetic shellfish poisons, DSP)。DSP是双壳贝类在摄取有毒浮游生物祗藻(Dinophysis)作为饵料，在中肠腺累积了毒物。因而，当人们食用这些被毒化的贝类后，就会发生食物中毒。在日本，最初被鉴定为有毒浮游生物的是倒卵形鳍藻(Dinophysis tortii),后来经过对在世界各地采集的鳍藻进行鉴定,结果是在倒卵形鳍藻、渐尖鳍藻(D. acuminata)等7种鳍藻中检出了鳍藻毒素和大田软海绵酸两种成分。在日本，渐尖鳍藻及D. acuta、D. norvegica。而在我国，则倒卵形鳍藻与渐尖鳍藻均有分布。在我国，同日本一样，DSP的发生主要在北方黄、渤海贝类产地。在杂色蛤、文蛤、扇贝、牡蛎、贻贝、赤贝等贝类品种中均检出过DSP。从品种来看，以贻贝的检出率最高，其次依次为文蛤、扇贝、杂色給、赤贝；从含毒量来看，仍以赌贝最闻，最闻达0. 4MU/g,其次为杂色給，可达到0. 2MU/g ;从时间来看，4 11月份均有检出，但以初夏为多。目前，人们对赤潮及贝类毒素还无法进行有效的控制，因此预防和预报是减轻其危害的有效手段。WHO推荐的最有效的预防方法是对水源或收获区域开展控制监测程序。在贝类生产的各个环节，随时监测贝类毒素的变化是至关重要的。已经建立了很多检测方法，如生物检测法、免疫分析法、细胞毒性检测法及化学分析法等。受各种因素的限制，现今最有效的，也是被各国官方普遍认可的贝毒检测方法仍是小鼠生物法。在我国的国家标准和检验检疫行业标准中也是采用小鼠生物法，该方法需要使用大量的含有多组分的PSP和DSP标准品满足质控和定量要求。但是，DSP、PSP标准品都是单组分的标准纯品，无基质，价格相当昂贵，每个组分高达约6000元/100 y g，此外，贝毒标准品均为剧毒物质，世界各国对贝类毒素的出入境和使用均有严格的管理规定。研制贝类毒素实物标准样品可以满足对贝类毒素标准样品不断日益扩大的市场需求，解决国内外贝类产品检测实验室的严重缺乏贝类毒素标准样品的需求，对提高食品安全检测技术、解决技术壁垒、保障食品安全起到重大的作用，同时也提高我国在国际上的影响力。制备出的生物检测用腹泻性贝类毒素(Diarrhetic shellfish poisons, DSP)标准样品可用于定量或定性检测腹湾性贝类毒素，适合于食品、渔监、环保、质检、渔业、卫生等各个部门使用，可促进水产养殖、加工和贸易发展，确保食品安全，将带来显著的社会效益和经济效益。
技术实现思路
鉴于国内生物检测用腹湾性贝类毒素(Diarrhetic shellfish poisons, DSP)标准样品紧缺的状况，我们采样、样品处理、样品制备、样品分装、测定方法等几个方面入手，重点开展了腹泻性贝类毒素质控样品关键制备技术的研究，在此基础上，进行了均匀性和 稳定性测试；通过定值方法的确定，以及对定值数据的统计处理和不确定度评估，确定腹泻性贝类毒素质控样品含量参考值，研制了生物检测用腹泻性贝类毒素标准样品。腹湾性贝类毒素(Diarrhetic shellfish poisons, DSP)标准样品的使用方法是在生物检测过程中，以用腹湾性贝类毒素(Diarrhetic shellfish poisons, DSP)标准样品作为阳性标准对照品，将待检样品与阳性对照做平行试验，将检测的结果进行比对，确认样品中是否含有DSP，也可以通过制作标准曲线，再利用公式计算待测样品中DSP的含量。腹泻性贝类毒素标准样品，其制备方法包括如下步骤一.样品去杂质及匀浆取腹泻性贝类毒素检测呈阳性的扇贝，用清水将贝壳外表彻底洗净，切断闭壳肌，开壳，用重蒸馏水淋洗内部去除泥沙及其他杂质，将闭壳肌和连接在胶合部的组织分开，取出中肠腺，捡出碎壳杂物，置于筛子中浙水5min ;在冰水中匀浆5分钟，操作尽量轻缓；制得待冻干的样品；二.冻干程序①将上述待冻干的样品放_70°C中预冻至少4h ；②冷冻过程关好冷冻干燥机的干燥室门，开始干燥室制冷；干燥室温度降至-35°C时，开始冷却阱制冷；冷却阱制冷温度降至-40°C时，将步骤①获得的预冻产物迅速放入干燥室内，关好干燥室门；启动真空泵开始抽真空，真空表显示值开始下降；待真空度降至0. 5Torr时，结束冷冻过程；③样品干燥对干燥室加热，提高样品干燥速度；干燥室的温度设置为15°C ;当真空度降至0. ITorr或更低时，表示样品已干燥好；关闭真空泵，使干燥室与外界大气相通，待内外气压平衡后，打开干燥室门，取出样品，迅速装入密封袋中；④将步骤③制得的样品进行球磨机细磨，细磨后过40目筛；将过筛后得到的样品进行再次冷冻干燥，冷冻干燥的程序重复上述步骤② ③一次，去除水分得到标准样品；⑤分装在恒温恒湿、无菌操作间中，将步骤④获得的冻干粉，分装于经160°C干热处理2小时的洁净5ml棕色西林瓶中封盖密封，每瓶内装冻干粉I. Og ;瓶装后的样品加贴唯一性标识。经上述步骤一和二制备方法，其以海洋贻贝为原料，经样品去杂质及匀浆、冻干程序、样品分装、测定方法等几个方面入手，重点开展了腹泻性贝类毒素质控样品关键制备技术的研究，在此基础上，进行了均匀性和稳定性测试；通过定值方法的确定，以及对定值数据的统计处理，确定腹泻性贝类毒素质控样品含量参考值，研制了生物检测用腹泻性贝类毒素标准样品。本专利技术的创新特征是本项标准样品的制备完成，对全面深入的研究解决贝类毒素成分检测标准样品的制备技术和稳定性保证技术，积极开展我国贝类毒素检测标准样品的研制，添补该测量领域的空白，具有很重要的现实意义及应用价值。附图说明 图I.腹泻性贝类毒素标准样品制备工艺流程图。具体实施例方式下述非限制性实施例可以使本领域的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.腹泻性贝类毒素标准样品，其特征在于，制备方法包括 一.样品去杂质及勻衆 取腹泻性贝类毒素检测呈阳性的扇贝，用清水将贝壳外表彻底洗净，切断闭壳肌，开壳，用重蒸馏水淋洗内部去除泥沙及杂质，将闭壳肌和连接在胶合部的组织分开，取出中肠腺，捡出碎壳杂物，置于筛子中浙水5min ;在冰水中匀浆5分钟，操作尽量轻缓；制得待冻干的样品； 二.冻干程序 ①将上述待冻干的样品放_70°C中预冻至少4h； ②冷冻过程关好冷冻干燥机的干燥室门，开始干燥室制冷；干燥室温度降至_35°C时，开始冷却阱制冷；冷却阱制冷温度降至-40°C时，将步骤①...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐君怡，王秋艳，王刚，
申请(专利权)人：徐君怡，王秋艳，王刚，
类型：发明
国别省市：