本发明专利技术公开以大孔树脂为载体的甘露聚糖酶固定化方法及其应用，其特征在于甘露聚糖酶固定化方法包括以下步骤：(1)将大孔树脂在乙醇中浸泡6-12小时，滤去乙醇后，洗至洗脱液蒸干后无残留物，经乙醇洗净的大孔树脂干燥后保存备用；(2)将干燥后的大孔树脂放入含有甘露聚糖酶的乙酸-乙酸钠缓冲液中，缓冲液pH值为4.0-6.0，保持温度为45-60℃震荡吸附6-12小时；(3)用质量浓度为0.5-4％的戊二醛，震荡交联2-6小时，真空抽滤得到固定化甘露聚糖酶，置于4℃冰箱中储存。本发明专利技术的有益效果为：工艺简单、成本低廉、性质稳定、可重复使用；本发明专利技术的固化酶对含甘露聚糖类多糖的芦荟多糖的降解效果更为显著。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及酶的固定化
，具体是涉及一种以大孔树脂为载体的甘露聚糖酶固定化方法，及其固定化甘露聚糖酶在芦荟多糖降解方面的应用。
技术介绍
β_甘露聚糖酶是一类能够水解含β_甘露糖苷键的甘露寡糖、甘露多糖的内切酶，属于半纤维素酶类。β_甘露聚糖酶广泛应用于食品、纺织、石油工业领域。近年来， β -甘露聚糖酶的研究逐渐成为国内外的研究热点。人们在应用甘露聚糖酶的过程中，发现了游离甘露聚糖酶的一些不足之处，如稳定性差，游离甘露聚糖酶在温度、PH值、无机离子等因素的影响下容易失去活性；在水中与底物进行酶解反应后的游离甘露聚糖酶，即使还有活性也难于分离再利用；同时，很难将其从反应体系当中分离出来用于连续的工业化生厂寸ο酶的固定化是指通过某些方式将酶与载体相结合，酶被载体材料束缚或限制于一定区域内进行其特有的催化反应，并可回收及重复使用的一类技术。酶的固定化方法很多， 常用的有吸附法、键合法、交联法和包埋法。各自优缺点见表I。表I酶的几种不同固载方法的比较方法优点缺点吸附法 ^ 交联法包埋法操作条件温和、简单、成本低、 载体可再生、重复使用酶的结合力强、稳定、载体与键合方法多种多样交联剂种类很多，技术简单，酶结合力较强，稳定性较高包埋材料和方法很多，条件温和， 适用广结合力弱、载酶量较少，对ΡΗ、 离子强度、温度敏感键合条件激烈，易引起酶失活，成本高，有些试剂毒性很大交联条件激烈，机械性能较差仅可用于小分子底物，常有扩散限制问题，不适于柱操作固定化甘露聚糖酶技术以键合法和交联法研究最为广泛，为甘露聚糖酶的广泛应用提供了重要的理论依据。但是，这两种方法普遍存在的缺陷是甘露聚糖酶固定化效率低、加工工艺复杂、生产成本高、性质不稳定等缺陷，很难工业生产并实际应用。
技术实现思路
为了克服以上技术存在的缺陷，本专利技术提供一种以大孔树脂为载体的甘露聚糖酶固定化方法及其应用。本专利技术的目的在于提供一种以大孔树脂为载体的甘露聚糖酶固定化方法，并进一步提供固定化甘露聚糖酶在芦荟多糖降解方面的应用。本专利技术所采用的技术方案为一种以大孔树脂为载体的甘露聚糖酶固定化方法及其应用，其特征在于甘露聚糖酶固定化方法包括以下步骤(I)将大孔树脂在乙醇中浸泡6-12小时，滤去乙醇后，洗至洗脱液蒸干后无残留物，经乙醇洗净的大孔树脂干燥后保存备用；(2)将干燥后的大孔树脂放入含有甘露聚糖酶的乙酸-乙酸钠缓冲液中，缓冲液 PH值为4. 0-6. 0，保持温度为45-60°C震荡吸附4_12小时；(3)用质量浓度为O. 5-4. 0%的戊二醛，震荡交联2-6小时，真空抽滤得到固定化甘露聚糖酶，然后置于4°C冰箱中储存备用。所述的大孔树脂选用AB-8大孔吸附树脂、X-5大孔吸附树脂、D-151、D-152阳离子交换树脂中的任一种。所述固定化甘露聚糖酶，应用于含甘露聚糖类多糖的降解处理。较佳地，所述含甘露聚糖类多糖为芦荟多糖。本专利技术的有益效果为(I)本专利技术提供的固定化甘露聚糖酶，加工工艺简单、成本低廉、活性损失小、效率很高、性质稳定、可重复使用；(2)本专利技术提供的固定化方法，甘露聚糖酶的吸附率高，可以达到90%以上，比传统的吸附法吸附更加牢固，受温度和pH影响小；(3)使用本专利技术的固定化甘露聚糖酶活性降低还可以再生，避免了载体的浪费；(4)实验表明，本专利技术所得到的固化酶对含甘露聚糖类多糖的降解处理有效，尤其是对芦荟多糖的降解效果更为显著。附图说明图I为本专利技术PH值优化图2为本专利技术戊二醛浓度优化图3为本专利技术震荡交联时间优化图4为本专利技术酶液浓度优化图5为本专利技术吸附温度优化图6为本专利技术吸附时间优化图7为芦荟原多糖的红外光谱图8为芦荟原多糖降解后的红外光谱图9为芦荟原多糖分子量分布谱图10为酶解后芦荟多糖的分子量分布谱图。具体实施方式以下结合实施例及其附图作进一步说明，但并不仅限于本专利技术。实施例I :AB-8大孔吸附树脂作载体⑴用95%乙醇浸泡AB-8大孔吸附树脂12h，并不时搅拌，使其充分溶胀，用95%乙醇淋洗树脂，直到流出乙醇液与水按I : 5的比例混合且不呈现白色混浊为止，最后以去离子水反复淋洗，至水洗液无乙醇味为止；(2)将处理后的树脂放入500mL含3000U甘露聚糖酶的乙酸-乙酸钠缓冲液中，缓冲液中PH值为5. 5，保持温度为45°C震荡吸附8h。(3)用质量浓度为4%戊二醛，震荡交联3小时，真空抽滤得到固定化甘露聚糖酶， 置于4°C冰箱中储存备用。实施例2 X-5大孔吸附树脂作载体(I)用乙醇渗泡X-5大孔吸附树脂过夜，蒸馏水清洗多次，再浸泡蒸馏水清洗多次至中性，浸泡蒸馏水清洗多次至中性，一倍体积以上蒸馏水浸泡置4°C冰箱备用。(2)将处理后的树脂放入500mL含3000U甘露聚糖酶的乙酸-乙酸钠缓冲液中，缓冲液中PH值为5. 5，保持温度为45°C震荡吸附8h。(3)用质量浓度为4%戊二醛，震荡交联3小时，真空抽滤收集滤饼，真空抽滤得到固定化甘露聚糖酶，置于4°C冰箱中储存备用。实施例3 :D_151、D-152阳离子交换树脂载体(I)取一定量的D-151、D-152阳离子交换树脂用蒸馏水浸泡融胀、去杂，再用O.lmol/L HCl处理Ih后蒸馏水洗至中性，然后用O. lmol/L NaOH处理lh，再用蒸馏水洗至中性，水吸干后，置于4°C冰箱备用。(2)将处理后的树脂放入500mL含3000U甘露聚糖酶的乙酸-乙酸钠缓冲液中，缓冲液中PH值为5. 5，保持温度为45°C震荡吸附8h。(3)用质量浓度为4%戊二醛，震荡交联3小时，真空抽滤收集滤饼，真空抽滤得到固定化甘露聚糖酶，置于4°C冰箱中储存备用。不同大孔树脂的固定化效果见表2。表2不同大孔树脂的固定化效果-权利要求1.一种以大孔树脂为载体的甘露聚糖酶固定化方法及其应用，其特征在于甘露聚糖酶固定化方法包括以下步骤(1)将大孔树脂在乙醇中浸泡6-12小时，滤去乙醇后，洗至洗脱液蒸干后无残留物，经乙醇洗净的大孔树脂干燥后保存备用；(2)将干燥后的大孔树脂放入含有甘露聚糖酶的乙酸-乙酸钠缓冲液中，缓冲液pH值为4. 0-6. 0，保持温度为45-60°C震荡吸附4-12小时；(3)用质量浓度为O.5-4. 0%的戊二醛，震荡交联2-6小时，真空抽滤得到固定化甘露聚糖酶，然后置于4°C冰箱中储存备用。2.根据权利要求I所述的一种以大孔树脂为载体的甘露聚糖酶固定化方法及其应用， 其特征在于所述的大孔树脂选用AB-8大孔吸附树脂、X-5大孔吸附树脂、D-151、D-152阳尚子交换树脂中的任一种。3.根据权利要求I所述的一种以大孔树脂为载体的甘露聚糖酶固定化方法及其应用， 其特征在于所述固定化甘露聚糖酶应用于含甘露聚糖类多糖的降解处理。4.根据权利要求3所述的一种以大孔树脂为载体的甘露聚糖酶固定化方法及其应用， 其特征在于所述含甘露聚糖类多糖为芦荟多糖。全文摘要本专利技术公开以大孔树脂为载体的甘露聚糖酶固定化方法及其应用，其特征在于甘露聚糖酶固定化方法包括以下步骤(1)将大孔树脂在乙醇中浸泡6-12小时，滤去乙醇后，洗至洗脱液蒸干后无残留物，经乙醇洗净的大孔树脂干燥后保存备用；(2)将干燥后的大孔树脂放入含有甘露聚糖酶的乙酸-乙酸钠缓冲液中，缓冲液pH值为4.0-6.0，保持温度为45-60℃震本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：梁振益，孙达远，林栖凤，黄小周，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。