用于核酸检测的层析系统技术方案

本发明专利技术提供了一种用于对样品中的核酸进行分离和序列特异性检测的试条，一种包含本发明专利技术中的试条和一种落射荧光装置以对核酸进行序列特异性检测的系统，和一种使用该试条对核酸进行定性和/或定量测定的方法。本发明专利技术中的试条、系统和方法容易使用，且由于其高灵敏度和特异性可在相对于常规检测更短的分析时间内提供精确和可靠的结果。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术主要涉及到核酸检测领域。本专利技术特别涉及到一种基于横向流层析分离和样品中核酸的序列特异性检测的试条、方法和系统。
技术介绍
在不可避免地需要进行核酸检测的研究领域和工业领域中，不论该检测是涉及到确认目标核酸的存在与否还是对核酸进行定性或定量测定，主要使用涉及到核酸的序列特异性杂交的方法。该类方法中的其中一种是基于聚合酶链反应的测试，其中对特定的目标序列进行选择性扩增并对扩增产物进行凝胶电泳分析，之后使用序列特异性杂交方法如 southern或northern blot或使用染料染色显像。然而，上述方法是一个复杂的过程，其中无论是样品的制备和反应还是显像都需要长时间的工作。而且该反应结果不很灵敏，需要大量的进样，而且对不同反应条件如杂交时间或温度，以及反应缓冲溶液或所用的引物等十分敏感。因此，为了设定最佳反应条件以获得可靠结果，需要高度熟练的技术人员进行多次实验。核酸检测被广泛应用于临床，如疾病的诊断或筛查或治疗的预后。因此，有对用于检测样品中核酸的简易、方便以及可靠的系统或产品或方法的需求。
技术实现思路
本专利技术涉及到一种用于核酸检测和/或量化以确定一种特定的核酸序列在样品中的存在与否及含量的试条、系统和方法。本专利技术基于横向流层析分离及样品中的核酸序列特异性检测，易于使用并由于其相对于传统系统的高灵敏度和特异性可在较短的分析时间内得到精确可靠的结果。一方面，本专利技术涉及一种用于对分析物，即样品中的核酸分子，进行定性和/或定量的序列特异性测试的横向流检测试条。本专利技术的试条包含提供样品涂布点的样品垫； 吸收垫；以相互之间进行毛细流动传输的方式位于样品垫与吸收垫之间的层析介质，所述层析介质包含至少一种捕获分子，所述捕获分子能够与涂布在样品垫上的样品中的特定核酸序列进行序列特异性杂交；和固相载体，用于支撑以相同平面位于所述固相载体上以容许相互之间进行毛细流动传输的层析介质、样品垫和吸收垫。在一个实施方式中，所述固相载体具有样品垫和吸收垫分别位于一端的两个末端。在另一个实施方式中，所述至少一种捕获分子固定于所述层析介质上的已知的特定位置。另一方面，本专利技术涉及到用于对分析物，即样品中的核酸分子，进行序列特异性检测的横向流定性和/或定量检测试条。本专利技术中的试条包含提供样品涂布点的样品垫；吸收垫；以相互之间进行毛细流动传输的方式位于样品垫与吸收垫之间的层析介质，所述层析介质包含至少一种捕获分子，所述捕获分子能够与涂布于样品垫的样品中并用荧光材料或生物素标记且为聚合酶链反应产物的特定核酸序列进行序列特异性杂交；和固相载体， 支撑以相同平面位于所述固相载体上以容许相互之间进行毛细流动传输的层析介质、样品垫和吸收垫。在一个实施方式中，固相载体具有样品垫和吸收垫分别位于一端的两个末端。另一方面，本专利技术提供了上述试条，其中所述捕获分子具有来自于人类乳头状瘤病毒(HPV)的核酸序列。另一方面，本专利技术提供了上述试条，能够检测并区分选自由16、18、沈、31、33、35、 39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、70、73、82、6、11、40、42、43、44、54、61、72、81和 CP108 组成的组中的不同HPV亚型。另一方面，本专利技术提供了一种用于检测样品中核酸的系统，该系统包含本专利技术中的试条和用于检测来自本专利技术任一试条中的捕获分子的信号的落射荧光检测装置。在一个实施方式中，所述落射荧光为激光诱导的。1.另一方面，本专利技术提供了一种使用本专利技术中所述任一试条对样品中的核酸进行定性和/或定量检测的方法，该方法包括以下步骤将含有以荧光或生物素标记的目标核酸序列的液体样品涂布到本专利技术中的试条的样品垫上；使该液体样品流到试条的吸收垫， 其中在试条特定位置上的捕获物与目标核酸序列进行序列特异性反应以形成杂交体；和使用落射荧光检测装置检测杂交体上的标记物发出的信号，其中信号的存在表面存在目标核酸，或该信号用于量化目标核酸在样品中的量。在一个实施方式中，所述捕获分子具有来自于人类乳头状瘤病毒(HPV)的核酸序列。另一方面，本专利技术提供了上述方法，能够检测并区分选自由16、18、沈、31、33、35、 39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、70、73、82、6、11、40、42、43、44、54、61、72、81和 CP108 组成的组中的不同HPV亚型。上述摘要仅仅是示例性的而并不局限于此。除了上述示例性的方面、实施方式和特征，参照附图和以下详细说明，其它各方面、实施方式和特征也是显而易见的。附图说明参照以下详细描述以及附图，本专利技术的更完整的价值以及很多随之而来的优势会逐渐变得显而易见，同样也会被更好地理解，其中图1为本专利技术中试条的一个实施方式的示意图。附图标记表示101 横向流试条； 102 样品垫；103 吸收垫；104 层析介质；和105 信号检测区域(也被称为分析物检测区域)。图2为激光诱导落射荧光检测装置的示意图。附图标记表示108 检测窗口 ； 109 样品涂布点；Iio 试条托架；200 激光诱导落射荧光检测装置；201 激光；202 激光光束控制透镜；203 聚光透镜；204 荧光滤镜；205 聚光透镜；206 空间滤波器；和207 光探测器。图3为DNA固定实验的结果，以优化在硝酸纤维素膜上的固定条件。(a)无紫外照射；(b)对膜进行一小时的干燥，之后进行紫外照射；(c)在没有对膜进行干燥的条件下进行紫外照射。黄色区域表示被固定的DNA。图4为PCR扩增产物在2%琼脂糖凝胶上的电泳结果，其中分别使用Cy5标记的 HPV 16和18的特异引物。红色表示DNA的存在，M表示尺寸标记物。图5为通过确定核酸序列间的交叉反应以检测HPV的不同亚型的实验结果。使用本专利技术中一个实施方式中的系统对样品中的HPV 16进行检测，其中HPV 16和18的特异 DNA被用作捕获分子。图6为通过确定核酸序列间的交叉反应以检测HPV的不同亚型的实验结果。使用本专利技术中一个实施方式中的系统对样品中的HPV 18进行检测，其中HPV 16和18的特异 DNA被用作捕获分子。图7为PCR扩增产物在2%琼脂糖凝胶上的电泳结果，其中分别使用生物素标记的HPV 16和18特异引物，并使用被鉴定为HPV阳性的模版。在PCR中使用不同的循环数。 M 尺寸标记物，IOObp ladder ； 1 :20次PCR循环；2 10次PCR循环；3 :5次PCR循环。图8为使用本专利技术中一个实施方式中的系统对图7中的扩增产物进行分析的结果。蓝线阴性对照；红线20次PCR循环；黄绿线10次PCR循环；紫线5次PCR循环。图9为PCR扩增产物在2%琼脂糖凝胶上的电泳结果，所用反应条件与图7相同， 除了在模版上使用了不同样品。M 尺寸标记物，IOObp ladder ； 1 :30次PCR循环；2 :20次 PCR循环；3 10次PCR循环；4 5次PCR循环；5 3次PCR循环。图10为使用本专利技术中一个实施方式中的系统对图9中的扩增产物进行分析的结果。浅蓝线阴性对照；蓝线30次PCR循环；红线20次PCR循环；黄绿线10次PCR循环；紫线5次PCR循环。图11为使用本专利技术中一个实施方式中的系统对PCR产物进行分析的结果，分别本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔义烈，南基风，郑东锡，金成中，
申请(专利权)人：韩国帕克特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：