miRNA的抗肿瘤作用、实施方法及用途技术

本发明专利技术涉及一种miRNA的抗肿瘤作用、实施方法及用途，属于生物医学材料技术领域。具体涉及miR-199a/b-3p在抑制肝癌生长中的用途和应用方法。本发明专利技术的miR-199a/b-3p在肝癌中表达显著低于正常肝组织；此外，本发明专利技术的miR-199a/b-3p在体外、体内均能够抑制肝癌细胞的生长。本发明专利技术的miR-199a/b-3p可用于制备预防或治疗肿瘤的药物，尤其是用于制备预防或治疗肝癌的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术和医学领域，具体地说，本专利技术涉及一种RNA小分子——miR-199a/b-3p的抗肿瘤作用、实施方法及用途。
技术介绍
微小RNA(micro RNA，简称miRNA)是一类短序列、非编码、具有调控功能的单链小分子RNA，长约18～24nt。关于miRNA的最早报道是1993年Lee等报道的在秀丽线虫(C.elegants)体内发现的一种呈时间特异性表达的小分子RNA，即可调节线虫发育的lin-4【Lee，R.C.等，The C.elegans heterochronic gene lin-4 encodes small RNAs with antisense complementarity to lin-14.Cell.1993，75：843 854】。2000年，Reinhart等【Reinhart，B.J.等，The 21-nucleotide let-7 RNAregulates developmental timing in Caenorhabditis elegans.Nature.2000，403：901906】又发现不同时期表达的let-7。到目前，公用miRNA数据库中已收录了数百种人类miRNA序列，其中三分之二已被实验证实。微小RNA来源于长度约为1000bp的长链RNA初始转录产物(Pri-miRNA)，Pri-miRNA分子在细胞核中经Drosha酶剪切形成长度约60～80nt的具有茎环结r>构的miRNA前体(Pre-miRNA)。miRNA前体转运至胞质后，被进一步加工成miRNA。微小RNA在动植物细胞中通过对目标mRNA的切割和转录抑制发挥重要作用，参与细胞生长、组织分化和肿瘤形成等多种过程。miRNA在物种间具有高度的保守性、时续性和组织特异性。目前认为miRNA在细胞凋亡、增殖、分化、血管生成及肿瘤形成等方面均具有重要的调节作用，参与人体大约30％的基因调节，与肿瘤、心血管疾病、肝病、免疫紊乱及代谢紊乱等多种发病有关。在上述疾病中，miRNA与肿瘤的关系是很多研究的重点。已经发现若干miRNA通过负调控基因的表达与慢性淋巴细胞性白血病、肺癌、乳腺癌、结肠癌高度相关。miRNA的正调控靶基因现象是最近的发现，具体机制还不明确。有学者提出了“癌microRNA”(OncomiRs)”的观点【Esquela-Kerscher，A.等，Oncomirs-microRNAs with a role in cancer.Nat Rev Cancer.2006，6：259-269；Hammond，SM.等，MicroRNAs as oncogenes.Curr Opin Genet.2006，16：4-9】，即认为某些miRNA的异常表达在肿瘤的发生发展过程中充当了类似癌基因的角色。miR-199a/b-3p表达于人基因组的3个位置，分别为miR-199a-1(19号染色体)、miR-199a-2(1号染色体)和miR-199b(9号染色体)。miRNA的表达主要由miRNA基因首先表达为miRNA前体(pri-miRNA)，pri-miRNA经转运出核后，由Dicer酶剪切成为pre-miRNA，pre-miRNA表现为典型的茎环结构，茎部序列不完全互补配对。其茎部序列经剪切后成为成熟体miRNA。5p端的序列为5p成熟miRNA，3p端的序列为3p成熟miRNA。miR-199a-1，miR-199a-2，和miR-199b三个miRNA基因所表达的miRNA成熟体具有相同的3p段序列，即miR-199a/b-3p。miR-199a/b-3p在人肝脏中的表达主要来源于基因组的miR-199a-2基因。肿瘤是危害人类健康的主要疾病之一，其造成了诸多患者和家庭的痛苦，也给医疗卫生系统带来了极大的压力。目前虽然已开发和应用了多种肿瘤治疗的药物和方法，但本领域仍然迫切需要开发出可有效地治疗和预防肿瘤的新型药物。以原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)为例，其是我国常见的恶性肿瘤，患者死亡率在所有恶性肿瘤中居第三位。根据世界卫生组织的统计，全球每年新增约60万HCC患者，而每年死于肝癌的人数也约为60万。HCC的发生是一个多步骤渐进的过程，和慢性肝炎及肝硬化紧密相关。我国约有1.2亿乙肝病毒携带者，占全球感染人数的1/3。因此，如何有效的干预HCC的发生并治疗HCC患者是一个紧迫的重要问题。目前，HCC患者在手术或药物治疗后的转移复发比例依然很高，5年存活率仅约为50％。因此，探求HCC的发病机制并寻求有效的治疗靶点十分重要。近年来，随着miRNA功能研究的不断深入，miRNA在肝癌发生发展过程中的作用也逐渐为研究者所关注。自2006年Murakami等【Murakami，Y.等，Comprehensive analysis of microRNA expression patterns in hepatocellularcarcinoma and non-tumorous tissues.Oncogene.2006，25：2537-45】首次报道miRNA在正常肝脏和HCC中的表达差异以来，已有多篇文献报道了HCC中异常表达的miRNA。例如，对HCC组织miRNA表达谱进行基因芯片研究发现，肝癌组织中miR-222、miR-221和miR-31上调，miR-223、miR-126和miR-122a下调【Wong，QW.等，MicroRNA-223is commonly repressed in hepatocellular carcinoma andpotentiates expression of Stathminl.Gastroenterology.2008；135：257-269】。对52例肝癌前和HCC患者进行研究发现，miR-122、miR-10和miR-10a在肝癌中表达上调，miR-145下降【Varnholt，H.等，MicroRNA gene expression profile ofhepatitis C virus associated hepatocellular carcinoma.Hepatology.2008；47：1223-1232】。对肝硬化患者的肝组织miRNA情况也开展了研究，发现肝硬化发病与miRNA表达异常有关，而且是发生肝癌的重要参考指标，研究者还对人肝癌标本进行了研究，发现miR-21和miR-301在肝癌中表达明显，且与本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.微小RNA miR-199a/b-3p或其前体在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应
用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR-199a/b-3p的序列如SEQ
ID NO：1所示。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR-199a/b-3p的前体在对
象体内经加工转化为miR-199a/b-3p。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR-199a/b-3p或其前体来
自：人、大鼠、小鼠、犬、马、牛、兔或猴。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤选自：肝癌、乳腺
癌、胶质瘤、结肠癌、子宫颈癌、肺癌、胰腺癌、胃癌、或膀胱癌。
6.如权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹雪涛，侯晋，李楠，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：