本发明专利技术公开了一种抗人肿瘤坏死因子α的人源化Fab和人源化抗体及其用途。本发明专利技术所提供的人源化Fab含有氨基酸序列如序列27的第1-120位、序列25的第1-120位、序列1或序列3所示的重链可变区，和氨基酸序列如序列31的第1-109位、序列29的第1-109位、序列15、序列9、序列11、序列7、序列13或序列5所示的轻链可变区。本发明专利技术所提供的人源化抗体含有氨基酸序列如序列1或序列3所示的重链可变区，和氨基酸序列如序列15、序列9、序列11、序列7、序列13和序列5中的任一种所示的轻链可变区。本发明专利技术所提供的人源化Fab和人源化抗体具有较高的亲和力和生物活性，能很好地中和人TNFα，有效的治疗TNFα相关疾病。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种抗人肿瘤坏死因子α的人源化Fab和人源化抗体及其用途。
技术介绍
自身免疫性疫病的发生发展是一个由许多有活性的细胞因子调控失衡的复杂过程。在众多因子中，TNFa被证实在免疫调节中发挥重要作用，但其过量表达被证实是导致自身免疫性等疾病主要因素之一。因此，抑制TNFa活性的生物药成为治疗该类疾病中最为成功的疗法之一，已被批准治疗的适应症，主要包括类风湿性关节炎(Mieumatoid Arthritis)、克隆病(Crohn，s Disease)、斑片性银屑病(Plaque Psoriasis)、银屑病关节炎(Psoriatic Arthritis)、强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis)、溃疡性结肠炎 (Ulcerative Colitis)和幼年特发性关节炎(Juvenile Idiopathic Arthritis)，同时还有许多其他相关疾病正在开展临床试验。欧美市场上已经有针对TNF α的抗体药物和类似抗体的Fc融合蛋自药物，如 Remicade。Remicade在体内的半衰期较短，大约为9天。此外，Remicade虽有良好的结合亲和性、生物活性和临床疗效，但作为一个包含1/3鼠源序列和2/3人源序列的嵌合性抗体，约有10% -47%的患者在使用Remicade后发生了免疫反应，通常产生人抗小鼠抗体 (HAMA)，影响该抗体的疗效和长期应用。因此，十分需要寻求一种人源化程度高的抗TNF α 抗体，最大程度减少其中鼠源序列比例，以降低鼠源性并能安全用于治疗人体疾病。一种常见的抗体人源化方法是将鼠源抗体可变区(VH、VK)的互补决定区(CDR)部分移植到事先选择的人抗体框架之中，所得抗体将具有大部分人源的序列，同时又能够保留起始鼠源抗体对相同抗原的选择性，但这个过程通常导致抗体亲和力的损失。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供抗人肿瘤坏死因子α人源化抗原结合片段Fab或抗人肿瘤坏死因子α人源化抗体，该Fab或抗体与人肿瘤坏死因子α的亲和力与人鼠嵌合抗体Remicade相似，甚至更高。本专利技术所提供的抗人肿瘤坏死因子α的人源化抗原结合片段Fab，含有重链可变区和轻链可变区；所述Fab的氨基酸序列为下述al)-U)中任一种al)所述重链可变区的氨基酸序列为序列表中序列27的第1_120位或序列25的第1-120位，所述轻链可变区的氨基酸序列为序列表中序列31的的第1-109位或序列四的第1-109位；a2)所述重链可变区的氨基酸序列为序列表中序列1或序列3，所述轻链可变区的氨基酸序列为序列表中序列15、序列9、序列11、序列7、序列13和序列5中的任一种；其中序列1的第一位氨基酸残基为Glu或Gin。所述Fab由重链片段(Fd)和轻链组成；所述重链片段(Fd)由Vh和CHl组成，所述轻链由Vk和轻链恒定区组成；所述CHl氨基酸序列与人抗体重链恒定区的CHl氨基酸序列相同，所述轻链恒定区氨基酸序列与人抗体轻链恒定区氨基酸序列相同。所述Fab的Fd片段的CHl可以是任意类型(IgG、IgA、IgM、IgE、IgD)或亚类(IgGl、 IgG2、IgG3、IgG4，IgMU IgM2，IgAU IgA2，)的人源恒定区的CHl ；所述Fab的轻链恒定区可为任意类型(κ型或λ型)、亚型(λ 1、λ 2、λ 3、λ 4)、或同种异性(Km(l)、Km(2), Km(3))轻链的人源恒定区。所述CHl氨基酸序列如序列表中序列33所示；所述轻链恒定区氨基酸序列如序列表中序列19所示。在本专利技术的具体实施例中，所述Fab为下述bl)_b3)中任一种bl)KS-7F 所述重链片段的氨基酸序列为序列表中序列27，且所述轻链的氨基酸序列为序列表中序列31 ；b2)KS-7A 所述重链片段的氨基酸序列为序列表中序列25，且所述轻链的氨基酸序列为序列表中序列31 ；b3)KS-2E 所述重链片段的氨基酸序列为序列表中序列25，且所述轻链的氨基酸序列为序列表中序列四。本专利技术的另一个目的是提供抗人肿瘤坏死因子α的人源化抗体，该抗体含有重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区由上述bl)所述Fab的重链可变区突变而来，所述轻链可变区由上述bl)所述Fab的轻链可变区突变而来；所述抗体的重链可变区氨基酸序列为序列表中序列1或序列3 ；所述抗体的轻链可变区氨基酸序列为序列表中序列序列15、 序列9、序列11、序列7、序列13和序列5中的任一种；其中序列1的第一位氨基酸残基为 Glu 或 Gin。所述抗体具体为下述a-Ι中的任一种a.KSlO，其重链可变区为SH01，氨基酸序列为序列1，轻链可变区为SH08，氨基酸序列为序列15 ；b.KS03，其重链可变区为SH01，氨基酸序列为序列1，轻链可变区为SH05，氨基酸序列为序列9 ；C.KS06，其重链可变区为SH01，氨基酸序列为序列1，轻链可变区为SH06，氨基酸序列为序列11 ；d. KS12，其重链可变区为SH02，氨基酸序列为序列3，轻链可变区为SH08，氨基酸序列为为序列15 ；e.KS04，其重链可变区为SH02，氨基酸序列为序列3，轻链可变区为SH05，氨基酸序列为序列9 ；f. KS07,其重链可变区为SH02，氨基酸序列为序列3，轻链可变区为SH06，氨基酸序列为序列11 ；g.KS02，其重链可变区为SH02，氨基酸序列为序列3，轻链可变区为SH03，氨基酸序列为序列5 ；h. KS08,其重链可变区为SH02，氨基酸序列为序列3，轻链可变区为SH04，氨基酸序列为序列7 ；i.KSll，其重链可变区为SH02，氨基酸序列为序列3，轻链可变区为SH07，氨基酸序列为序列13 ；j.KSOl，其重链可变区为SH01，氨基酸序列为序列1，轻链可变区为SH03，氨基酸序列为序列5 ；LKS05，其重链可变区为SH01，氨基酸序列为序列1，轻链可变区为SH04，氨基酸序列为序列7 ；1.KS09，其重链可变区为SH01，氨基酸序列为序列1，轻链可变区为SH07，氨基酸序列为序列13。其中序列1的第一位氨基酸残基为Glu或Gln，优选Glu。上述序列中，序列1和序列3均共有120个氨基酸残基；序列5、序列7、序列13、 序列9、序列11和序列15均共有109个氨基酸残基。所述抗体由重链和轻链组成，所述重链的恒定区氨基酸序列与人抗体重链恒定区氨基酸序列相同，所述轻链的恒定区氨基酸序列与人抗体轻链恒定区氨基酸序列相同。所述抗体的重链恒定区可以是任意类型(IgG、IgA、IgM、IgE、IgD)或亚类(IgGl、 IgG2、IgG3、IgG4，IgMl、IgM2，IgAl、IgA2，)的人源恒定区；所述抗体的轻链恒定区可为任意类型(κ型或λ型)、亚型(λ 1、λ 2、λ 3、λ 4)、或同种异性(Km(l)、Km⑵、Km(3)) 轻链的人源恒定区。所述抗体的重链恒定区氨基酸序列如序列表中序列17所示；所述抗体的轻链恒定区氨基酸序列如序列表中序列19所示。所述重链的氨基酸序列为序列表中序列21 ；所述轻链的氨基酸序列为序列表中序列23。其中序列21的第1-120位氨基酸残基为所述重链的可变区，第121-450位氨基酸残基为所述重链的恒定区；序列2本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：柯潇，高小平，
申请(专利权)人：成都康弘生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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