一种造血嵌合体实时定量PCR检测及其遗传标记设计引物的方法技术

本发明专利技术提出一种利用荧光染料SYBR?green的来检测造血嵌合体的PCR实时定量检测及其遗传标记设计引物的方法，所述PCR检测方法包括步骤：收集标本；选择多态性遗传标记设计引物和探针；实时定量PCR检测造血嵌合体；人工合成12个不同稀释浓度的造血嵌合体；以及进行统计学分析。其中，所述选择遗传标记设计引物的选择标准为：包括含有至少两个以上连续的碱基不同的等位基因多态性，在一般人群中显示高度的杂合性。本发明专利技术中介绍了12个可以用于实时荧光定量来检测造血嵌合体的特异性多态性遗传标记。另外为了弥补荧光染料SYBR?green纳入双链DNA是非特异性的，同时运行熔解曲线来验证PCR产物的特异性。本发明专利技术的实时定量PCR方法所需费用便宜，保质期长，且灵敏度，为一种快捷简便而可靠的造血嵌合体的检测方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种造血嵌合体实时定量PCR (Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应)检测方法，特别涉及一种利用荧光染料STOR green来检测造血嵌合体的实时定量PCR检测及其遗传标记设计引物的方法。
技术介绍
随着异体造血干细胞用来治疗各种恶性和非恶性的血液疾病，许多病人延长了总的存活时间和无病生存时间。导致治疗失败的主要原因是疾病复发，移植物被排斥，移植物抗宿主病。因此定量分析病人异体干细胞移植后供体嵌合体是用来诊断移植物成活，早期检测和治疗疾病复发，移植物排斥反应的重要工具。异体造血干细胞移植后的嵌合体的监测已成为常规检查手段，特别是在RIC (Reduced Intensity Conditioning,降低强度条件) 的异体移植，异体干细胞移植后供体嵌合体的结果可用来指导是否进行干预治疗，特别在改变免疫抑制治疗和治疗疾病的复发起到了决定性作用。造血嵌合体的检测可以利用受体和供体多态性遗传标记或它的产物的不同来测量。目前广泛应用的方法包括细胞遗传学，红细胞分型，限制性片段长度多态性分析和免疫荧光原位杂交(Fluorescence In Sit本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：虞强，
申请(专利权)人：江苏迈健生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：