本发明专利技术涉及一种诱导杂交种桉树离体器官通过愈伤组织分化不定芽的方法，包括：获取腋芽步骤：从杂交种桉树上剪取萌芽条，消毒处理后接入培养基中萌发培养长出腋芽；生根诱导培养步骤：切取腋芽转移到MS培养基上进行继代培养长出合要求的新芽，切取新芽转移到1/2MS培养基上进行生根诱导培养至获得生根苗；新生芽培养步骤：将生根苗切掉顶芽，保留根和基部的1-4个腋芽，接种在MS培养基上进行新生芽培养；愈伤组织的诱导培养步骤：以新生芽切段为外植体接种在愈伤诱导培养基上，先暗培养再弱光照培养获得愈伤组织；分化不定芽步骤：将愈伤组织转移到分化培养基上继代培养，获得不定芽。本发明专利技术以无性系成年桉树的萌芽条为基础，再生效率达60%左右。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物组织培养育苗
，尤其涉及一种。
技术介绍
桉树是桃金娘科(Myrtaceae)桉属(Mucalyptus)植物的统称。是世界上三大速生树种之一。广泛分布于澳大利亚，南美洲，亚洲，欧洲等地区。桉树被广泛应用于纤维素工业、纸浆材和纤维板材，还可以作为提取单宁和精油的原料，桉树提取物被应用于化学工业，医疗等多个领域，目前已被多个国家和地区广泛种植。因此桉树具有广泛的开发利用价值。杂交种桉树在生产领域应用中占据很重要的部分，但由于现用杂交种桉树多为传统常规育种所得，遗传杂合性高，难于定向选择培育新品种，新兴的基因工程技术解决了传统育种难以解决的问题，它能够利用分子生物学技术将选择需要的目的基因通过农杆菌介导，基因枪等方式导入受体细胞内部，并通过一定的培养方法使植物细胞再生，发育成完整植株，具有高效性，针对性强的特点，是优良育种的发展方向。桉树基因育种技术大部分成功再生的实验材料是以种子为基础，种子变异大，难以应用于无性系的杂交桉树。因此需要稳定高效的组织培养、再生方法。目前在中国广泛应用的杂交树种DH32-29，广林九号等树种很少有报道具有高效的再生体系以及此体系支持的基因育种。
技术实现思路
本专利技术实施例所要解决的技术问题在于，提供一种，以快速、稳定地繁殖并选育优良品种。为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案一种，包括如下步骤获取腋芽步骤从生长3-5年、生长正常无病虫害的杂交种桉树上剪取萌芽条，所得萌芽条经消毒处理后再接入培养基中进行萌发培养长出腋芽；生根诱导培养步骤切取腋芽转移到添加有0. 1-1. Omg/L 6-苄基嘌呤和0. 01-0. 5mg/ L萘乙酸的MS培养基上在光照条件下进行继代培养，并每隔21- 天转移到相同的培养基上继续培养，直至长出符合要求的新芽，再切取新芽转移到添加有0. 1-1. Omg/L 3-吲哚丁酸的1/2MS培养基上在光照条件下进行生根诱导培养至获得生根苗；新生芽培养步骤将生根苗切掉顶芽，保留根和基部的1-4个腋芽，接种在含质量百分比3-10%蔗糖的MS改良培养基上进行新生芽培养；愈伤组织的诱导培养步骤以新生芽切段为外植体，接种在含0. 1-2. Omg/L N-苯基-N-1, 2，3-噻二唑-5-脲、0. 01-0. 15mg/L 萘乙酸、20. 0-200. Omg/L 腐胺和 3. 0-30. Omg/ L亚精胺的愈伤诱导培养基上，暗培养5-10天，再转移到弱光照培养12-14天，获得愈伤组织；分化不定芽步骤将获得的愈伤组织，转移到含0.2-2.0mg/L 6-苄基嘌呤、0.05-0. 5mg/L萘乙酸、10. 0-40. Omg/L腐胺和0. 5-3. Omg/L亚精胺的分化培养基上在光照条件下继代培养，且每隔21天转移到相同的分化培养基上继续培养，培养14-100天即获得不定芽。进一步地，获取腋芽步骤中，对所得萌芽条进行如下消毒处理将萌芽条剪去叶片置于自来水下冲洗30分钟，然后再将萌芽条截为每段包含1-2个腋芽的小段，用体积百分比75%乙醇浸泡20-30秒，再用无菌水冲洗2次以及用质量百分比0. 1%升汞浸泡5分钟， 倒出升汞，用无菌水冲洗萌牙条小段4-6次；修剪成0. 5-1. Ocm长的带腋芽的茎段，质量百分比0. 1%升汞浸泡2分钟；倒出升汞，用无菌水冲洗4-6次。进一步地，获取腋芽步骤中，接入培养基的萌芽条在温度为2348°C的条件下暗培养21- 天，等待腋芽萌发，所采用的培养基是MS基本培养基，其含有质量百分比3%蔗糖和质量百分比0. 7%琼脂，ρΗ5· 8。进一步地，生根诱导培养步骤，所切取的腋芽长0. 5^1. Ocm,而切取的新芽长1.5 2· Ocm0进一步地，生根诱导培养步骤中，腋芽的继代培养的培养条件是光照16h/天，光照强度1500-100001x，且温度为2348°C。进一步地，生根诱导培养步骤中，生根培养的培养条件是14-30天，光照16h/天， 光照强度1500-100001x，且温度为2348°C。进一步地，新生芽培养的培养条件是暗培养14-35天且温度为2348°C。进一步地，愈伤组织的诱导培养步骤中，暗培养及弱光照培养的温度范围均为 23-28°C，弱光照培养时，光照16h/天且光照强度为20-1001x。进一步地，愈伤组织的诱导培养步骤中，新生芽切段成长度为3-10mm的外植体。进一步地，分化不定芽步骤中，培养条件为光照16h/天，光照强度500-30001X且温度为23- °C。通过采用上述技术方案，本专利技术至少具有如下有益效果本专利技术以无性系成年桉树的萌芽条为基础，再生系统的再生效率达60%左右，可以应用于DH32-29、广林九号等优良品系，为利用现代生物技术对桉树的遗传改良奠定了良好的基础，具有十分重要的经济价值，本专利技术一方面可以快速繁殖并选育优良品种，另一方面为基因转化提供优良系统。具体实施例方式下面结合实例详述描述本专利技术的实施方案。需要说明的是，下述实例是说明性的， 不是限定性的，不能以下述实例来限定本专利技术的保护范围。本专利技术提供一种，包括如下步骤51、获取腋芽步骤从生长3-5年、生长正常无病虫害的杂交种桉树上剪取萌芽条，所得萌芽条经消毒处理后再接入培养基中进行萌发培养长出腋芽；52、生根诱导培养步骤切取腋芽转移到添加有0.1-1. Omg/L 6-苄基嘌呤和 0. 01-0. 5mg/L萘乙酸的MS培养基上在光照条件下进行继代培养，并每隔2148天转移到相同的培养基上继续培养，直至长出符合要求的新芽，再切取新芽转移到添加有0. 1-1. Omg/L 3-吲哚丁酸的1/2MS培养基上在光照条件下进行生根诱导培养至获得生根苗；53、新生芽培养步骤将生根苗切掉顶芽，保留根和基部的1-4个腋芽，接种在含质量百分比3-10%蔗糖的MS改良培养基上进行新生芽培养；54、愈伤组织的诱导培养步骤以新生芽切段为外植体，接种在含0.1-2. Omg/L N-苯基-N-1, 2，3-噻二唑-5-脲、0. 01-0. 15mg/L 萘乙酸、20. 0-200. Omg/L腐胺和 3. 0_30mg/L 亚精胺的愈伤诱导培养基上，暗培养5-10天，再转移到弱光照培养12-14天，获得愈伤组织；55、分化不定芽步骤将获得的愈伤组织，转移到含0.2-2.Omg/L 6-苄基嘌呤、0.05-0. 5mg/L萘乙酸、10. 0-40. Omg/L腐胺和0. 5-3. 0mg/L亚精胺的分化培养基上在光照条件下继代培养，且每隔21天转移到相同的分化培养基上继续培养，培养14-100天即获得不定芽。其中，在获取腋芽步骤中，对所得萌芽条进行的消毒处理具体如下将萌芽条剪去叶片置于自来水下冲洗30分钟，然后再将萌芽条截为每段包含1-2个腋芽的小段，用体积百分比75%乙醇浸泡20-30秒，再用无菌水冲洗2次以及用质量百分比0. 1%升汞浸泡5分钟，倒出升汞，用无菌水冲洗萌牙条小段4-6次；修剪成0. 5-1. Ocm长的带腋芽的茎段，质量百分比0. 1%升汞浸泡2分钟；倒出升汞，用无菌水冲洗4-6次。此外，获取腋芽步骤中，接入培养基的萌芽条在温度为2348°C的条件下暗培养 21-28天，等待腋芽萌发，所采用的培养基是MS基本培本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孟丽娜，郭棣，陈方，江淑珍，孙长斌，张兰英，
申请(专利权)人：普罗米绿色能源深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：
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