本发明专利技术涉及用于诱导针对目标抗原的免疫应答的免疫原性组合物。尤其是，本发明专利技术提供免疫原性组合物，其包括抗原-载体缀合物，其中载体是含信号肽的细菌毒素。本发明专利技术也提供产生具有增强的免疫原性的免疫原性组合物的方法，包括在抗原-载体缀合物(例如半抗原-载体缀合物)中将信号肽添加到细菌载体。本发明专利技术也提供使用这些免疫原性组合物在受试者中诱导针对半抗原的免疫应答的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含具有信号肽的细菌毒素作为载体的半抗原-载体缀合物和它们在免疫原性组合物中的用途
本专利技术涉及用于诱导针对目标抗原的免疫应答的免疫原性组合物。尤其是，本专利技术提供包括抗原-载体缀合物的免疫原性组合物，其中载体是含信号肽的细菌毒素。本专利技术也提供产生具有增强的免疫原性的免疫原性组合物的方法，包括在抗原-载体缀合物 (例如半抗原-载体缀合物)中将信号肽添加到细菌载体。本专利技术也提供使用这些免疫原性组合物在受试者中诱导针对半抗原的免疫应答的方法。
技术介绍
细菌毒素-半抗原缀合物是目前临床试验中作为对于药物成瘾的治疗剂。在这些持续试验中，当将含半抗原/药物(例如，可卡因-细菌毒素缀合物或烟碱-细菌毒素缀合物)的免疫原性组合物施用于成瘾的个体时，引起特异于药物的抗体。例如，当治疗组合物是可卡因-载体缀合物时，治疗诱导抗-可卡因抗体应答，其降低受试者血流或粘膜组织中的可卡因，由此降低药物的心理学成瘾性质。用烟碱-载体缀合物处理诱导抗-烟碱抗体及减少来自烟碱使用的满足感。专利技术概述载体是细菌毒素的药物-载体缀合物的初始临床成功提出了对具有甚至更大的免疫原性的药物-细菌毒素缀合物的需求。具有增强的免疫原性的药物-细菌毒素缀合物的产生具有以更少剂量，以更低剂量，和/或以更大的剂量之间的时间间隔施用的临床优势。具有更大的潜力的缀合物的利用度也将大大辅助所述疫苗的大规模产生。本专利技术部分基于如下发现，包括缀合于含信号肽的霍乱毒素B (CTB)载体的烟碱的半抗原-载体缀合物相比缺乏信号肽的烟碱-CTB缀合物具有增强的免疫原性。本文提供免疫原性组合物，其包括细菌毒素，免疫原性通过含信号肽增强。在一实施方式中，信号肽是细菌毒素的内源性信号肽或其片段。在一实施方式中，信号肽包括氨基酸序列Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly。在其他实施方式中，信号肽包括氨基酸序列 Gly-Tyr-Ala-His-Gly。在其他实施方式中，信号肽包括氨基酸序列Tyr-Ala-His_Gly。在其他实施方式中，信号肽包括氨基酸序列Ala-His-Gly。在其他实施方式中，信号肽包括氨基酸序列His-Gly。在其他实施方式中，信号肽包括单Gly残基。在一些实施方式中，本专利技术的，免疫原性组合物包括一种或更多这些肽的混合物。在本专利技术的另一实施方式中，免疫原性组合物包括含信号肽的细菌毒素，选自 细菌ADP-核糖基化外毒素亚基肽，霍乱毒素B (CTB)大肠埃希氏菌(Escherichia coli) 热-不稳定的肠毒素(LT)，白喉毒素，破伤风类毒素，百日咳毒素和丝状血凝素，志贺毒素及假单胞菌外毒素。其他有用的细菌毒素载体包括具有增强粘膜应答的能力的任何细菌毒素，例如，细菌毒素的LTB家族中的任何毒素。在一些实施方式中，细菌毒素载体含其内源性信号肽。在一些实施方式中，本专利技术的细菌毒素载体，例如CTB或任何上述的细菌毒素，含异源信号肽。本专利技术提供免疫原性组合物，其包括抗原和载体，其中载体是含信号肽的细菌毒素和抗原是针对其期望产生免疫应答的任何分子。在本专利技术的一实施方式中，抗原缀合于载体。在一些实施方式中，抗原是半抗原。本专利技术部分基于如下发，含信号肽的细菌毒素载体相比缺乏信号肽的细菌毒素载体提供更大的针对缀合的半抗原的免疫应答。在一些实施方式中，半抗原是已知当以与缺乏信号肽(或信号肽不稳定，及期望增强的免疫)的细菌毒素的缀合物存在时具有免疫原性的半抗原。在本专利技术的一些实施方式中，缀合于含信号肽的细菌毒素的半抗原是烟碱或烟碱的衍生物。在一些实施方式中，半抗原是可卡因或另一成瘾药物。在一些实施方式中，半抗原是病原体的抗原。在一些实施方式中，抗原-细菌毒素缀合物中的抗原不是半抗原。本专利技术也提供使用上述的免疫原性组合物在受试者中诱导针对半抗原的免疫的方法。本专利技术也提供产生包括含信号肽的细菌毒素载体的免疫原性组合物的方法。在一些实施方式中，方法涉及在细胞内表达细菌毒素，其中细菌毒素含信号肽。在一些实施方式中，细菌毒素是CTB，而产生其的细胞是霍乱弧菌(Vibrio ch0lerae)213株。附图说明图1. rCTB(重组霍乱毒素B)的氨基酸序列。图2.霍乱弧菌(V. cholerae)213和401中2种rCTB表达系统的比较。当在213 株中产生时，检测rCTB的形式含达7个氨基酸长度的信号序列。当rCTB在401株中产生时检测不到稳定的信号序列。图3. (A)许多可能的，任意标记的，半抗原-载体缀合物的“分支”的表示，鉴定用于容易理解用于本专利技术的实践的适合的化合物和缀合物。(B)可能的，任意标记的，半抗原-载体缀合物的“分支”的表示，鉴定用于容易理解本专利技术的实践中使用的适合的化合物和缀合物，其中Q'是修饰的含T-细胞表位的载体，例如修饰的蛋白载体。图4.在本专利技术的免疫原性组合物的制备中有用的烟碱和一些其衍生物和代谢物的表示。专利技术详述使用本专利技术的方法和组合物，及更尤其，本文所示技术，本领域技术人员可将任何选择的含信号肽的细菌毒素载体与任何选择的抗原(例如，半抗原)连接，以制造本专利技术的抗原-载体缀合物。任意数的载体和抗原和/或半抗原可存在于本专利技术的单个缀合物分子。1.用于本专利技术的免疫原性组合物的载体本专利技术提供包括抗原-载体缀合物(例如半抗原-载体缀合物)的免疫原性组合物，其中载体是含信号肽的细菌毒素。在一些实施方式中，细菌毒素含其内源性信号肽。在一些实施方式中，细菌毒素已经加工为含信号肽。在一些实施方式中，细菌毒素保留其信号肽，例如，其未从细菌毒素去除。在本专利技术中，免疫原性组合物包括抗原(例如半抗原)及载体，其中载体是含信号肽的细菌毒素。在本专利技术的一实施方式中，抗原缀合于载体。在一些实施方式中，细菌毒素来自革兰氏阴性细菌。在一些实施方式中，毒素来自革兰氏阳性细菌。在一些实施方式中，革兰氏阴性细菌是大肠埃希氏菌(Escherichia coli)。在一些实施方式中，细菌是革兰氏阳性芽孢杆菌，葡萄球菌，链球菌，链霉菌或柔膜体(支原体)。在一些实施方式中， 载体是细菌外毒素。在一些实施方式中，载体是已经修饰而降低其毒性的细菌毒素。用于根据本专利技术使用的细菌毒素包括，但不限于，霍乱毒素，优选CTB(包括重组CTB(rCTB))，大肠埃希氏菌(Escherichia coli)毒素，例如热-不稳定的肠毒素(LT)，热-稳定的外毒素(ST)，细胞毒性坏死因子(CNF)，细胞致死性肿胀毒素(CLDT)，或肠聚集性大肠埃希氏菌 (E. coli)热-稳定的毒素(EAST)，白喉毒素(Dtx)，破伤风毒素，志贺毒素，肉毒毒素，葡萄球菌毒素，例如金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus) α毒素，剥脱素B或杀白细胞素，葡萄球菌毒性休克综合征毒素(TSST-I)，葡萄球菌肠毒素或剥脱性毒素，链球菌毒素， 例如肺炎链球菌(Str印tococcus pneumoniae)的肺炎链球菌溶血素，链球菌溶血素0，红疹毒素(链球菌致热外毒素(SPE))，及酿脓链球菌(Str印tococcus pyogenes)的其他致热毒素，梭菌毒素，例如难辨梭菌(Clostridium difficile)的毒素A/毒素B，ι家族，C2 家族(毒素C和D)，或C3毒素，或肉毒梭菌(本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.03.09 US 61/209,6291.免疫原性组合物，所述组合物包括(i)具有包括氨基酸序列Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly，或其C-端片段的信号肽的霍乱毒素B (CTB)；及 ( )半抗原，其中组合物能诱导针对成瘾药物的免疫应答。2.权利要求1的免疫原性组合物，其中针对成瘾药物的免疫应答大于由与权利要求1 的相同但缺少所述信号肽的免疫原性组合物诱导的针对成瘾药物的免疫应答。3.权利要求1的免疫原性组合物，其中成瘾药物是可卡因。4.权利要求1的免疫原性组合物，其中成瘾药物是烟碱。5.权利要求1 4中任一项的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物包括佐剂。6.权利要求5的免疫原性组合物，其中所述佐剂是氢氧化铝。7.免疫原性组合物，所述组合物包括(i)具有包括氨基酸序列Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly，或其C-端片段的信号肽的 CTB ；及( )烟碱或其衍生物，其中组合物能诱导针对烟碱的免疫应答。8.权利要求7的免疫原性组合物，其中针对烟碱的免疫应答大于由与权利要求7的相同但缺少所述信号肽的免疫原性组合物诱导的针对烟碱的免疫应答。9.权利要求7或8的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物包括佐剂。10.权利要求9的免疫原性组合物，其中所述佐剂是氢氧化铝。11.在受试者中诱导针对成瘾药物的免疫应答的方法，包括给受试者施用有效量的免疫原性组合物，所述组合物包括(i)具有包括氨基酸序列Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly，或其C-端片段的信号肽的霍乱毒素B (CTB)；及 ( )半抗原，其中组合物能诱导针对成瘾药物的免疫应答。12.权利要求11的方法，其中成瘾药物是烟碱。13.权利要求11的方法，其中成瘾药物是可卡因。14.在受试者中诱导针对烟碱的免疫应答的方法，包括给受试者施用有效量的免疫原性组合物，所述组合物包括(i)具有包括氨基酸序列Ala-Pro-Gly-Tyr-Ala-His-Gly，或其C-端片段的信号肽的霍乱毒素B (CTB)；及(...
【专利技术属性】
技术研发人员：威廉·亨利，
申请(专利权)人：威廉·亨利，
类型：发明
国别省市：
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