利用适体的靶物质检测方法技术

本发明专利技术涉及一种利用适体的靶物质检测方法及检测用试剂盒，具体地说，涉及以下靶物质检测方法及检测用试剂盒：向固定于固相载体的第1适体添加试料及第2适体使第1适体、靶物质及第2适体间形成夹层结合的靶物质检测方法及检测用试剂盒；FET传感器基础靶材检测方法及检测用试剂盒；AAO传感器基础靶材检测方法及检测用试剂盒。依据本发明专利技术的检测方法对于依据现有技术很难检测的低分子量物质也能够检测出来，从而就可以检测出与存在于溶液中的疾病相关的代谢物、环境污染物及食品毒素等，它利用能够按一贯性再生产并且能够以较低费用生产的适体，因此还可以提高其经济性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种及检测用试剂盒，具体地说，是涉及三种靶物质检测方法及检测用试剂盒向固定于固相载体的第1适体添加试料及第2适体使第1适体、靶物质及第2适体间形成夹层结合的靶物质检测方法及检测用试剂盒；FET传感器基础靶材检测方法及检测用试剂盒；还有AAO传感器基础靶材检测方法及检测用试剂品.ο
技术介绍
研发出一种能够灵敏而特异地检测溶液中较小分子的新型传感器平台对于监测与疾病相关的代谢物、环境污染物及食品毒素等是非常重要的，目前为止，对代谢物、环境污染物及毒素等具有低分子量的分析物的分析一般都是通过GC/MS或者HPLC等复杂的实验进行的，这即使是对于操作熟练的人员来说也需要很长的时间来进行检查，而且它还不适用于临场分析(on-site analysis) (Stales, C. A. et al, Environ. Toxicol. Chem., 20:2450,2001)。因此，为了能够成功实施现场的(on-site)实时检测，就需要较小刻度的装置及特异结合的试剂。因此，作为检测小物质的便携式平台，虽然已有表面等离子共振技术(surface plasmon resonance)等检测平台，但是，从原理上来说，它很难检测分子量低于400的极低分子量物质。而且，对使用17 β-雌二醇(β-estradiol，MW: 272)结合特异适体的1 μ M (272ppb)浓度进行分析的结果如图1所示，是不可能对上述低分子量物质的浓度进行分析的(Kimei ai, Biosens. Bioelecrtron., 22:2525，2007)。所以，就迫切需要研发出一种能够灵敏而特异地检测出低分子量物质新型平台。另外，为了对分析物实施灵敏而特异的检测，就需要抗体与分析物特异结合的试剂。但是，如果是低分子量的小物质，通常使动物产生抗体而言，由于其太小或者毒性太强都不能生成抗体。因此，就需要能够锁定小分子的新型特异结合的试剂。另外，适体作为单一链条DNA或者RNA分子，具有很高的亲和性，即能够特异认知靶物质的小单链寡核苷酸。适体可以用作检测分析系统中能够识别分子的生物传感器的一个要素，因此，它一直被当作抗体的替代物质。特别是，适体与抗体不同，它可以用作以毒素为主的多种有机物及无机物的靶分子，一旦将与特定物质特异结合的适体分离，可以采用自动化的低聚物合成方法以较低的费用进行连续再生产，比较经济。自1996年首次开发出利用荧光标记的适体测定靶蛋白的适体基础生物传感器之后，以这种适体的优点和结构上的特性为基础开发出了多种适体生物传感器(金延锡&邱万福，NICE，26(6): 690， 2008)。但是，利用现有适体的分析方法一直都是采用分离附着在特定物质上的适体或者利用其它物质结合等竞争分析方法，因此，就需要研发出通过更加直接而简便的方法来利用适体检测出物质的方法。另外，以碳纳米管(CNT)为基础的传感器作为检测小物质的便携式装置，是一个很有魅力的平台，它与石英晶体微量天平(quarts-crystal microbalance)、电化学阻抗分析仪(electrochemical impedance spectrometry)、表面等离子共振技术(surface ρIasmon resonance)及光寻址电位传感器(light-addressable potentiometric sensor: LAPS)等其它检测平台相比，单壁碳纳米管(swCNT)-场效应晶体管(FETs)作为小刻度装置，适合用作非常灵敏地检测化学物质的传感器(Kim，Τ. K. et al., Advanced Materials, 20:1， 2008 ； Kong, J. et al., Science, 287:622， 2000; Snow, E. S. & Perkins, F. K. , Nano. Lett. , 5:2414，200 。但是，最近用于检测小分子的swCNT-FET存在含有大部分重要的生物学代谢物或毒素，呈非液体状，仅限于气体和蒸汽状的问题。另外，由于溶液中的无极性小分子的检测并不在FET基础传感器的检测范围内，因此，溶液中小分子的检测就非常困难(Heller，I. et al, Nano. Lett., 8:591， 2008)。另外，对分析物实施特异而灵敏的检测还需要通过功能基获得使swCNT-FET化学传感器与抗体等特异结合的试剂，通常就小分子使动物产生抗体而言，由于其太小或者毒性太强都不能生成抗体。因此，本专利技术为了提供一种能够检测出小分子，特别是溶液中的小分子也能够被检测出来的新型检测方法，经过如实施例所述的一系列努力最终完成了本专利技术，即向固定于固相载体的第1适体添加试料及第2适体，使第1适体，靶物质及第2适体间形成夹层结合之后，对于双酚A等无极性低分子量的物质也能够被检测出来。另外，本专利技术将第1适体作为探测器固定于FET传感器上之后，再向其中添加试料及第2适体，然后，就可以测定电流变化，从而也可以检测出pM标准的无极性低分子物质。另外，本专利技术将适体作为探测器固定于AAO传感器上之后，再向其中添加试料，然后，就可以测定静电容量的变化，从而也可以检测出无极性低分子物质。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种溶液中的低分子物质也能够被检测出来的新型靶物质检测方法。本专利技术的另一个目的在于，提供一种溶液中的低分子物质也能够被检测出来的靶物质检测用试剂盒。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种，其包括如下几个步骤(a)向固定于固相载体与靶物质特异结合的第1适体中添加含有靶物质的试料及与上述靶物质特异结合且附着有标志物的第2适体，并使其反应的步骤；(b)分析上述标志物并检测靶物质的步骤。另外，本专利技术还提供一种，其包括如下几个步骤(a)向固定于固相载体与靶物质特异结合的第1适体中添加含有靶物质的试料及与上述靶物质特异结合的第2适体，并使其发生反应的步骤；(b)使标志物与上述第2适体结合的步骤；(c)分析上述标志物并检测靶物质的步骤。另外，本专利技术提供一种靶物质检测用试剂盒，其包括固定有与靶物质特异结合的第1适体的固相载体；以及含有与上述靶物质特异结合的第2适体检测试剂。另外，本专利技术提供一种双酚A检测用试剂盒，其特征在于，包含固定有与双酚A特异结合的第1适体的固相载体及含有与附着标志物的双酚A特异结合的第2适体的检测试剂，上述第1适体或者第2适体从序列号2至观的核酸序列中所示的适体中选择。另外，本专利技术提供一种适体标记用核酸片段，其特征在于，附着标志物并能够与适体末端互补结合。另外，本专利技术提供一种利用适体的场效应晶体管(FET)传感器基础的靶物质的检测方法，其包括如下几个步骤(a)包含基板、在上述基板两侧相互分离形成的源极及漏极、以及与上述源极及漏极接触并在基板上形成的入口，向与靶物质特异结合的第1适体作为探测器固定于上述源极表面、入口表面及漏极表面中任意一个以上的FET传感器中添加含有靶物质的试料，并与上述靶物质特异结合的第2适体的步骤；(b)测定当上述靶物质和第2适体与固定在上述FET传感器上的第1适体结合时产生的上述FET传感器的源极及漏极之间流动的电流变化并检测靶物质的步骤。另外，本专利技术提供一种靶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：金邵妍，
申请(专利权)人：东国大学校产学协力团，
类型：发明
国别省市：