本发明专利技术提供了一种柴胡皂苷α处理人神经干细胞得到神经元样细胞及其增殖的分化培养基，所述选择培养基包括液体基础培养基，其中，以所述液体基础培养基的体积为基准，所述选择培养基还含有1-500ug/mL的柴胡皂苷α、1-20体积％的胎牛血清、5-200ng/mL的人表皮生长因子和5-200ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子；还提供了使用前述分化培养基的制备该柴胡皂苷α分化试剂盒的方法；还提供了包括前述的方法获得的神经元样细胞的用于治疗神经系统疾病的药物组合物。使用本发明专利技术的选择培养基的本发明专利技术的方法能够高效分化神经干细胞，得到神经元样细胞。本发明专利技术用于治疗神经系统疾病的药物组合物能在体内修复损伤的神经细胞，并消除神经病变。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种柴胡皂苷α处理人神经干细胞得到神经元样细胞(neuron-like cells, NLC)及其增殖的分化培养基，及其试剂盒研制的方法，以及包括前述方法获得的神经元样细胞的用于治疗神经系统疾病的药物组合物。更具体地，本专利技术涉及一种柴胡皂苷 α分化人神经干细胞得到神经元样细胞的分化培养基，使用该培养基选择性的获得神经元样细胞的方法，以及包括前述方法获得的神经元样细胞的用于治疗神经系统疾病的药物组合物。
技术介绍
干细胞具有的自我复制和多分化潜能的特性，使之成为非常理想的细胞资源。但单纯神经干细胞移植存在很多问题困扰临床治疗，多种错综复杂的因素影响干细胞移植效果，其中干细胞在体内存活率低下，真正到达病灶位的干细胞分化成终端功能的细胞很少， 难以形成有效的治疗效果。在干细胞移植前先将干细胞进行诱导成功能性的成神经样细胞，后移植到体内进行治疗，可能达到比单独干细胞移植更好的疗效。神经系统有大量神经元。神经元是脑的主要成分，神经元群通过各个神经元的信息交换，实现脑的分析功能，进而实现样本的交换产出；产出的样本通过联结路径点亮丘觉产生意识。神经元细胞的病变、变性或损伤等必能引起各种神经系统疾病，如脑卒中、脑性瘫痪、脑损伤、脑出血、骨髓侧索硬化症和帕金森病等。例如，CN 1923195Α公开的由香豆素类化合物诱导神经干细胞定向分化，可分化为少突胶质前体细胞，其表明可作为诱导神经干细胞定向分化的药物，但并未公开其可以定向分化为神经元样细胞。已有文献报道了中药可以诱导间充质干细胞可以分化为神经元样细胞，例如三七总皂苷、丹参酮、硫代甘油和丹参注射液等。这些报告都表明中药可以诱导间充质干细胞转分化为神经元样细胞，而分化效率和增殖传代能力并没有确定。综上，亟需一种操作简单、成本低、分化纯度高、增殖效率高且传代细胞性质稳定的安全的获得神经元样细胞的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的通过中药高效地分化神经干细胞成神经元样细胞，并增殖不分化， 克服现有的获得和增殖神经元样细胞的方法操作繁复、成本高，分化得到的神经元样细胞纯度低、增殖效率低、容易分化变性，并且在分化和增殖过程使用的培养基中含有很多对人体有害的药物，使分化和增殖得到的神经元样细胞在制备成药物组合物时安全性差的缺点，提供一种神经元样细胞的分化培养基，使用该培养基的分化和增殖得到的神经元样细胞的方法操作简单、成本低、分化纯度高、增殖效率高且传代细胞性质稳定。本专利技术提供了一种神经干细胞分化为神经元样细胞及其增殖的分化培养基，所述分化培养基包括液体基础培养基，其中，以所述液体基础培养基的体积为基准，所述分化培养基还含有l_500ug/mL的柴胡皂苷α、1_20体积％的胎牛血清、5-200ng/mL的人表皮生长因子和5-200ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子。本专利技术还提供了一种柴胡皂苷α分化神经干细胞成神经元样细胞及其增殖的方法，其中，所述方法使用本专利技术所述的分化培养基培养所述神经干细胞。本专利技术还提供了一种柴胡皂苷α分化神经干细胞成神经元样细胞及其增殖的试剂盒研制的方法，其中，所述的试剂盒包括1)基础培养基；2)柴胡皂苷α ；3)细胞因子(人表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子)；4)消化细胞的酶以及；5)使用说明书；本专利技术还提供了一种用于治疗神经系统疾病的药物组合物，其中，所述药物组合物包括本专利技术所述从神经干细胞分化成神经元样细胞及其增殖的方法获得的神经元样细胞，以及和药学上可接受的载体或赋形剂。使用本专利技术的选择培养基的本专利技术的从神经干细胞分化成神经元样细胞及其增殖的方法，能够高效分化和大量增殖神经元样细胞，并经传代增殖的神经元样细胞仍然保持与原有的性状。由于本专利技术的选择培养基选择性强，传代培养得到的神经元样细胞纯度可达到85%以上。因此，本专利技术的方法无需使用磁珠等高成本安全性差的药物就能达到更高纯度的分离效果，避免了繁复的操作，因而降低了成本，并且由该方法得到的神经元样细胞的安全性大大提高，可以制备成本专利技术用于治疗神经系统疾病的药物组合物。本专利技术用于治疗神经系统疾病的药物组合物不仅安全性好，而且能在体内修复神经系统疾病中损伤的神经元细胞，从而为治疗神经系统疾病提供了可能。附图说明图1为实施例1和3获得的神经元样细胞表达蛋白的荧光免疫照片，其中，图IA 为鼠抗人微管联合蛋白_2IgG标记后二抗显色荧光免疫照片，图IB为鼠抗人巢蛋白IgG标记后二抗显色荧光免疫照片；图2为实施例1和3获得的神经元样细胞表达基因的PCR产物凝胶电泳检测图片；图3为使用实施例2和3获得的神经元样细胞移植治疗缺血性脑卒中大鼠模型， 移植后随着时间变化进行改良神经功能缺失评分改善曲线；图4为使用实施例2和3获得的神经元样细胞移植治疗缺血性脑卒中大鼠模型， 移植后随着时间变化进行脑损伤面积改善曲线；图5为使用实施例2和3获得的神经元样细胞移植治疗缺血性脑卒中大鼠模型， 移植后患侧纹状体内切片BrdU阳性染色NLC照片(免疫荧光显微镜放大倍数40倍)。具体实施例方式本专利技术提供了一种神经干细胞分化为神经元样细胞及其增殖的分化培养基，所述分化培养基包括液体基础培养基，其中，以所述液体基础培养基的体积为基准，所述选择培养基还含有l_500ug/mL的柴胡皂苷α、1_20体积％的胎牛血清、5-200ng/mL的人表皮生长因子(印idermal growth factor, EGF)和5_200ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)。优选地，以所述液体基础培养基的体积为基准，所述选择培养基还含有5_300ug/ mL的柴胡皂苷α、5-15体积％的胎牛血清、lO-lOOng/mL的人表皮生长因子和lO-lOOng/mL 的碱性成纤维细胞生长因子。进一步优选地，以所述液体基础培养基的体积为基准，所述选择培养基还含有50-200ug/mL的柴胡皂苷α ,5-10体积％的胎牛血清、20-50ng/mL的人表皮生长因子和20-50ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子。本专利技术的神经干细胞分化为神经元样细胞及其增殖的分化培养基可以包括本领域常用的各种基本培养基，例如，选自神经元细胞培养基、BME细胞培养基、杜尔贝可改良伊格尔(Dulbecco，s modified Eagle，s medium,DMEM)细胞培养基、DMEM/F12 细胞培养基、 Fischer' s细胞培养基、IMDM细胞培养基、199细胞培养基、MEM细胞培养基、FlO细胞培养基、F12细胞培养基和1640细胞培养基中的一种或几种。优选包括的所述基本培养基为重量比1 1的F12细胞培养基和DMEM细胞培养基。所述基本培养基的成分为本领域公知，上述列举的基本培养基名称为它们的商品名，商业上可供。本专利技术还提供了一种从胡皂苷α分化神经干细胞为神经元样细胞及其增殖的方法，其中，所述方法使用本专利技术所述的分化培养基培养所述神经干细胞。本专利技术提供的从皂苷α分化神经干细胞为神经元样细胞及其增殖的方法可以适用于各种的神经干细胞。神经干细胞属于具有一定分化程度的成体多能干细胞。理论上讲，任何来源的神经干细胞都可以应用本专利技术的方法分化和增殖得到神经元样细胞，例如骨髓、脐带血、胎盘、脐带本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种人神经干细胞分化成神经元样细胞及其增殖的分化培养基，所述分化培养基包括液体基础培养基，其特征在于，以所述液体基础培养基的体积为基准，所述选择培养基还含有１－５００ｕｇ／ｍＬ的柴胡皂苷α、１－２０体积％的胎牛血清、５－２００ｎｇ／ｍＬ的人表皮生长因子和５－２００ｎｇ／ｍＬ的碱性成纤维细胞生长因子。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：沈丽，黄启明，郝丽敏，王振光，
申请(专利权)人：北京弘润天源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11
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