通过进行培养容器内的细胞凝聚块的形成控制、凝聚块的分解控制，使细胞的增殖效率进一步提高。另外，可以在无需开放培养体系且不受细胞密度的限制的情况下计测培养容器内的细胞数。通过对培养容器施加外力，对培养容器内的细胞凝聚块的形成控制和凝聚块的分解控制的至少一方进行控制，由此进行细胞的培养。对培养容器施加外力通过从平置的培养容器的上面以规定的压入量按压搅拌构件、并使其以规定的速度沿水平方向移动来进行，由此对培养容器内的细胞凝聚块的形成和分解的至少一方进行控制。另外，提供一种计测密封容器内的液体中的计数对象物的个数的方法，其中，调节容器的至少一部分的厚度，以被调节的范围的至少一部分为测定对象范围，计测该测定对象范围内的计数对象物的个数。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于培养细胞、组织、微生物等的细胞的细胞培养方法、细胞培养装置以及容器内的计数对象物的计数方法、计数用装置。
技术介绍
近年来，在医药品的生产、基因治疗、再生医疗、免疫疗法等领域中，要求在人工的环境下高效、大量地培养细胞、组织、微生物等。在这种细胞的大量培养中，特别是在培养悬浮细胞时，通常使用具备搅拌翼的培养槽的搅拌培养是较为普遍的。但是，特别是在容易受到外力损伤的细胞或者边形成凝聚块边增殖的细胞的情况下，广泛应用不使用搅拌翼而将细胞封入培养容器中，静置(细胞沉到底面的状态下)，进行培养，随着细胞的增殖，转移到底面积较大的容器中或者增加容器个数的方法。但是，在该静置培养中，存在当细胞凝聚块随着细胞的增殖而增大时，对各细胞的氧气和营养成分的供给逐渐变得不足，增殖效率下降的问题。另外，在转移容器时，虽然会先搅拌培养液而使氧气和营养成分的不均消除，但是，存在因每次转移操作时对细胞产生的损伤而使增殖效率下降的问题。另一方面，也广泛进行时常对培养容器进行搅拌的振荡培养。例如，根据专利文献1中所述的细胞培养装置，能够以旋转、振荡等各种模式使装载培养容器的台运动，从而能够对培养容器内的培养液进行搅拌。另外，专利文献2和专利文献3中所述的细胞培养装置采用如下机制使培养容器内的液体培养基以不产生气泡的方式进行振荡，通过波动供给氧以使细胞不产生损伤。通过这些细胞培养装置的振荡方法，整个培养基被剧烈地搅拌，因此细胞各自零散地分离，氧气和营养成分扩散到整体，能够充分地供给到各细胞。另外，在这样的细胞培养中，需要配合细胞的增殖将培养液中的细胞的密度维持在适当的范围内。即，培养液中的细胞密度过大时，不能供给各细胞充分的氧气和营养，细胞增殖效率下降。另外，培养液中的细胞密度过小也得不到充分的增殖效率。因此，在细胞培养时，为了在培养中把握细胞密度，需要适当计测培养容器内的培养液中的细胞数。例如，专利文献4中公开了能够配合细胞的增殖适当维持培养液中的细胞密度的细胞培养装置。在使用这样的细胞培养装置进行细胞数的计测时，以往采用如下方法从与培养容器内相连的取样用口中采集含有培养细胞的培养液，加入规定的缓冲液调节至适于测定培养液中的细胞的密度后，注入计数板中，通过人工或机械读取其数量，从而计算细胞密度。另外，专利文献5中公开了具备拍摄单元的培养装置。根据该培养装置，能够定期获取细胞图像并保存。现有技术文献专利文献专利文献1 美国专利第5057429号公报专利文献2 国际公开2000/66706号小册子专利文献3 日本特表2007-511231号公报专利文献4 国际公开2008/136371号小册子专利文献5 国际公开2007/052718号小册子
技术实现思路
但是，根据细胞种类的不同，细胞的增殖有时在细胞单个分散的状态下难以进行， 当各个细胞发生粘附而形成适当尺寸的凝聚块时，增殖效率提高。具体而言，除了神经干细胞、胚胎干细胞、肝细胞、角膜干细胞、胰岛细胞等贴壁细胞之外，还可以举出血细胞等悬浮细胞。在这样的细胞的情况下，在以往的静置培养中，每次转移时会剧烈地搅拌培养容器，因此，此时细胞单个分散，存在所谓细胞的增殖效率下降的问题。另外，在利用专利文献1 3中所述的细胞培养装置等进行振荡培养的情况下，也同样对培养基整体进行剧烈的搅拌，成为细胞在培养基中分散悬浮的状态，因此，细胞难以形成适当尺寸的凝聚块，存在难以使细胞的增殖效率最佳化的问题。另外，在使用专利文献4中所述的细胞培养装置来计数培养液中的细胞的情况下，需要从培养容器内采集培养液，从而使培养体系开放，因此，存在混入杂菌等污染的风险。另外，根据专利文献5中所述的培养装置，虽然可以获取细胞图像，但是难以根据该图像准确地计测细胞数并得到细胞密度。S卩，利用专利文献5中所述的拍摄单元对培养容器内的细胞进行拍摄时，通过计测细胞图像的细胞数并用该细胞数除以该拍摄单元的视野内的培养液的容积，可以计算细胞密度。但是，在这样直接观察细胞容器内的细胞的情况下，如图M所示，当细胞的密度大而细胞重叠时，不能准确地计测细胞数。另外，当细胞的密度过小时，难以预测整体的密度，存在计算出的细胞密度的精度降低的问题。在像这样使用拍摄单元直接计测培养容器内的细胞的情况下，与使用现有的计数板进行实际测量的情况相比，计数板的厚度通常为0. Imm左右，与此相对培养容器的厚度为1 2cm左右，其厚度达到100 200倍。因此，自拍摄单元观察到的细胞数，即使是相同的体积密度也达到使用计数板实际测量时的100 200倍。因此，培养容器内的细胞多相互重叠，通过直接观测培养容器内的细胞来计测细胞数是很困难的。因此，本专利技术人等进行了深入研究，结果，调节培养容器的厚度，使自拍摄单元观察到的细胞数达到可计测的数量后，通过直接观测来计测培养容器内的细胞数，由此成功地得到了与实测值接近的细胞密度。本专利技术是鉴于上述情况而完成的专利技术，其目的在于，提供通过进行培养容器内的细胞凝聚块的形成控制、凝聚块的分解控制而将凝聚块调节为适当的尺寸，从而能够提高细胞的增殖效率的细胞培养装置及细胞培养方法。另外，本专利技术的目的在于，提供能够在无需开放培养体系且不受增殖的细胞密度的限制的情况下在培养环境下的任何密度范围内计测细胞数的容器内的计数对象物的计数方法及计数用装置。为了实现上述目的，本专利技术提供一种细胞培养方法，使用培养容器进行，其特征在于，通过对培养容器施加外力，进行培养容器内的细胞凝聚块的形成控制和凝聚块的分解控制的至少一方的控制，由此进行细胞的培养。另外，本专利技术的细胞培养装置，为使用培养容器培养细胞的细胞培养装置，其具有载置培养容器的装载台和以规定的压入量按压培养容器并能够以规定的速度沿水平方向移动的搅拌构件，使搅拌构件移动而对培养容器施加外力，由此对培养容器内的细胞凝聚块的形成和分解的至少一方进行控制。另外，本专利技术的容器内的计数对象物的计数方法，用于计测密封容器内的液体中的计数对象物的个数，其中，调节容器的至少一部分的厚度，以被调节的范围的至少一部分作为测定对象范围，计测该测定对象范围内的计数对象物的个数。另外，本专利技术的容器内的计数对象物的计数方法中，搅拌容器的液体，使液体中的计数对象物均等化后，对容器的至少一部分的厚度进行调节。另外，本专利技术的计数用装置，为用于对密封容器内的液体中的计数对象物的个数进行计测的计数用装置，其具有装载容器的装载台和将容器的包含测定对象范围的至少一部分调节至规定厚度的调节构件。另外，本专利技术的计数用装置还可以进一步具有如下构成具备在利用调节构件调节容器的厚度之前对容器内的液体进行搅拌的搅拌构件。另外，本专利技术的计数用装置还可以进一步具有如下构成具备拍摄单元，其对容器内的计数对象物进行拍摄；计数单元，其对拍摄到的图像内的计数对象物的个数进行计测；和驱动装置，其当计数单元的计测结果为计数对象物的个数不在规定的范围内时，驱动调节构件，将容器的至少一部分调节至规定的厚度，以使图像内的计数对象物的个数达到规定的范围内。专利技术的效果根据本专利技术，在进行细胞、组织、微生物等的细胞培养时，能够将凝聚块调节至适当的尺寸，从而能够提高细胞的增殖效率。另外，根据本专利技术，能够在不开放培养体系且不受增殖的细胞密度的限制的情况下计测细胞数。附图本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种细胞培养方法，使用培养容器进行，其特征在于，通过对所述培养容器施加外力，进行所述培养容器内的培养液中存在的细胞凝聚块的形成控制和凝聚块的分解控制的至少一方的控制，由此进行细胞的培养。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：末永亮，石崎庸一，田中乡史，户谷贵彦，太田恭平，
申请(专利权)人：东洋制罐株式会社，
类型：发明
国别省市：JP
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